Rolle der fäkalen Mikrobiota bei der Vorhersage von Transplantatabstoßung und Sepsis bei Empfängern einer Lebendspende-Lebertransplantation im ersten Jahr.
Rolle der fäkalen Mikrobiota bei der Vorhersage von Transplantatabstoßung und Sepsis bei Empfängern einer Lebendspende-Lebertransplantation im ersten Jahr – eine Beobachtungsstudie.
Effiziente immunsuppressive Therapie und verbesserte Operationstechniken haben die Lebertransplantation zu einer etablierten und lebensrettenden Behandlung gemacht. Die 1-Jahres-Überlebensrate beträgt ca. 85–90 %. Akute Zellabstoßung (ACR) ist eine der Hauptursachen für Leberfunktionsstörungen (LD) nach einer Lebertransplantation. Sie tritt bei 30 bis 70 % der transplantierten Patienten auf und kann möglicherweise zum Versagen des Allotransplantats führen. Neben ACR sind auch das Vorliegen einer Sepsis, Arzneimittelschäden, Virusinfektionen wie CMV oder das Wiederauftreten einer Virushepatitis weitere Ursachen für eine Transplantatdysfunktion. Labortests werden üblicherweise als weniger invasive Methoden zur Überwachung der Abstoßung von Allotransplantaten eingesetzt, sie sind jedoch nicht spezifisch für die Abstoßung und sind häufig auch bei anderen Arten von Transplantatdysfunktionen erhöht.
Bis heute gilt die immunsuppressive Therapie bei Lebertransplantatempfängern als eine Kunst, da es keine objektiven Messungen des Immunzustands gibt. Das therapeutische Medikamentenmonitoring hat bei der Beurteilung der Immunlage nur einen geringen Stellenwert und dient stets als unterstützender Leitfaden. Die Entwicklung spezifischer Immunüberwachungstests zur Messung des immunsuppressiven Nettozustands bei einem Transplantatempfänger würde ein individuelleres Therapieschema ermöglichen. Patienten mit veränderter Darmmikrobiota hätten ein höheres Infektionsrisiko und einen längeren Krankenhausaufenthalt. Probiotika könnten positive Auswirkungen auf die Transplantatabstoßung haben. Dysbiose aktiviert T-Zellen durch PAMPS und verursacht eine entzündliche Schädigung in der Transplantatleber. Die Studien zeigten, dass niedere Eubakterien, Bifidobacterium, Fäkalbakterien und Lactobacillus mit einer Fülle von Enterococcus und Enterobacteriaceae vorkommen. Nach der Transplantation erholten sich die meisten Fälle nahezu wieder vom Normalzustand.
Es ist bekannt, dass es im natürlichen Verlauf von ACLF oder dekompensierter Zirrhose eine Dysbiose gibt, die oft mit Komplikationen wie Endotoxämie, Sepsis, sich verschlimmerndem Leberversagen und schlechter Überlebensrate einhergeht. Dies hat dazu geführt, dass die Modulation der fäkalen Mikrobiota als neue Therapie in Betracht gezogen wird. Bei einer Lebertransplantation und der daraus resultierenden Genesung kommt es insgesamt zu Veränderungen im homöostatischen Milieu des Empfängers sowie im Immunmilieu, und das Gleiche kann sich auch auf die Darmflora auswirken. Es ist bekannt, dass die Leber einen Abdruck der residenten Darmflora aufweist. Das vorläufige Rattenmodell zeigte eine Veränderung der Darmflora, um die Entwicklung einer akuten Zellabstoßung vorherzusagen, bevor sie auftritt. Ebenso ist das Infektionsrisiko bei Transplantatempfängern mit verminderter mikrobieller Vielfalt nach einer Lebertransplantation höher. Allerdings sind die Daten dürftig und es besteht ein dringender Bedarf, den Mechanismus zu verstehen.
Die vorliegende Studie war angesichts der neuen Rolle der Darmflora und ihres Einflusses auf die Immunremodellierung für die Vorhersage von Infektionen und Abstoßungen erforderlich und könnte ein früher Biomarker für die Transplantatdysfunktion sein. Dies kann bei Empfängern einer Lebertransplantation verschiedene Ursachen haben und sich auf den gesamten Immunstatus auswirken. Die Einzigartigkeit der vorliegenden Studie besteht darin, den Mechanismus der Entwicklung von Sepsis oder Transplantatdysfunktion im Laufe der Zeit mithilfe von Hochdurchsatz-Tools zur Einzelzellanalyse im Vollblut und Veränderungen der Darmmikrobiota bei Lebertransplantatempfängern als Ursache für Transplantatdysfunktion zu verstehen erstes Jahr einer Lebendspende-Lebertransplantation.
