Ruolo del microbiota fecale nella previsione del rigetto dell'innesto e della sepsi tra i destinatari del trapianto di fegato da donatore vivente nel primo anno.
Ruolo del microbiota fecale nella previsione del rigetto dell'innesto e della sepsi tra i destinatari del trapianto di fegato da donatore vivente nel primo anno - Uno studio osservazionale.
Una terapia immunosoppressiva efficiente e tecniche chirurgiche migliorate hanno reso il trapianto di fegato un trattamento consolidato e salvavita. Il tasso di sopravvivenza a 1 anno è di circa l'85-90%. Il rigetto cellulare acuto (ACR) è una delle principali cause di disfunzione epatica (LD) dopo il trapianto di fegato, si verifica dal 30% al 70% dei pazienti trapiantati e può portare al fallimento dell'allotrapianto. Oltre all'ACR, anche la presenza di sepsi, danno da farmaci, infezioni virali come CMV o recidiva di epatite virale sono altre cause di disfunzione del trapianto. I test di laboratorio sono comunemente usati come metodi meno invasivi per monitorare il rigetto dell'allotrapianto, ma non sono specifici del rigetto e sono spesso elevati anche in altri tipi di disfunzione dell'innesto.
Fino ad oggi il regime immunosoppressivo nei riceventi di trapianto di fegato è considerato un'arte in assenza di misure oggettive dello stato immunitario. Il monitoraggio terapeutico dei farmaci ha scarso valore nella valutazione dello stato immunitario ed è sempre utilizzato come guida di supporto. Lo sviluppo di specifici test di monitoraggio immunitario per misurare lo stato immunosoppressivo netto in un ricevente di trapianto consentirebbe un regime terapeutico più individualizzato. I probiotici potrebbero mediare effetti benefici nel rigetto del trapianto. La disbiosi attiva le cellule T attraverso PAMPS e provoca il danno infiammatorio nel fegato del trapianto. Gli studi hanno mostrato che Eubacteria inferiore, Bifidobacterium, batterio fecale e Lactobacillus con abbondanza di Enterococcus e Enterobacteriaceae. Sono tornati quasi alla normalità dopo il trapianto nella maggior parte dei casi.
È noto che esiste una disbiosi nella storia naturale dell'ACLF o cirrosi scompensata, e spesso correlata a complicanze come endotossiemia, sepsi, peggioramento dell'insufficienza epatica e scarsa sopravvivenza. Ciò ha portato a considerare la modulazione del microbiota fecale come una terapia emergente. Trapianto di fegato e conseguente guarigione, c'è soprattutto un cambiamento nell'ambiente omeostatico del ricevente così come nell'ambiente immunitario e lo stesso può accadere anche alla flora intestinale. È risaputo che il fegato ha un'impronta della flora intestinale residente. Il modello preliminare del ratto ha mostrato un'alterazione della flora intestinale per prevedere lo sviluppo di un rigetto cellulare acuto prima che si verifichi. Allo stesso modo, il rischio di infezione è maggiore tra i riceventi di trapianto con ridotta diversità microbica dopo il trapianto di fegato. Tuttavia i dati sono scarsi e c'è un urgente bisogno di capire il meccanismo..
Il presente studio è stato reso necessario in considerazione del ruolo emergente della microflora intestinale e della sua influenza sul rimodellamento immunitario per la previsione di infezione, rigetto e può essere un biomarcatore precoce per la disfunzione del trapianto. Ciò può avere varie cause nei riceventi di trapianto di fegato insieme al suo impatto sullo stato immunitario generale. L'unicità del presente studio sarà comprendere il meccanismo di sviluppo della sepsi o della disfunzione del trapianto a tempo debito utilizzando strumenti ad alto rendimento di analisi a singola cellula nelle alterazioni del sangue intero e del microbiota intestinale tra i riceventi di trapianto di fegato come causa di disfunzione del trapianto in primo anno di trapianto di fegato da donatore vivo.
Panoramica dello studio
Stato
Descrizione dettagliata
Obiettivo primario:
Per caratterizzare i cambiamenti del microbiota fecale nell'arco di un anno dopo il trapianto di fegato da donatore vivente e la sua associazione con il rigetto del trapianto e la sepsi.
Obiettivi secondari:
- Incidenza di disfunzione del trapianto attribuibile a sepsi, rigetto e infezione da CMV nel primo anno di LDLT.
- Studiare il profilo immunologico pre-LT e la sua correlazione con il rigetto post-trapianto, i requisiti di immunosoppressione e il ripristino dell'immunosenescenza.
- Per correlare i cambiamenti dinamici nelle cellule immunitarie e nelle citochine nel predire il rigetto del trapianto e la sepsi.
DISEGNO DELLO STUDIO Tipo di studio - Studio monocentrico, prospettico, osservazionale Popolazione dello studio - 100 pazienti consecutivi che soddisfano i criteri di ammissibilità e sottoposti a trapianto di fegato da donatore vivente in ILBS tra aprile 2020 e marzo 2022.
Durata dello studio - 24 mesi dalla data di approvazione dell'IEC
Metodologia:
Identificazione del microbiota intestinale:
Estrazione del DNA Tutti i soggetti saranno sottoposti a raccolta di siero e feci lo stesso giorno. Verranno raccolti circa 5-8 g di materiale fecale. Per l'estrazione del DNA verrà utilizzato il kit QIAamp Fast DNA Stool Mini per campioni di feci.
