HPV DNA を使用したモニタリングと早期反応評価 - HPV 陽性のどがん (MER-HPV) 患者に関する研究 (MER-HPV)

バックグラウンド：

中咽頭癌 (OPC) の発生率は年々増加しています。 スウェーデンでは 5% で、主に男性です。 腫瘍の 80% 以上が HPV (ヒトパピローマウイルス) 陽性です。 そのため、血漿中の循環腫瘍 HPV DNA (ctHPVDNA) を測定することは、治療反応のマーカーとして、また監視の補助として魅力的な可能性となっています。

スウェーデンでは、OPC の根治的治療を目的とした患者は通常、(化学) 放射線療法 (c)RT で治療されます。 ごく一部は、補助放射線の有無にかかわらず手術を受けます。 決定的な (c)RT 後の治療評価のゴールド スタンダードは、(c)RT 完了の 12 週間後に実施される陽電子放出断層撮影-コンピューター断層撮影法 (PET-CT) です。 PET-CT の結果は、診断時にリンパ節転移陽性の患者の頸部郭清の必要性を判断する上で最も重要です。

ctHPVDNA に関する以前の出版物によると、HPV 陽性 OPC 患者の日常的な臨床診療における ctHPVDNA の価値をさらに調査するには、次の理由があります。

1. ctHPVDNA は、あいまいな治療評価応答として評価された PET-CT 結果の問題を制限するか、ほとんど区別する可能性があります。 PET-CTの結果とctHPVDNA解析を組み合わせると精度が上がるようです。
2. ctHPVDNA は、自覚症状が発生する前、および臨床検査で明らかになる前に、再発を検出する大きな可能性を秘めています。 このグループの患者における遠隔転移の早期発見は、HPV 陰性患者と比較してサルベージ療法後の全生存期間が延長される可能性があるため、価値があるかもしれません。 また、小さな腫瘍量が検出されれば、生存率がさらに向上する可能性があります。
3. 血漿中の ctHPVDNA による再発の正確な検出は、予定されたフォローアップの予定を減らし、代わりに血漿サンプルで患者を追跡するという議論につながる可能性があります。

生検でOPCが証明されたすべての患者は、スコーネ大学病院の耳鼻咽喉科-頭頸部外科（ORL-HNS）に紹介され、集学的腫瘍委員会（MDT）で決定された決定的な治療が計画されています。参加するよう招待されます。 HPV 陽性腫瘍を有する患者のみが対象となります。

主要エンドポイントについて計算されたサンプルサイズ:

1 か月で検出可能な ctHPVDNA の 65% の感度は、治療完了後 2 年以内の残存腫瘍または再発腫瘍を予測するための臨床的価値があると判断されました。 患者の 15% は、一次 (c)RT 後に完全寛解に達しないか、2 年間の追跡期間中に再発すると推定されました。 したがって、少なくとも 65% の感度には、80% の検出力を持つ 150 人の患者のサンプルサイズが必要です。 Clopper-Pearson を使用して、95% の二項 CI を計算しました。

スウェーデンの OPC の疫学によると、患者の 2/3 は男性であると予想されます。

治療中の手順と ctHPVDNA サンプル:

患者は、腫瘍科/科での最初の訪問時に研究の口頭および書面による情報を受け取ります。 ORLの。

インフォームドコンセントは、腫瘍科で収集されます。 患者は5年間追跡されます。 研究は、最後に含まれた患者が治療後 3 年間追跡された時点で終了します。

ctHPVDNA分析用の血漿サンプルは、(c)RT開始前または手術前に収集されます。

毎週のサンプル、すなわち 7 は、放射線療法 (RT) の過程で計画されています。

外科的に治療された患者では、2 つのサンプルが収集されます。 1回目は術後1日目、2回目は術後3日目。 患者にアジュバントが推奨される場合 (c) RT 毎週のサンプルを上記のように収集します。

治療評価：

治療の評価と監視のために、血漿ctHPVDNAは、治療完了の1か月後に分析され、その後、最初の2年間は3か月ごと、治療の2〜5年後は6か月ごと、つまり、予定されたフォローアップの予約と同時に分析されます。国のガイドラインに。