Studienübersicht
Status
Detaillierte Beschreibung
Hauptziel:
Charakterisierung der Veränderungen der fäkalen Mikrobiota über ein Jahr nach der Lebertransplantation eines Lebendspenders und ihres Zusammenhangs mit Transplantatabstoßung und Sepsis.
Sekundäre Ziele:
- Inzidenz von Transplantatdysfunktionen aufgrund von Sepsis, Abstoßung und CMV-Infektion im ersten Jahr der LDLT.
- Untersuchung des immunologischen Profils vor LT und seiner Korrelation mit der Abstoßung nach der Transplantation, den Anforderungen an die Immunsuppression und der Wiederherstellung der Immunseneszenz.
- Korrelation der dynamischen Veränderungen in Immunzellen und Zytokinen bei der Vorhersage von Transplantatabstoßung und Sepsis.
STUDIENDESIGN Art der Studie – Einzelzentrum, prospektive Beobachtungsstudie. Studienpopulation – aufeinanderfolgende 100 Patienten, die die Zulassungskriterien erfüllen und sich zwischen April 2020 und März 2022 einer Lebendspendelebertransplantation in ILBS unterziehen.
Studiendauer - 24 Monate ab dem Datum der Genehmigung durch die IEC
Methodik:
Identifizierung der Darmmikrobiota:
DNA-Extraktion Bei allen Probanden wird am selben Tag eine Serum- und Stuhlentnahme durchgeführt. Es werden etwa 5–8 g Fäkalienmaterial gesammelt. Für die DNA-Extraktion wird das QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit für Stuhlproben verwendet.
PCR-Amplifikation des 16s-RNA-Gens Kurz gesagt, die PCR-Amplifikation der hypervariablen Regionen V3-V4 erfolgt unter Verwendung der Primer 341F und 806R, die den probenspezifischen Barcode enthalten. Das gereinigte, amplifizierte Produkt (QIAGEN) wird auf der MiSeq-Plattform mit benutzerdefinierten Sequenzierungsprimer-Reads 1 (R1), Read 2 (R2) und Index ausgeführt.
Vollblut: Es wird Vollblut (5–10 ml) entnommen. Das Plasma wird durch Zentrifugation bei 2500 U/min abgetrennt. Das Plasma wird bei -80 °C in der Biobank (NLDB) gelagert, bis es für das Zytokin-Array verarbeitet wird. Das verbleibende Blut wird mit RBC-Lysepuffer behandelt und für die Analyse der Immunzellen aufbereitet.
Immunphänotypisierung für Häufigkeit/absolute Anzahl von Immunzellen: Die Zellen im Vollblut werden mit spezifischen Fluorochrom-markierten monoklonalen Antikörpern für die Oberflächenmarker für T-Zell-Untergruppen (Th1, Th2, Th17, Tregs) und regulatorische B-Zellen mittels Durchflusszytometrie und Analyse gefärbt erfolgt über die FCS Express-Software.
Zytokin-Array: Die proinflammatorischen (IL-1β) und entzündungshemmenden Zytokine (IL-10) werden im Plasma der untersuchten Patienten gemessen. Das Zytokin-Array-Kit wird kommerziell beschafft und gemäß den Anweisungen des Herstellers hergestellt.
STATISTISCHE ANALYSE
- Die Daten werden als Mittelwert + Standardabweichung angegeben
- Kategoriale Variablen werden mit dem Chi-Quadrat-Test oder dem exakten Fisher-Test verglichen
- Normale kontinuierliche Variablen werden mit dem Student-t-Test verglichen
- Nicht normale kontinuierliche Variablen werden mit dem Mann-Whitney-Rangsummentest (ungepaarte Daten) oder dem Wilcoxon-Test (gepaarte Daten) verglichen.
