Ocena odpowiedzi immunologicznej na COVID-19 (COVIDIMMUNE)

Choroba koronawirusowa 2019-2020, wywołana przez COVID-19, jest trwającą pandemią. Epidemia rozpoczęła się w Wuhan w prowincji Hubei w Chinach w grudniu 2019 r., a Światowa Organizacja Zdrowia (WHO) uznała ją za pandemię 11 marca 2020 r. Do 9 kwietnia 2020 r. potwierdzono ponad 1,4 miliona przypadków i ponad 82 000 zgonów 1. W Izraelu COVID-19 potwierdzono w ponad 9 000 przypadków i odebrał życie 70 ofiarom (09.04.2020) .

Wraz z rozległą epidemią COVID-19 zgłoszono masę badań z dużą populacją. Wu i in. stwierdzili, że średnia R0 COVID-19 wynosiła około 2,68 (95% CI: 2,47-2,86). Środki, w ramach których urzędnicy ds. zdrowia publicznego poddają kwarantannie potwierdzone i izolowane przypadki objawowe w celu ograniczenia rozprzestrzeniania się COVID-19, są powszechną praktyką stosowaną w większości krajów. Pozostaje jednak istotna kwestia dotycząca osób zakażonych bezobjawowo, które mogą rozprzestrzeniać wirusa i utrudniać kontrolę infekcji.

Problem Do tej pory początkowy nadzór koncentrował się przede wszystkim na pacjentach z ciężką chorobą, a więc na pełnym spektrum choroby. Zakres bezobjawowej choroby nie jest jasny. Mizumoto i in. sugerowany model matematyczny 17,9-33,3% są bezobjawowymi nosicielami. Inną kwestią do rozważenia jest to, czy ci bezobjawowi nosiciele rozwijają odpowiedź immunologiczną lub kontynuują wydalanie wirusa.

SARS-CoV-2, czynnik wirusowy wywołujący chorobę COVID-19, jest koronawirusem, który przenosi transbłonowe kolce glikoproteinowe (białko S) typowe dla wirusów z jego kladu. Skoki na SARS-CoV-2 pozwalają wirusowi dostać się do komórek gospodarza przez ludzki receptor enzymu konwertującego angiotensynę 2 (ACE2), obecnego w komórkach nabłonka pęcherzyków płucnych. Te skoki są ważnym celem ludzkich odpowiedzi immunologicznych i stwierdzono, że są wysoce immunogenne i indukują wytwarzanie przeciwciał. Domena wiążąca receptor (RBD) białka S jest szczególnie celem przeciwciał neutralizujących.

Test diagnostyczny u pacjentów z objawami opiera się na reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym (RT-PCR), która sprawdza obecność określonych genów COVID-19 w próbce. Jednak rośnie liczba doniesień o wynikach fałszywie ujemnych z powodu niewłaściwego pobrania próbki, niskiego miana wirusa lub niestabilności technicznej PCR.

Test serologiczny ma na celu wykrycie przeciwciał (immunoglobulina M - IgM, immunoglobulina G - IgG, immunoglobulina A - IgA) we krwi pacjenta, czyli odpowiedź immunologiczna pacjenta. Przeciwciała IgM zwykle pojawiają się w ciągu 3-7 dni od wystąpienia objawów, podczas gdy przeciwciała IgG pojawiają się w ciągu 10-14 dni. Choroby obejmujące drogi oddechowe zwykle powodują również podwyższenie poziomu IgA.

Zhao i in. opublikowali ostatnio dane wskazujące, że pacjenci z COVID-19 wykazują typowe czasy produkcji przeciwciał w odpowiedzi na ostrą infekcję wirusową SARS-CoV-2. Ogólnie rzecz biorąc, dane sugerują, że infekcja SARS-CoV-2 przebiega zgodnie z harmonogramem serokonwersji, podobnie jak w przypadku innych infekcji wirusowych. W próbie 173 hospitalizowanych pacjentów z potwierdzonymi objawami u 93,1% (161/173) rozwinęły się przeciwciała, z czego u 82,7% rozwinęły się przeciwciała IgM, a u 64,7% przeciwciała IgG. Co ważne, wszyscy ci pacjenci cierpieli z powodu objawów. Związek między poziomem objawów, wiremią i odpowiedzią immunologiczną nie został jeszcze określony.

Miejsca zamknięte, takie jak gospodarstwa domowe, mają określoną populację, która może nie mieszać się łatwo z większą otaczającą społecznością, dlatego takie miejsca mogą stanowić strategiczny sposób śledzenia pojawiających się infekcji dróg oddechowych i charakteryzowania wzorców przenoszenia wirusa, ponieważ mianownik można dobrze zdefiniować. Ponadto narażenie mieści się w obrębie danego otoczenia, a obserwacja kontaktów domowych jest generalnie bardziej wykonalna w tym dobrze zdefiniowanym otoczeniu w porównaniu z nieokreślonym. Śledzenie bliskich kontaktów z podobnymi poziomami narażenia na infekcję z przypadków pierwotnych może również pozwolić na identyfikację frakcji bezobjawowej.

