Papel de la microbiota fecal en la predicción del rechazo del injerto y la sepsis entre los receptores de trasplante de hígado de donante vivo en el primer año.

Objetivo primario:

Caracterizar los cambios en la microbiota fecal al año del trasplante hepático de donante vivo y su asociación con rechazo del injerto y sepsis.

Objetivos secundarios:

1. Incidencia de disfunción del injerto atribuible a sepsis, rechazo e infección por CMV en el primer año de LDLT.
2. Estudiar el perfil inmunológico pre-TH y su correlación con el rechazo postrasplante, requerimientos de inmunosupresión y restauración de la inmunosenescencia.
3. Correlacionar los cambios dinámicos en las células inmunitarias y las citocinas en la predicción del rechazo del injerto y la sepsis.

DISEÑO DEL ESTUDIO Tipo de estudio: estudio observacional prospectivo de centro único Población del estudio: 100 pacientes consecutivos que cumplen los criterios de elegibilidad y se someten a un trasplante de hígado de donante vivo en ILBS entre abril de 2020 y marzo de 2022.

Duración del estudio: 24 meses a partir de la fecha de aprobación de IEC

Metodología:

Identificación de la microbiota intestinal:

Extracción de ADN Todos los sujetos se someterán a la recolección de suero y heces el mismo día. Se recolectarán alrededor de 5 a 8 g de materia fecal. Para la extracción de ADN, se utilizará el kit QIAamp Fast DNA Stool Mini para muestras de heces.

Amplificación por PCR del gen 16s RNA Brevemente, la amplificación por PCR de las regiones hipervariables V3-V4 se realizará utilizando los cebadores 341F y 806R que contienen el código de barras específico de la muestra. El producto amplificado purificado (QIAGEN) se ejecutará en la plataforma MiSeq con lecturas de cebador de secuenciación personalizado 1 (R1), lectura 2 (R2) e índice.

Sangre completa: se recolectará sangre completa (5-10 ml). El plasma se separará por centrifugación a 2500 rpm. El plasma se almacenará a -80 °C en un biobanco (NLDB) hasta que se procese para la matriz de citocinas. La sangre restante se tratará con tampón de lisis de glóbulos rojos y se procesará para el análisis de células inmunitarias.

Inmunofenotipado para frecuencia/número absoluto de células inmunitarias: las células de la sangre entera se tiñerán con anticuerpos monoclonales marcados con fluorocromo específicos para los marcadores de superficie de los subconjuntos de células T (Th1, Th2, Th17, Treg), células reguladoras B mediante citometría de flujo y análisis será realizado por el software FCS express.

Cytokine Array: Las citocinas proinflamatorias (IL-1β) y antiinflamatorias (IL-10) se medirán en el plasma de los pacientes en estudio. El kit de matriz de citoquinas se adquirirá comercialmente y se realizará de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

ANÁLISIS ESTADÍSTICO

• Los datos se reportarán como media + DE
• Las variables categóricas se compararán mediante la prueba de chi-cuadrado o la prueba exacta de Fisher
• Las variables continuas normales se compararán mediante la prueba t de Student
• Las variables continuas no normales se compararán mediante la prueba de suma de rangos de Mann-Whitney (datos no apareados) o la prueba de Wilcoxon (datos apareados).
• La comparación entre grupos de variables cuantitativas se analizará mediante ANOVA. Se realizará un análisis de regresión de Cox para identificar factores pronósticos independientes para la función del injerto.

PUNTOS FINALES DEL ESTUDIO Punto final principal

• Desarrollo de sepsis, rechazo, infección por CMV
• Muerte

Puntos finales secundarios

• Complicaciones post TH que requieren intervenciones quirúrgicas
• retrasplante

Resultado esperado del proyecto:

1. Esto nos ayudará a diseñar herramientas de diagnóstico simples basadas en perfiles microbianos o firmas de células inmunitarias para el diagnóstico de disfunción del injerto y sepsis.
2. Esto también nos dará una idea del mecanismo de la patogenia inmunitaria durante el desarrollo de enfermedades graves y allanará el camino para nuevas opciones terapéuticas.

Cuestiones éticas en el estudio y planes para abordar estas cuestiones - Ninguno