생체 기증자 간 이식 첫해 수혜자 중 이식 거부 및 패혈증 예측에서 분변 미생물의 역할.

주요 목표:

생체 기증자 간 이식 후 1년 동안 분변 미생물 변화와 이식 거부 및 패혈증과의 연관성을 특성화합니다.

보조 목표:

1. LDLT 첫해에 패혈증, 거부 반응 및 CMV 감염에 기인한 이식편 기능 장애의 발생률.
2. LT 이전 면역학적 프로필과 이식 후 거부 반응, 면역억제 요건 및 면역노화 회복과의 상관관계를 연구합니다.
3. 이식 거부 및 패혈증을 예측할 때 면역 세포와 사이토카인의 동적 변화를 연관시킵니다.

연구 설계 연구 유형 - 단일 센터, 전향적, 관찰 연구 연구 모집단 - 자격 기준을 충족하고 2020년 4월부터 2022년 3월 사이에 ILBS에서 생체 기증자 간 이식을 받는 연속 100명의 환자.

연구 기간 - IEC 승인일로부터 24개월

방법론:

장내 미생물의 식별:

DNA 추출 모든 피험자는 같은 날 혈청 및 대변 수집을 받게 됩니다. 약 5-8g의 배설물이 수집됩니다. 대변 샘플용 QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit는 DNA 추출에 사용됩니다.

16s RNA 유전자의 PCR 증폭 간단히, V3-V4 초가변 영역의 PCR 증폭은 샘플 특정 바코드를 포함하는 341F 및 806R 프라이머를 사용하여 수행됩니다. 정제된 증폭 제품(QIAGEN)은 맞춤형 시퀀싱 프라이머 리드 1(R1), 리드 2(R2) 및 인덱스를 사용하여 MiSeq 플랫폼에서 실행됩니다.

전혈: 전혈(5-10ml)을 채취합니다. 플라즈마는 2500rpm에서 원심분리로 분리됩니다. 혈장은 사이토카인 어레이를 위해 처리될 때까지 바이오뱅크(NLDB)에서 -80C로 저장됩니다. 남은 혈액은 RBC 용해 버퍼로 처리되고 면역 세포 분석을 위해 처리됩니다.

면역 세포의 빈도/절대 수에 대한 면역 표현형 분석: 전혈의 세포는 T 세포 하위 집합(Th1, Th2, Th17, Treg), B 조절 세포에 대한 표면 마커에 대한 특정 형광색소 표지 단일 클론 항체로 유세포 분석 및 분석을 사용하여 염색됩니다. FCS 익스프레스 소프트웨어에 의해 수행됩니다.

사이토카인 어레이: 전 염증성(IL-1β) 및 항염증성 사이토카인(IL-10)은 연구 중인 환자의 혈장에서 측정됩니다. 사이토카인 어레이 키트는 상업적으로 조달되며 제조업체의 지침에 따라 수행됩니다.

통계 분석

• 데이터는 평균 + SD로 보고됩니다.
• 범주형 변수는 카이제곱 검정 또는 Fisher 정확 검정을 사용하여 비교됩니다.
• 일반 연속 변수는 Student t 테스트를 사용하여 비교됩니다.
• 비정규 연속 변수는 Mann-Whitney rank-sum test(unpaired data) 또는 Wilcoxon test(paired data)를 사용하여 비교됩니다.
• 정량적 변수에 대한 그룹 간의 비교는 ANOVA A Cox 회귀 분석으로 분석하여 이식편 기능에 대한 독립적인 예후 인자를 식별합니다.

연구 종점 1차 종점

• 패혈증, 거부 반응, CMV 감염 발생
• 죽음

보조 끝점

• 외과 개입이 필요한 LT 후 합병증
• 재이식

프로젝트의 예상 결과:

1. 이것은 이식 기능 장애 및 패혈증 진단을 위한 미생물 프로파일링 또는 면역 세포 서명을 기반으로 하는 간단한 진단 도구를 설계하는 데 도움이 될 것입니다.
2. 이것은 또한 심각한 상태가 진행되는 동안 면역 병인의 메커니즘에 대한 통찰력을 제공하고 새로운 치료 옵션을 위한 길을 열어줄 것입니다.

연구의 윤리적 문제 및 이러한 문제를 해결할 계획 - 없음