Avaliando a resposta imune para COVID-19 (COVIDIMMUNE)

A doença de coronavírus 2019-20, causada pelo COVID-19, é uma pandemia em andamento. O surto começou em Wuhan, província de Hubei, China, em dezembro de 2019 e a Organização Mundial da Saúde (OMS) o reconheceu como uma pandemia em 11 de março de 2020. Até 9 de abril de 2020, são mais de 1,4 milhão de casos confirmados e mais de 82.000 mortes 1. Em Israel, o COVID-19 foi confirmado em mais 9.000 casos e tirou a vida de 70 vítimas (09.04.2020) .

Com o extenso surto de COVID-19, uma massa de estudos com uma grande população foi relatada. Wu e outros. descobriram que o R0 médio de COVID-19 foi de aproximadamente 2,68 (95% CI: 2,47-2,86). As medidas em que as autoridades de saúde pública colocam em quarentena os casos confirmados e isolam os casos sintomáticos para reduzir a propagação do COVID-19 é a prática comum usada na maioria dos países. No entanto, uma questão significativa permanece em relação aos indivíduos infectados assintomaticamente, que podem propagar o vírus e impedir o controle da infecção.

O problema Até o momento, a vigilância inicial concentrou-se principalmente em pacientes com doença grave e, como tal, em todo o espectro da doença. A extensão da doença assintomática não é clara. Mizumoto e outros. modelo matemático sugerido 17,9-33,3% são portadores assintomáticos. A outra questão a considerar é se esses portadores assintomáticos desenvolvem uma resposta imune ou continuam a excreção viral.

O SARS-CoV-2, o agente viral causador da doença COVID-19, é um coronavírus que carrega os picos de glicoproteína transmembrana (proteína S) típicos dos vírus em seu clado. Os picos de SARS-CoV-2 permitem que o vírus entre nas células hospedeiras através da enzima conversora de angiotensina humana 2 (ACE2), presente nas células epiteliais alveolares. Esses picos são um alvo proeminente das respostas imunes humanas e foram considerados altamente imunogênicos e induzem a produção de anticorpos. O domínio de ligação ao receptor (RBD) da proteína S é particularmente visado por anticorpos neutralizantes.

O teste diagnóstico em pacientes sintomáticos é baseado na reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR), que testa a existência de genes específicos da COVID-19 na amostra. No entanto, há um número crescente de relatos de resultados falso-negativos devido à coleta inadequada de amostras, baixa carga viral ou instabilidade técnica da PCR.

O teste de sorologia visa detectar anticorpos (imunoglobulina M - IgM, imunoglobulina G- IgG, imunoglobulina A - IgA) no sangue do paciente, ou seja, a resposta imune do paciente. Os anticorpos IgM geralmente aparecem dentro de 3-7 dias a partir dos sintomas, enquanto os anticorpos IgG aparecem dentro de 10-14 dias. Doenças que envolvem o trato respiratório geralmente também causam elevação de IgA.

Zhao et ai. publicaram recentemente dados indicando que os pacientes com COVID-19 apresentam tempos típicos de produção de anticorpos em resposta à infecção viral aguda com SARS-CoV-2. No geral, os dados sugerem que a infecção por SARS-CoV-2 segue um cronograma de soroconversão semelhante a outras infecções virais. Em sua amostra de 173 pacientes confirmados sintomáticos hospitalizados, 93,1% (161/173) desenvolveram anticorpos, onde 82,7% desenvolveram anticorpos IgM e 64,7% desenvolveram anticorpos IgG. É importante ressaltar que todos esses pacientes apresentavam sintomas. A associação entre nível de sintomas, carga viral e resposta imune ainda não foi determinada.

Ambientes fechados, como domicílios, têm uma população definida que pode não se misturar prontamente com a comunidade circundante maior e, portanto, tais ambientes podem fornecer uma maneira estratégica de rastrear infecções respiratórias emergentes e caracterizar os padrões de transmissão de vírus porque o denominador pode ser bem definido. Além disso, a exposição está dentro do ambiente e o acompanhamento dos contatos domiciliares geralmente é mais viável nesse ambiente bem definido do que em um indefinido. Seguir contatos próximos com níveis semelhantes de exposição à infecção de casos primários também pode permitir a identificação da fração assintomática.