Nasze rozwiązanie Celem obecnego badania jest ocena odpowiedzi immunologicznej, czyli wytworzenie przeciwciał anty-SARS-CoV-2 w przypadkach bezobjawowych, w ramach projektu badania domowego.

Planujemy ocenić ponad 1000 pacjentów z pozytywnym wynikiem COVID-19 i ich gospodarstw domowych. Plan obejmuje ocenę ich objawów, wiremii i odpowiedzi immunologicznej co 10 dni w okresie 12 tygodni. Następnie dokonano analizy przyczyn różnic w odpowiedzi immunologicznej między badanymi poprzez zsekwencjonowanie ich DNA, a przede wszystkim genu ACE2 - receptora, na który atakuje wirus.

To rzuci potrzebne światło na związek między objawami, wiremią i odpowiedzią immunologiczną. Związek między wiremią, objawami i odpowiedzią immunologiczną pozwoli na: monitorowanie postępu choroby, przewidywanie wystąpienia ciężkich objawów u pacjentów z grupy wysokiego ryzyka, określanie odporności na wirusa, a przede wszystkim lokalizowanie przewlekłych nosicieli, u których nie powstaje odporność.

Protokół Po uzyskaniu pozytywnego wyniku testu RT-PCR COVID-19 w laboratorium ośrodka medycznego Shamir, z pacjentem zostanie nawiązany kontakt telefoniczny i zostanie mu zaproponowany udział w badaniu. Po wyrażeniu zgody personel medyczny przyjedzie do domu osoby badanej i wyjaśni szczegóły badania oraz poprosi o świadomą zgodę osoby badanej i każdego z gospodarstw domowych w wieku powyżej 18 lat. Po podpisaniu świadomej zgody każdy z badanych wypełni raport objawów i dostarczy wymaz z jamy ustnej i gardła oraz próbkę krwi (10-20 cm3).

Co 10 dni w ciągu 12 tygodni badacz będzie odwiedzał dom badanych i powtarzał procedurę (kwestionariusz objawów, pobieranie krwi i wymaz z jamy ustnej i gardła).

Po ostatniej ocenie (12 tyg.), co 4-8 tyg. w ciągu 1 roku, badacz będzie odwiedzał dom badanych i wypełniał kwestionariusz objawów oraz pobierał krew.

Zestawy serologiczne:

1. ŁĄCZNIK SARS-CoV-2 IgM (Diasorin, Saluggia, Włochy)
2. ŁĄCZNIK SARS-CoV-2 S1/S2 IgG (Diasorin, Saluggia, Włochy)
3. Test immunologiczny ARCHITECT SARS-CoV-2 N IgG (Abbot, Illinois, USA)

Zestaw Rt-PCR RT-PCR zostanie przeprowadzony przy użyciu 3 starterów i 3 sond oprócz jednego startera i sondy ludzkiej RNazy.

Procedura

1. Przyjazd do domu badanych
2. Personel medyczny będzie używał odpowiedniego ochronnego sprzętu medycznego.
3. Pobieranie krwi do 3 probówek (15-20 cm3)
4. Wymaz z jamy ustnej i gardła
5. Próbki będą przechowywane w temperaturze 2-8 stopni Celsjusza.
6. Próbki zostaną zwrócone do laboratorium Shamir Medical Center w temperaturze od 2 do 8 stopni Celsjusza.
7. Przeprowadzony zostanie RT-PCR.
8. Serologia zostanie przeprowadzona przy użyciu dostępnych zestawów. Każda osoba zostanie pobrana 9 razy (co 10 dni w ciągu 12 tygodni oprócz pierwszego kontaktu). Próbki krwi będą przechowywane i przechowywane w temperaturze -80°C do celów przyszłych badań.

Ocena długoterminowa będzie obejmowała pobieranie krwi i kwestionariusze co 4-8 tygodni przez 1 rok od oceny końcowej (12 tydzień).

wyczucie czasu

1. Pierwsza ocena zostanie wykonana zarówno dla pacjenta, jak i jego domowników w ciągu 1-7 dni od otrzymania pozytywnego wyniku RT-PCR

2. Po pierwszej ocenie każdy uczestnik będzie oceniany co 10 dni (±2 dni) przez 100 dni. W sumie 10 dodatkowych razy.

   Podsumowując, każdy uczestnik będzie oceniany 11 razy (pierwsza ocena + 10 ocen dodatkowych).

3. Po ostatniej ocenie każdy uczestnik będzie oceniany co 4-8 tygodni przez 1 rok. W sumie 6-12 razy.