生体肝移植の1年目のレシピエントにおける移植片拒絶反応と敗血症の予測における糞便微生物叢の役割。
生体肝移植の1年目のレシピエントにおける移植片拒絶反応と敗血症の予測における糞便微生物叢の役割 - 観察研究。
効率的な免疫抑制療法と外科技術の改良により、肝移植は確立された救命治療法として発展しました。 1年生存率は約85～90％。 急性細胞拒絶反応（ACR）は肝移植後の肝機能障害（LD）の主な原因の 1 つであり、移植患者の 30% ～ 70% に発生し、同種移植の失敗につながる可能性があります。 ACR に加えて、敗血症、薬物傷害、CMV などのウイルス感染、またはウイルス性肝炎の再発の存在も、移植片機能不全の他の原因です。 臨床検査は、同種移植片の拒絶反応をモニタリングする侵襲性の低い方法として一般に使用されますが、拒絶反応に特有のものではなく、他のタイプの移植片機能不全でも上昇することがよくあります。
現在まで、肝臓移植レシピエントにおける免疫抑制療法は、免疫状態の客観的な尺度が存在しない技術とみなされています。 治療薬のモニタリングは免疫状態の評価にはほとんど価値がなく、常に補助的なガイドとして使用されます。 移植レシピエントの正味の免疫抑制状態を測定するための特異的な免疫モニタリングアッセイの開発により、より個別化された治療計画が可能になる 腸内細菌叢が変化した患者は、感染の可能性が高く、入院期間が長くなる。 プロバイオティクスは移植片拒絶における有益な効果を仲介する可能性がある。 腸内毒素症は、PAMPS を介して T 細胞を活性化し、移植肝臓に炎症性損傷を引き起こします。 研究では、真正細菌、ビフィズス菌、糞便性細菌、乳酸桿菌が下等で、腸球菌および腸内細菌科が豊富であることが示されました。 彼らの大部分は移植後にほぼ正常に回復しました。
これは、ACLFまたは非代償性肝硬変の自然史に腸内細菌叢の異常があることが知られており、多くの場合、内毒素血症、敗血症、肝不全の悪化、生存率の低下などの合併症と相関しています。 このため、糞便微生物叢の調整が新たな治療法として考慮されるようになりました。 肝臓移植とそれに伴う回復では、免疫環境だけでなくレシピエントの恒常性環境にもあらゆる変化が起こり、同様のことが腸内細菌叢にも起こっている可能性があります。肝臓には常在腸内細菌叢の痕跡があることはよく知られています。 予備的なラットモデルでは、急性細胞拒絶反応の発生を事前に予測するための腸内細菌叢の変化が示されました。 同様に、肝移植後に微生物の多様性が低下した移植レシピエントでは、感染のリスクが高くなります。 しかし、データは不足しており、メカニズムを理解することが急務です。
本研究は、腸内細菌叢の新たな役割と、感染、拒絶反応の予測のための免疫リモデリングに対するその影響を考慮して必要となり、移植片機能不全の初期バイオマーカーとなる可能性がある。 これは、全体的な免疫状態への影響とともに、肝移植レシピエントにおけるさまざまな原因である可能性があります。 本研究の独自性は、肝臓移植レシピエントの移植片機能不全の原因として全血および腸内微生物叢の変化における全血の単一細胞分析のハイスループットツールを使用して、やがて敗血症または移植片機能不全が発症するメカニズムを理解することである。生体肝移植の 1 年目。
調査の概要
詳細な説明
第一目的：
生体肝移植後 1 年間にわたる糞便微生物叢の変化と、移植片拒絶および敗血症との関連性を特徴付けること。
二次的な目的:
- LDLT の 1 年目に敗血症、拒絶反応、CMV 感染に起因する移植片機能不全の発生率。
- LT前の免疫学的プロファイルと、移植後の拒絶反応、免疫抑制の必要性および免疫老化の回復との相関関係を研究する。
- 移植片拒絶反応と敗血症を予測する際に、免疫細胞とサイトカインの動的変化を相関させる。
研究デザイン 研究の種類 - 単一施設、前向き観察研究 研究対象集団 - 2020年4月から2022年3月の間にILBSで生体肝移植を受け、適格基準を満たしている連続100人の患者。
研究期間 - IEC の承認日から 24 か月
方法論:
腸内細菌叢の特定:
DNA 抽出 すべての被験者は同日に血清と便の採取を受けます。 約 5 ～ 8g の糞便物質が収集されます。DNA 抽出には、糞便サンプル用の QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit が使用されます。
16s RNA 遺伝子の PCR 増幅 簡単に説明すると、V3 ～ V4 超可変領域の PCR 増幅は、サンプル固有のバーコードを含む 341F および 806R プライマーを使用して行われます。 精製された増幅産物 (QIAGEN) は、カスタム シーケンシング プライマー リード 1 (R1)、リード 2 (R2) およびインデックスを使用して MiSeq プラットフォーム上で実行されます。
全血：全血（5～10ml）が採取されます。 血漿は2500rpmでの遠心分離によって分離されます。 血漿は、サイトカインアレイ用に処理されるまでバイオバンク (NLDB) 内で -80℃ で保存されます。 残りの血液は RBC 溶解バッファーで処理され、免疫細胞分析のために処理されます。
免疫細胞の頻度/絶対数の免疫表現型検査: 全血中の細胞は、フローサイトメトリーと分析を使用して、T 細胞サブセット (Th1、Th2、Th17、Treg) および B 制御細胞の表面マーカーに対する特定の蛍光色素標識モノクローナル抗体で染色されます。 FCS Express ソフトウェアによって実行されます。
サイトカインアレイ: 研究対象の患者の血漿中の炎症促進性サイトカイン (IL-1β) および抗炎症性サイトカイン (IL-10) が測定されます。 サイトカイン アレイ キットは市販されており、製造業者の指示に従って行われます。
統計分析
- データは平均値 + SD としてレポートされます。
