Rollen til fekal mikrobiota i å forutsi graftavstøtning og sepsis blant mottakere av levertransplantasjon fra levende donorer det første året.

Hovedmål:

Å karakterisere de fekale mikrobiotaendringene over ett år etter levertransplantasjon fra levende donor og dens assosiasjon med transplantatavstøtning og sepsis.

Sekundære mål:

1. Forekomst av graftdysfunksjon som kan tilskrives sepsis, avstøtning og CMV-infeksjon i det første året med LDLT.
2. For å studere den pre-LT immunologiske profilen og dens korrelasjon med post-transplantasjonsavvisning, krav til immunsuppresjon og gjenoppretting av immunosenescens.
3. For å korrelere de dynamiske endringene i immunceller og cytokiner for å forutsi graftavvisning og sepsis.

STUDIEDESIGN Type studie - Enkeltsenter, prospektiv, observasjonsstudie Studiepopulasjon - påfølgende 100 pasienter som oppfyller kvalifikasjonskriteriene og gjennomgår levertransplantasjon fra levende donor i ILBS mellom april 2020 og mars 2022.

Studievarighet - 24 måneder fra datoen for godkjenning av IEC

Metodikk:

Identifikasjon av tarmmikrobiota:

DNA-ekstraksjon Alle forsøkspersoner vil gjennomgå serum- og avføringsprøve samme dag. Omtrent 5-8 g avføringsmateriale vil bli samlet inn. QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit for avføringsprøver vil bli brukt til DNA-ekstraksjon.

PCR-amplifisering av 16s RNA-genet Kort fortalt vil PCR-amplifisering av de hypervariable V3-V4-områdene gjøres ved å bruke 341F- og 806R-primerne som inneholder den prøvespesifikke strekkoden. Renset amplifisert produkt (QIAGEN), vil kjøres på MiSeq-plattformen med tilpasset sekvenseringsprimer som leser 1 (R1), les 2 (R2) og indeks.

Fullblod: Fullblod vil bli (5-10ml) samles inn. Plasma vil bli separert ved sentrifugering ved 2500 rpm. Plasma vil bli lagret ved -80C i biobank (NLDB) til det behandles for cytokinarray. Gjenværende blod vil bli behandlet med RBC-lysebuffer og vil bli behandlet for immuncelleanalyse.

Immunfenotyping for frekvens/absolutt antall immunceller: Cellene i fullblodet vil bli farget med spesifikke flurokrommerkede monoklonale antistoffer for overflatemarkørene for T-celleundergrupper (Th1,Th2, Th17, Tregs), B regulatoriske celler ved bruk av Flowcytometri og analyse vil bli gjort av FCS express programvare.

Cytokinearray: De pro-inflammatoriske (IL-1β) og antiinflammatoriske cytokinene (IL-10) vil bli målt i plasma til pasientene som studeres. Cytokinarraysettet vil bli anskaffet kommersielt og vil bli gjort i henhold til produsentens instruksjoner.

STATISTISK ANALYSE

• Data vil bli rapportert som gjennomsnitt + SD
• Kategoriske variabler vil bli sammenlignet ved hjelp av kjikvadrattesten eller Fisher eksakte test
• Normale kontinuerlige variabler vil bli sammenlignet med Student t-testen
• Ikke-normale kontinuerlige variabler vil bli sammenlignet ved å bruke Mann-Whitneys rangsum-test (uparede data) eller Wilcoxon-testen (parede data).
• Sammenligning mellom grupper på kvantitative variabler vil bli analysert ved ANOVA En Cox regresjonsanalyse vil bli utført for å identifisere uavhengige prognostiske faktorer for graftfunksjon.

STUDIE ENDEPUNKTER Primært sluttpunkt

• Utvikling av sepsis, avstøtning, CMV-infeksjon
• Død

Sekundære endepunkter

• Post LT-komplikasjoner som krever kirurgiske inngrep
• Retransplantasjon

Forventet resultat av prosjektet:

1. Dette vil hjelpe oss med å designe enkle diagnostiske verktøy basert på mikrobiell profilering eller immuncellesignaturer for diagnostisering av graftdysfunksjon og sepsis.
2. Dette vil også gi oss innsikt om mekanismen for immunpatogenese under utvikling av alvorlige tilstander, og dette vil bane vei for nyere terapeutiske alternativer.

Etiske problemstillinger i studien og planer om å ta opp disse problemene - Ingen