- Der Vergleich zwischen Gruppen hinsichtlich quantitativer Variablen wird durch ANOVA analysiert. Eine Cox-Regressionsanalyse wird durchgeführt, um unabhängige Prognosefaktoren für die Transplantatfunktion zu identifizieren.
ENDPUNKTE DER STUDIE Primärer Endpunkt
- Entwicklung von Sepsis, Abstoßung, CMV-Infektion
- Tod
Sekundäre Endpunkte
- Post-LT-Komplikationen, die chirurgische Eingriffe erfordern
- Retransplantation
Erwartetes Ergebnis des Projekts:
- Dies wird uns bei der Entwicklung einfacher Diagnosetools helfen, die auf mikrobiellen Profilen oder Immunzellsignaturen zur Diagnose von Transplantatdysfunktionen und Sepsis basieren.
- Dies wird uns auch Einblicke in die Mechanismen der Immunpathogenese bei der Entwicklung schwerer Erkrankungen geben und den Weg für neuere Therapieoptionen ebnen.
Ethische Probleme in der Studie und Pläne, diese Probleme anzugehen – Keine
Studientyp
Einschreibung (Voraussichtlich)
Kontakte und Standorte
Studienkontakt
- Name: Dr Navin Kumar M, MD
- Telefonnummer: 01146300000
- E-Mail: navinktanvi10@gmail.com
Studienorte
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Delhi
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New Delhi, Delhi, Indien, 110070
- Rekrutierung
- Institute of Liver & Biliary Sciences
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Kontakt:
- Dr Navin Kumar, MD
- Telefonnummer: 01146300000
- E-Mail: navinktanvi10@gmail.com
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Teilnahmekriterien
Zulassungskriterien
Studienberechtigtes Alter
Akzeptiert gesunde Freiwillige
Studienberechtigte Geschlechter
Probenahmeverfahren
Studienpopulation
Beschreibung
Einschlusskriterien:
- Lebertransplantation eines Lebendspenders bei ALF, ACLF, Zirrhose und deren Komplikationen.
- Alter 12-75 Jahre
- Gültige Einwilligung
Ausschlusskriterien:
- Lebertransplantationen verstorbener Spender
- Neutransplantationen
- Simultane Leber-Nieren-Transplantation (SLKT)
Studienplan
Wie ist die Studie aufgebaut?
Designdetails
Was misst die Studie?
Primäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
|---|---|---|
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Entwicklung einer Sepsis
Zeitfenster: 1 Jahr
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Die Sepsis-Diagnose basiert auf positiven Kulturen des Patienten (Blut, Urin, Katheterspitze) und Infektionsherden durch Querschnittsbildgebung zu jedem Zeitpunkt
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1 Jahr
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Entwicklung der Ablehnung
Zeitfenster: 1 Jahr
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Die Abstoßungsdosis basiert auf der Transplantatbiopsie und der Histologie – bewertet anhand des REJECTION ACTIVITY INDEX (RAI).
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1 Jahr
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Entwicklung einer CMV-Infektion
Zeitfenster: 1 Jahr
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Die CMV-DNA-Diagnose erfolgt mittels RT-PCR-Technik
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1 Jahr
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Tod
Zeitfenster: 1 Jahr
|
1 Jahr
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Sekundäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Zeitfenster |
|---|---|
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Post-LT-Komplikationen, die chirurgische Eingriffe erfordern
Zeitfenster: 1 Jahr
|
1 Jahr
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Anzahl der Patienten, die sich einer Retransplantation unterziehen werden
Zeitfenster: 1 Jahr
|
1 Jahr
|
Mitarbeiter und Ermittler
Studienaufzeichnungsdaten
Haupttermine studieren
Studienbeginn (Tatsächlich)
Primärer Abschluss (Voraussichtlich)
Studienabschluss (Voraussichtlich)
Studienanmeldedaten
Zuerst eingereicht
Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat
Zuerst gepostet (Tatsächlich)
Studienaufzeichnungsaktualisierungen
Letztes Update gepostet (Tatsächlich)
Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt
Zuletzt verifiziert
Mehr Informationen
Begriffe im Zusammenhang mit dieser Studie
Zusätzliche relevante MeSH-Bedingungen
Andere Studien-ID-Nummern
- ILBS-FMT-02
Arzneimittel- und Geräteinformationen, Studienunterlagen
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Arzneimittelprodukt
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Geräteprodukt
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