Оценка иммунного ответа на COVID-19 (COVIDIMMUNE)

Коронавирусная болезнь 2019-2020 годов, вызванная COVID-19, представляет собой продолжающуюся пандемию. Вспышка началась в Ухане, провинция Хубэй, Китай, в декабре 2019 года, и Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) признала ее пандемией 11 марта 2020 года. По состоянию на 9 апреля 2020 г. зарегистрировано более 1,4 миллиона подтвержденных случаев заболевания и более 82 000 случаев смерти 1. В Израиле COVID-19 подтвержден более чем в 9000 случаев и унес жизни 70 человек (09.04.2020).

В связи с обширной вспышкой COVID-19 сообщалось о массе исследований с большой популяцией. Ву и др. обнаружили, что средний R0 для COVID-19 составлял примерно 2,68 (95% ДИ: 2,47-2,86). Меры, при которых должностные лица органов здравоохранения помещают в карантин подтвержденные и изолируют случаи с симптомами, чтобы уменьшить распространение COVID-19, являются обычной практикой, используемой в большинстве стран. Однако остается серьезный вопрос в отношении бессимптомно инфицированных лиц, которые могут распространять вирус и препятствовать инфекционному контролю.

Проблема На сегодняшний день начальное наблюдение сосредоточено в основном на пациентах с тяжелым течением болезни и, как таковых, на всем спектре заболевания. Степень бессимптомного течения болезни не ясна. Мизумото и др. предложенная математическая модель 17,9-33,3% являются бессимптомными носителями. Другой вопрос, который необходимо рассмотреть, заключается в том, развивается ли у этих бессимптомных носителей иммунный ответ или продолжается выделение вируса.

SARS-CoV-2, возбудитель заболевания COVID-19, представляет собой коронавирус, несущий шипы трансмембранного гликопротеина (белок S), типичные для вирусов в его кладе. Шипы на SARS-CoV-2 позволяют вирусу проникать в клетки-хозяева через человеческий рецептор ангиотензинпревращающего фермента 2 (ACE2), присутствующий в альвеолярных эпителиальных клетках. Эти шипы являются заметной мишенью иммунных реакций человека, и было обнаружено, что они обладают высокой иммуногенностью и индуцируют выработку антител. Рецептор-связывающий домен (RBD) S-белка является особенно мишенью для нейтрализующих антител.

Диагностический тест у пациентов с симптомами основан на полимеразной цепной реакции в реальном времени (RT-PCR), которая проверяет наличие специфических генов COVID-19 в образце. Однако растет число сообщений о ложноотрицательных результатах из-за неправильного сбора образцов, низкой вирусной нагрузки или технической нестабильности ПЦР.

Серологический тест направлен на выявление антител (иммуноглобулин М - IgM, иммуноглобулин G - IgG, иммуноглобулин А - IgA) в крови пациента, т.е. иммунный ответ пациента. Антитела IgM обычно появляются в течение 3-7 дней после появления симптомов, тогда как антитела IgG появляются в течение 10-14 дней. Заболевания, поражающие дыхательные пути, также обычно вызывают повышение уровня IgA.

Чжао и др. недавно опубликовали данные, свидетельствующие о том, что у пациентов с COVID-19 наблюдается типичное время выработки антител в ответ на острую вирусную инфекцию SARS-CoV-2. В целом данные свидетельствуют о том, что инфекция SARS-CoV-2 следует за сероконверсионной шкалой, аналогичной другим вирусным инфекциям. В их выборке из 173 госпитализированных пациентов с подтвержденными симптомами у 93,1% (161/173) выработались антитела, из которых у 82,7% — антитела IgM и у 64,7% — антитела IgG. Важно отметить, что все эти пациенты страдали от симптомов. Связь между уровнем симптомов, вирусной нагрузкой и иммунным ответом еще предстоит определить.