(C)RT の 3 か月後の治療評価では、ctHPVDNA のレベルは、治療反応の評価のための PET CT への追加情報として考慮されます。 PET-CT が NI-RADS 1-2 と評価されたが、ctHPVDNA レベルが治療終了時のレベルと比較して増加している場合、追加の精査が推奨されるかどうかを決定するために 2 週間後に新しいテストが実行されます。 完全な PET CT 反応 (すなわち、NI-RADS 1-2) と ctHPVDNA の検出不可能なレベルを持つ患者は、フォローアップレジメンに直接進みます。 追加の精密検査、例えば、再撮影やその他のさらなる検査のタイミングは、MDT の裁量に委ねられます。

一次手術の 3 か月後の治療評価では、ctHPVDNA のレベルが上昇すると、2 週間後に確認テストが行​​われ、精密検査が必要かどうかが決定されます。 患者のctHPVDNAレベルが低下している場合、参加者はフォローアップレジメンに進みます。

フォローアップ中 (つまり、6 か月以降)、ctHPVDNA 検査の陽性は、2 週間後の新しい検査で確認されます。 検出可能な ctHPVDNA レベルの確認が達成された場合、MDT の裁量で PET CT およびさらなる検査を含む再発検査が開始され、それに応じてスケジュールされます。

ベースラインおよび追跡データ:

ベースライン データには、年齢、性別、喫煙状況、以前の頭頸部がん (HNC)、診断日、原発腫瘍サブサイト、TNM 分類/ステージ、p16 ステータス、原発腫瘍の HPV サブタイプ、治療前の ctHPVDNA のレベルが含まれます。

追跡データには、受けた治療、治療後 3 か月の臨床反応、予定された臨床検査での臨床状態、再発の臨床的疑いに関する追加検査、NI-RADS による治療後 12 週間での PET-CT 反応、結果が含まれます。 HNC、ctHPVDNA i 血漿、治療を中止する理由、および/または予定された検査を終了する理由、再発、死亡日、死因、5 年間の追跡調査時または研究が終了した時点での疾患の有無.

再発：

患者が残存腫瘍または治癒目的で計画された再発と診断された場合、ctHPVDNA の血漿サンプル計画が再開されます。 再発後に緩和治療が開始された場合、それ以上の血漿サンプルは収集されません。 再発は、細胞診または生検でがんが確認された場合、または画像検査で進行性疾患が確認された場合に診断されます。 細胞診または生検が行われた日付が再発日となります。 患者が細胞診または生検で確認するのに適していないと判断された場合、放射線学的に定義された再発の最初の疑いが再発日として機能します。

HPV-DNA 分析の方法:

原発腫瘍からの HPV-DNA タイプの同定と定量化、および各患者からの血漿中の ctHPV-DNA 定量化は、Luminex と ddPCR でそれぞれ実行されます。 ルミネックスは微生物学科で行われ、デジタル液滴ポリメラーゼ連鎖反応（ddPCR）はルンドの分子診断センター（CMD）で行われます。

原発腫瘍:

腫瘍サンプルは、ホルマリンで、ルンドの微生物学科に送られます。 その後、ホルマリン固定パラフィン包埋 (FFPE) 腫瘍組織の切片が微生物学科に届けられます。 ホルマリン固定パラフィン包埋 (FFPE) 組織からの DNA は、微生物学科で確立された標準的な方法に従って抽出されます。 HPV タイプは、PCR とそれに続く Luminex ベースのジェノタイピングによって決定されます。 腫瘍が HPV 陽性の場合、定量的なウイルス負荷 (ヒト細胞あたりの HPV コピー数) は、腫瘍で示された HPV タイプに特異的なプライマーとプローブを含む ddPCR によって決定されます。

プラズマ：

血液サンプル 8.5mL がバキュテナーチューブ (BD ACD-A チューブ) に採取され、ルンドの微生物学科に送られます。 血漿は、微生物学科で 1700 xRPM の遠心分離によって分離されます。 次いで、ＤＳＰ Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ＤＮＡ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ＱＩＡｓｙｍｐｈｏｎｙロボットによって血漿からｃｔＤＮＡを自動的に抽出する（３ｍＬ入力、６０μＬ出力）。 腫瘍で実証されたHPVタイプに特異的なプライマーおよびプローブを用いたHPVタイプ特異的ddPCRを実施して、ウイルス量(血漿1mLあたりのHPVコピー数)を決定する。

データ監視:

この研究は、一部は探索的であり、一部は病気の状態を監視する方法として ctHPVDNA の評価として実施されています。 悪影響は予想されません。 監視委員会や停止ガイドラインはありません。 50人の患者を組み入れた後、組み入れペースを確保し、予期しない問題を評価するために中間分析が行われます。 内部検証が実行されます。