Nossa solução O objetivo do estudo atual é avaliar a resposta imune, ou seja, desenvolver anticorpos anti-SARS-CoV-2 nos casos assintomáticos, em um desenho de estudo doméstico.

Planejamos avaliar mais de 1.000 pacientes com resultados positivos para COVID-19 e suas famílias. O plano inclui avaliação de seus sintomas, carga viral e resposta imune a cada 10 dias em um período de 12 semanas. A seguir, análise da causa das diferenças de resposta imune entre os indivíduos, sequenciando seu DNA e, mais importante, do gene ACE2 - o receptor que o vírus ataca.

Isso lançará a luz necessária sobre a conexão entre sintomas, carga viral e resposta imune. A associação entre carga viral, sintomas e resposta imune permitirá: monitorar o progresso da doença, prever pacientes com alto risco de desenvolver sintomas graves, determinar a imunidade ao vírus e, principalmente, localizar os portadores crônicos que não desenvolvem imunidade.

Protocolo Após um resultado positivo de RT-PCR para COVID-19 no laboratório do centro médico Shamir, o sujeito será contatado por telefone e será oferecido para participar do estudo. Após o consentimento, a equipe médica chegará à casa do sujeito e explicará os detalhes do estudo e solicitará um consentimento informado do sujeito e de qualquer um dos domicílios com mais de 18 anos. Ao assinar um consentimento informado, cada sujeito preencherá um relatório de sintomas e fornecerá um swab orofaríngeo e uma amostra de sangue (10-20cc).

A cada 10 dias em 12 semanas, um pesquisador visitará a casa do sujeito e repetirá o procedimento (questionário de sintomas, coleta de sangue e swab orofaríngeo).

Após a última avaliação (12ª semana), a cada 4-8 semanas dentro de 1 ano, um pesquisador visitará a casa dos sujeitos e realizará o preenchimento do questionário de sintomas e coleta de sangue.

Kits de sorologia:

1. LIAISION SARS-CoV-2 IgM (Diasorin, Saluggia, Itália)
2. LIAISION SARS-CoV-2 S1/S2 IgG (Diasorin, Saluggia, Itália)
3. ARCHITECT SARS-CoV-2 N IgG Imunoensaio (Abbot, Illinois, EUA)

Kit Rt-PCR O RT-PCR será realizado usando 3 primers e 3 sondas, além de um primer e sonda de RNase humana.

Procedimento

1. Chegada à casa dos sujeitos
2. A equipe médica usará equipamento médico de proteção adequado.
3. Retirada de sangue para 3 tubos de sangue (15-20cc)
4. Swab orofaríngeo
5. As amostras serão mantidas em 2-8c graus.
6. As amostras serão devolvidas ao laboratório Shamir Medical Center em 2-8c graus.
7. Será realizado RT-PCR.
8. A sorologia será realizada com os kits disponíveis. Cada sujeito será amostrado 9 vezes (a cada 10 dias dentro de 12 semanas, além do primeiro contato). As amostras de sangue serão mantidas e armazenadas a -80°C para fins de pesquisas futuras.

A avaliação de longo prazo incluirá amostras de sangue e questionários a cada 4-8 semanas por 1 ano a partir da avaliação final (12ª semana).

Tempo

1. A primeira avaliação será concluída para o paciente e seus familiares dentro de 1 a 7 dias após o recebimento do resultado positivo de RT-PCR

2. Após a primeira avaliação, cada participante será avaliado a cada 10 dias (±2 dias) por 100 dias. No total, 10 vezes adicionais.

   Em resumo, cada participante será avaliado 11 vezes (primeira avaliação + 10 avaliações adicionais).

3. Após a última avaliação, cada participante será avaliado a cada 4-8 semanas durante 1 ano. No total 6-12 vezes.