Rôle du microbiote fécal dans la prédiction du rejet de greffe et de la septicémie chez les receveurs d'une greffe de foie de donneur vivant au cours de la première année.
Rôle du microbiote fécal dans la prédiction du rejet de greffe et de la septicémie chez les receveurs d'une greffe de foie de donneur vivant au cours de la première année - Une étude observationnelle.
Une thérapie immunosuppressive efficace et des techniques chirurgicales améliorées ont fait de la transplantation hépatique un traitement bien établi et salvateur. Le taux de survie à 1 an d'environ 85-90%. Le rejet cellulaire aigu (ACR) est l'une des principales causes de dysfonctionnement hépatique (LD) après transplantation hépatique, survenant chez 30 à 70 % des patients greffés et pouvant conduire à l'échec de l'allogreffe. En plus de l'ACR, la présence d'une septicémie, d'une lésion médicamenteuse, d'infections virales comme le CMV ou la récurrence de l'hépatite virale sont également d'autres causes de dysfonctionnement du greffon. Les tests de laboratoire sont couramment utilisés comme méthodes moins invasives de surveillance du rejet d'allogreffe, mais ils ne sont pas spécifiques au rejet et sont également souvent élevés dans d'autres types de dysfonctionnement de la greffe.
Jusqu'à présent, le régime immunosuppresseur chez le greffé du foie est considéré comme un art en l'absence de mesures objectives de l'état immunitaire. Le suivi thérapeutique médicamenteux a peu de valeur dans l'évaluation de l'état immunitaire et est toujours utilisé comme guide de soutien. Le développement de tests de surveillance immunitaire spécifiques pour mesurer l'état immunosuppresseur net chez un greffé permettrait un régime thérapeutique plus individualisé. Les patients présentant un microbiote intestinal altéré avaient plus de risques d'infection et un séjour hospitalier plus long. Les probiotiques pourraient avoir des effets bénéfiques sur le rejet de greffe. La dysbiose active les cellules T via PAMPS et provoque des lésions inflammatoires dans le foie greffé. Les études ont montré que les eubactéries inférieures, les bifidobactéries, les bactéries fécales et les lactobacilles avec une abondance d'entérocoques et d'entérobactéries. Ils sont revenus presque à la normale après la greffe dans la majorité.
Ceci est connu qu'il existe une dysbiose dans l'histoire naturelle de l'ACLF ou de la cirrhose décompensée, et souvent corrélée à des complications telles que l'endotoxémie, la septicémie, l'aggravation de l'insuffisance hépatique et une faible survie. Cela a conduit à considérer la modulation du microbiote fécal comme une thérapie émergente. Transplantation hépatique et récupération consécutive, il y a un changement général dans le milieu homéostatique du receveur ainsi que dans le milieu immunitaire et la même chose peut également arriver à la flore intestinale. Il est bien connu que le foie a une empreinte anim de la flore intestinale résidente. Le modèle préliminaire de rat a montré une altération de la flore intestinale pour prédire le développement du rejet cellulaire aigu avant qu'il ne se produise. De même, le risque d'infection est plus élevé chez les receveurs de greffe avec une diversité microbienne réduite après une greffe de foie. Cependant, les données sont rares et il est urgent de comprendre le mécanisme.
La présente étude a été rendue nécessaire compte tenu du rôle émergent de la microflore intestinale et de son influence sur le remodelage immunitaire pour la prédiction de l'infection, du rejet et peut être un biomarqueur précoce du dysfonctionnement du greffon. Cela peut être de cause variée chez les receveurs de greffe du foie ainsi que son impact sur l'état immunitaire global. L'unicité de la présente étude sera de comprendre le mécanisme de développement de la septicémie ou du dysfonctionnement du greffon au fil du temps à l'aide d'outils à haut débit d'analyse de cellule unique dans le sang total et les altérations du microbiote intestinal chez le receveur d'une greffe de foie comme cause de dysfonctionnement du greffon chez première année de greffe de foie de donneur vivant.
Aperçu de l'étude
Statut
Description détaillée
Objectif principal:
Caractériser les changements du microbiote fécal sur un an après une greffe de foie de donneur vivant et son association avec le rejet de greffe et la septicémie.
Objectifs secondaires :
- Incidence du dysfonctionnement du greffon attribuable à la septicémie, au rejet et à l'infection à CMV au cours de la première année de LDLT.
- Étudier le profil immunologique pré-LT et sa corrélation avec le rejet post-transplantation, les exigences d'immunosuppression et la restauration de l'immunosénescence.
- Corréler les changements dynamiques des cellules immunitaires et des cytokines pour prédire le rejet de greffe et la septicémie.
CONCEPTION DE L'ÉTUDE Type d'étude - Étude monocentrique, prospective, observationnelle Population de l'étude - 100 patients consécutifs remplissant les critères d'éligibilité et subissant une greffe de foie de donneur vivant dans l'ILBS entre avril 2020 et mars 2022.
Durée de l'étude - 24 mois à compter de la date d'approbation de la CEI
Méthodologie:
Identification du microbiote intestinal :
Extraction d'ADN Tous les sujets subiront un prélèvement de sérum et de selles le même jour. Environ 5 à 8 g de matières fécales seront collectées. Le mini kit QIAamp Fast DNA Stool pour échantillons de selles sera utilisé pour l'extraction d'ADN.
Amplification par PCR du gène ARN 16s Brièvement, l'amplification par PCR des régions hypervariables V3-V4 sera effectuée en utilisant les amorces 341F et 806R contenant le code-barres spécifique de l'échantillon. Le produit amplifié purifié (QIAGEN) sera exécuté sur la plate-forme MiSeq avec une amorce de séquençage personnalisée lit 1 (R1), lit 2 (R2) et index.