Amplificazione PCR del gene 16s RNA In breve, l'amplificazione PCR delle regioni ipervariabili V3-V4 sarà effettuata utilizzando i primer 341F e 806R contenenti il codice a barre specifico del campione. Il prodotto amplificato purificato (QIAGEN) verrà eseguito sulla piattaforma MiSeq con primer di sequenziamento personalizzato letture 1 (R1), letture 2 (R2) e indice.
Sangue intero: Verrà raccolto sangue intero (5-10 ml). Il plasma sarà separato mediante centrifugazione a 2500rpm. Il plasma sarà conservato a -80C in biobanca (NLDB) fino al trattamento per l'array di citochine. Il sangue rimanente verrà trattato con tampone di lisi RBC e processato per l'analisi delle cellule immunitarie.
Immunofenotipizzazione per frequenza/numero assoluto di cellule immunitarie: le cellule nel sangue intero saranno colorate con specifici anticorpi monoclonali marcati con flurocromo per i marcatori di superficie per i sottogruppi di cellule T (Th1, Th2, Th17, Tregs), cellule B regolatrici mediante citometria a flusso e analisi sarà fatto dal software FCS express.
Cytokine Array: Le citochine pro-infiammatorie (IL-1β) e antinfiammatorie (IL-10) saranno misurate nel plasma dei pazienti in studio. Il kit dell'array di citochine sarà acquistato commercialmente e sarà eseguito secondo le istruzioni del produttore.
ANALISI STATISTICA
- I dati saranno riportati come media + DS
- Le variabili categoriali saranno confrontate utilizzando il test chi-quadro o il test esatto di Fisher
- Le normali variabili continue saranno confrontate utilizzando il test t di Student
- Le variabili continue non normali saranno confrontate utilizzando il test della somma dei ranghi di Mann-Whitney (dati non appaiati) o il test di Wilcoxon (dati appaiati).
- Il confronto tra i gruppi sulle variabili quantitative sarà analizzato mediante ANOVA. Verrà eseguita un'analisi di regressione di Cox per identificare fattori prognostici indipendenti per la funzione del trapianto.
PUNTI FINALI DELLO STUDIO Punto finale primario
- Sviluppo di sepsi, rigetto, infezione da CMV
- Morte
Punti finali secondari
- Complicanze post LT che richiedono interventi chirurgici
- Ritrapianto
Esito atteso del progetto:
- Questo ci aiuterà a progettare semplici strumenti diagnostici basati sulla profilazione microbica o sulle firme delle cellule immunitarie per la diagnosi di disfunzione del trapianto e sepsi.
- Questo ci darà anche informazioni sul meccanismo della patogenesi immunitaria durante lo sviluppo di condizioni gravi e questo aprirà la strada a nuove opzioni terapeutiche.
Questioni etiche nello studio e piani per affrontarle - Nessuna
Tipo di studio
Iscrizione (Anticipato)
Contatti e Sedi
Contatto studio
- Nome: Dr Navin Kumar M, MD
- Numero di telefono: 01146300000
- Email: navinktanvi10@gmail.com
Luoghi di studio
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-
Delhi
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New Delhi, Delhi, India, 110070
- Reclutamento
- Institute of Liver & Biliary Sciences
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Contatto:
- Dr Navin Kumar, MD
- Numero di telefono: 01146300000
- Email: navinktanvi10@gmail.com
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Criteri di partecipazione
Criteri di ammissibilità
Età idonea allo studio
Accetta volontari sani
Sessi ammissibili allo studio
Metodo di campionamento
Popolazione di studio
Descrizione
Criterio di inclusione:
- Donatore vivente Trapianto di fegato per ALF, ACLF, cirrosi e sue complicanze.
- Età 12-75 anni
- Consenso valido
Criteri di esclusione:
- Trapianti di fegato da donatore deceduto
- Ritrapianti
- Trapianti simultanei di fegato e rene (SLKT)
Piano di studio
Come è strutturato lo studio?
Dettagli di progettazione
Cosa sta misurando lo studio?
Misure di risultato primarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
|---|---|---|
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Sviluppo di sepsi
Lasso di tempo: 1 anni
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La diagnosi di sepsi si basa su colture positive del paziente (sangue, urina, punta del catetere), focolai di infezione mediante imaging in sezione trasversale in qualsiasi momento
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1 anni
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Sviluppo del rifiuto
Lasso di tempo: 1 anni
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La dosgnosi del rigetto si basa sulla biopsia e sull'istologia dell'innesto - valutata dal REJECTION ACTIVITY INDEX (RAI)
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1 anni
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Sviluppo dell'infezione da CMV
Lasso di tempo: 1 anni
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La diagnosi del DNA di CMV avviene mediante tecnica RT PCR
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1 anni
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Morte
Lasso di tempo: 1 anni
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1 anni
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Misure di risultato secondarie
Misura del risultato |
Lasso di tempo |
|---|---|
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Complicanze post LT che richiedono interventi chirurgici
Lasso di tempo: 1 anni
|
1 anni
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Numero di pazienti che saranno sottoposti a ritrapianto
Lasso di tempo: 1 anni
|
1 anni
|
Collaboratori e investigatori
Studiare le date dei record
Studia le date principali
Inizio studio (Effettivo)
Completamento primario (Anticipato)
Completamento dello studio (Anticipato)
Date di iscrizione allo studio
Primo inviato
Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità
Primo Inserito (Effettivo)
Aggiornamenti dei record di studio
Ultimo aggiornamento pubblicato (Effettivo)
Ultimo aggiornamento inviato che soddisfa i criteri QC
Ultimo verificato
Maggiori informazioni
Termini relativi a questo studio
Termini MeSH pertinenti aggiuntivi
Altri numeri di identificazione dello studio
- ILBS-FMT-02
Informazioni su farmaci e dispositivi, documenti di studio
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