В закрытых условиях, таких как домохозяйства, есть определенное население, которое может не сразу смешиваться с более крупным окружающим сообществом, и поэтому такие условия могут обеспечить стратегический способ отслеживания возникающих респираторных инфекций и характеризации моделей передачи вируса, поскольку знаменатель может быть четко определен. Кроме того, воздействие находится в пределах установленных условий, и последующее наблюдение за домашними контактами, как правило, более осуществимо в этих четко определенных условиях по сравнению с неопределенными. После тесных контактов с аналогичными уровнями воздействия инфекции от первичных случаев также можно идентифицировать бессимптомную фракцию.

Наше решение Целью настоящего исследования является оценка иммунного ответа, т.е. выработка антител против SARS-CoV-2 в бессимптомных случаях, в дизайне домашнего исследования.

Мы планируем обследовать более 1000 пациентов с положительными результатами на COVID-19 и их домохозяйств. План включает оценку их симптомов, вирусной нагрузки и иммунного ответа каждые 10 дней в течение 12 недель. Далее анализ причин различий иммунного ответа между субъектами путем секвенирования их ДНК и, что наиболее важно, гена ACE2 — рецептора, который атакует вирус.

Это прольет необходимый свет на связь между симптомами, вирусной нагрузкой и иммунным ответом. Связь между вирусной нагрузкой, симптомами и иммунным ответом позволит: отслеживать прогресс заболевания, прогнозировать пациентов с высоким риском развития тяжелых симптомов, определять иммунитет к вирусу и, что наиболее важно, обнаруживать хронических носителей, у которых не вырабатывается иммунитет.

Протокол После положительного результата ОТ-ПЦР на COVID-19 в лаборатории медицинского центра «Шамир» с субъектом свяжутся по телефону и предложат принять участие в исследовании. После согласия медицинский персонал прибудет в дом субъекта и далее объяснит детали исследования и попросит информированное согласие субъекта и любой из домохозяйств старше 18 лет. После подписания информированного согласия каждый субъект заполнит отчет о симптомах и предоставит мазок из ротоглотки и образец крови (10-20 мл).

Каждые 10 дней в течение 12 недель исследователь будет посещать дом испытуемых и повторять процедуру (опросник по симптомам, забор крови и мазок из ротоглотки).

После последней оценки (12-я неделя) каждые 4-8 недель в течение 1 года исследователь посещает дом испытуемых и выполняет заполнение анкеты по симптомам и забор крови.

Серологические наборы:

1. LIAISION SARS-CoV-2 IgM (Diasorin, Saluggia, Италия)
2. LIAISION SARS-CoV-2 S1/S2 IgG (Диасорин, Салуджия, Италия)
3. Иммуноанализ ARCHITECT SARS-CoV-2 N IgG (Эббот, Иллинойс, США)

Набор для ОТ-ПЦР ОТ-ПЦР будет проводиться с использованием 3 праймеров и 3 зондов в дополнение к одному праймеру и зонду РНКазы человека.

Процедура

1. Прибытие в дом испытуемых
2. Медицинский персонал будет использовать соответствующее защитное медицинское снаряжение.
3. Забор крови на 3 пробирки (15-20мл)
4. Мазок из ротоглотки
5. Образцы будут храниться при температуре 2-8С.
6. Образцы будут возвращены в лабораторию Медицинского центра Шамир в степени 2-8c.
7. Будет проведена ОТ-ПЦР.
8. Серология будет проводиться с использованием доступных наборов. У каждого субъекта будут брать пробы 9 раз (каждые 10 дней в течение 12 недель в дополнение к первому контакту). Образцы крови будут храниться при температуре -80°C для будущих исследовательских целей.

Долгосрочная оценка будет включать забор крови и анкеты каждые 4-8 недель в течение 1 года с момента окончательной оценки (12-я неделя).

Сроки

1. Первая оценка будет завершена как для пациента, так и для его/ее домохозяйств в течение 1-7 дней после получения положительного результата ОТ-ПЦР.

2. После первой оценки каждый участник будет оцениваться каждые 10 дней (±2 дня) в течение 100 дней. Всего 10 дополнительных раз.

   Таким образом, каждый участник будет оцениваться 11 раз (первая оценка + 10 дополнительных оценок).

3. После последней оценки каждый участник будет оцениваться каждые 4-8 недель в течение 1 года. Всего 6-12 раз.