- カテゴリ変数は、カイ二乗検定またはフィッシャーの直接確率検定を使用して比較されます。
- 正規連続変数は Student t 検定を使用して比較されます。
- 非正規連続変数は、Mann-Whitney 順位和検定 (対応のないデータ) または Wilcoxon 検定 (対応のあるデータ) を使用して比較されます。
- 量的変数に関するグループ間の比較は、ANOVA によって分析されます。Cox 回帰分析は、移植片機能の独立した予後因子を特定するために実行されます。
研究のエンドポイント 一次エンドポイント
- 敗血症、拒絶反応、CMV感染の発症
- 死
二次エンドポイント
- 外科的介入を必要とするLT後の合併症
- 再移植
プロジェクトの期待される成果:
- これは、移植片の機能不全や敗血症を診断するための微生物プロファイリングや免疫細胞のサインに基づく簡単な診断ツールの設計に役立ちます。
- これはまた、重篤な状態が進行する際の免疫発病のメカニズムについての洞察を与え、より新しい治療選択肢への道を開くことにもなります。
研究における倫理的問題とこれらの問題に対処する計画 - なし
研究の種類
入学 (予想される)
連絡先と場所
研究連絡先
- 名前：Dr Navin Kumar M, MD
- 電話番号：01146300000
- メール：navinktanvi10@gmail.com
研究場所
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-
Delhi
-
New Delhi、Delhi、インド、110070
- 募集
- Institute of Liver & Biliary Sciences
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コンタクト：
- Dr Navin Kumar, MD
- 電話番号：01146300000
- メール：navinktanvi10@gmail.com
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参加基準
適格基準
就学可能な年齢
健康ボランティアの受け入れ
受講資格のある性別
サンプリング方法
調査対象母集団
説明
包含基準:
- 生体ドナー ALF、ACLF、肝硬変およびその合併症に対する肝移植。
- 年齢 12 ～ 75 歳
- 有効な同意
除外基準:
- 死亡したドナーの肝移植
- 再移植
- 肝腎同時移植 (SLKT)
研究計画
研究はどのように設計されていますか？
デザインの詳細
この研究は何を測定していますか？
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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敗血症の発症
時間枠：1年
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敗血症の診断は、患者の培養陽性（血液、尿、カテーテルの先端）、任意の時点での断面画像による感染巣に基づいて行われます。
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1年
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拒絶反応の発症
時間枠：1年
|
拒絶反応の診断は移植片生検と組織学に基づいており、拒絶活動指数 (RAI) によって評価されます。
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1年
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CMV感染症の発症
時間枠：1年
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CMV DNA診断はRT PCR法による
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1年
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死
時間枠：1年
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1年
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二次結果の測定
結果測定 |
時間枠 |
|---|---|
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外科的介入を必要とするLT後の合併症
時間枠：1年
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1年
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再移植を受ける患者数
時間枠：1年
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1年
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協力者と研究者
研究記録日
主要日程の研究
研究開始 (実際)
一次修了 (予想される)
研究の完了 (予想される)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (実際)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
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