Sang total : du sang total (5-10 ml) sera prélevé. Le plasma sera séparé par centrifugation à 2500rpm. Le plasma sera stocké à -80 ° C dans la biobanque (NLDB) jusqu'à ce qu'il soit traité pour le réseau de cytokines. Le sang restant sera traité avec un tampon de lyse RBC et sera traité pour l'analyse des cellules immunitaires.
Immunophénotypage pour la fréquence/le nombre absolu de cellules immunitaires : les cellules du sang total seront colorées avec des anticorps monoclonaux spécifiques marqués au flurochrome pour les marqueurs de surface des sous-ensembles de cellules T (Th1, Th2, Th17, Tregs), les cellules régulatrices B par cytométrie en flux et analyse sera effectué par le logiciel FCS express.
Cytokine Array : les cytokines pro-inflammatoires (IL-1β) et anti-inflammatoires (IL-10) seront mesurées dans le plasma des patients à l'étude. Le kit de matrice de cytokines sera acheté dans le commerce et sera effectué conformément aux instructions du fabricant.
ANALYSES STATISTIQUES
- Les données seront rapportées sous forme de moyenne + SD
- Les variables catégorielles seront comparées à l'aide du test du chi carré ou du test exact de Fisher
- Les variables continues normales seront comparées à l'aide du test t de Student
- Les variables continues non normales seront comparées à l'aide du test de somme des rangs de Mann-Whitney (données non appariées) ou du test de Wilcoxon (données appariées).
- La comparaison entre les groupes sur les variables quantitatives sera analysée par ANOVA Une analyse de régression de Cox sera effectuée pour identifier les facteurs pronostiques indépendants pour la fonction du greffon.
POINTS FINAUX DE L'ÉTUDE Point final principal
- Développement de septicémie, rejet, infection à CMV
- Décès
Points d'extrémité secondaires
- Complications post-LT nécessitant des interventions chirurgicales
- Retransplantation
Résultat attendu du projet :
- Cela nous aidera à concevoir des outils de diagnostic simples basés sur le profilage microbien ou les signatures des cellules immunitaires pour le diagnostic du dysfonctionnement du greffon et de la septicémie.
- Cela nous donnera également un aperçu du mécanisme de la pathogenèse immunitaire au cours du développement de maladies graves, ce qui ouvrira la voie à de nouvelles options thérapeutiques.
Problèmes éthiques dans l'étude et plans pour résoudre ces problèmes - Aucun
Type d'étude
Inscription (Anticipé)
Contacts et emplacements
Coordonnées de l'étude
- Nom: Dr Navin Kumar M, MD
- Numéro de téléphone: 01146300000
- E-mail: navinktanvi10@gmail.com
Lieux d'étude
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Delhi
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New Delhi, Delhi, Inde, 110070
- Recrutement
- Institute of Liver & Biliary Sciences
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Contact:
- Dr Navin Kumar, MD
- Numéro de téléphone: 01146300000
- E-mail: navinktanvi10@gmail.com
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Critères de participation
Critère d'éligibilité
Âges éligibles pour étudier
Accepte les volontaires sains
Sexes éligibles pour l'étude
Méthode d'échantillonnage
Population étudiée
La description
Critère d'intégration:
- Donneur vivant Transplantation hépatique pour ALF, ACLF, cirrhose et ses complications.
- Âge 12-75 ans
- Consentement valide
Critère d'exclusion:
- Greffes de foie de donneur décédé
- Re-greffes
- Greffes simultanées de foie et de rein (SLKT)
Plan d'étude
Comment l'étude est-elle conçue ?
Détails de conception
Que mesure l'étude ?
Principaux critères de jugement
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
|---|---|---|
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Développement de la septicémie
Délai: 1 ans
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Le diagnostic de septicémie est basé sur des cultures positives du patient (sang, urine, extrémité du cathéter), des foyers d'infection par imagerie en coupe à tout moment
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1 ans
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Développement du rejet
Délai: 1 ans
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Le diagnostic de rejet est basé sur la biopsie du greffon et l'histologie - évalué par REJECTION ACTIVITY INDEX (RAI)
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1 ans
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Développement de l'infection à CMV
Délai: 1 ans
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Le diagnostic de l'ADN du CMV se fait par la technique RT PCR
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1 ans
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Décès
Délai: 1 ans
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1 ans
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Mesures de résultats secondaires
Mesure des résultats |
Délai |
|---|---|
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Complications post-LT nécessitant des interventions chirurgicales
Délai: 1 ans
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1 ans
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Nombre de patients qui subiront une retransplantation
Délai: 1 ans
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1 ans
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Collaborateurs et enquêteurs
Dates d'enregistrement des études
Dates principales de l'étude
Début de l'étude (Réel)
Achèvement primaire (Anticipé)
Achèvement de l'étude (Anticipé)
Dates d'inscription aux études
Première soumission
Première soumission répondant aux critères de contrôle qualité
Première publication (Réel)
Mises à jour des dossiers d'étude
Dernière mise à jour publiée (Réel)
Dernière mise à jour soumise répondant aux critères de contrôle qualité
Dernière vérification
Plus d'information
Termes liés à cette étude
Termes MeSH pertinents supplémentaires
Autres numéros d'identification d'étude
- ILBS-FMT-02
Informations sur les médicaments et les dispositifs, documents d'étude
Étudie un produit pharmaceutique réglementé par la FDA américaine
Étudie un produit d'appareil réglementé par la FDA américaine
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