使用 HPV DNA 进行监测和早期反应评估 - 一项针对 HPV 阳性喉癌 (MER-HPV) 患者的研究 (MER-HPV)

背景：

口咽癌 (OPC) 的发病率逐年增加。 5% 在瑞典，主要是男性。 超过 80% 的肿瘤为 HPV（人乳头瘤病毒）阳性。 出于这个原因，测量血浆中的循环肿瘤 HPV DNA (ctHPVDNA) 作为治疗反应的标志物和作为监测的辅助手段已成为一种有吸引力的可能性。

在瑞典，打算进行 OPC 根治性治疗的患者通常接受（化疗）放疗 (c)RT。 一小部分人在有或没有辅助放疗的情况下接受手术。 确定性 (c)RT 后治疗评估的金标准是在 (c)RT 完成后 12 周进行的正电子发射断层扫描-计算机断层扫描 (PET-CT)。 PET-CT 结果对于确定诊断时淋巴结阳性疾病患者是否需要进行颈部清扫术最为重要。

根据之前关于 ctHPVDNA 主题的出版物，有以下理由进一步探讨 ctHPVDNA 在 HPV 阳性 OPC 患者常规临床实践中的价值：

1. ctHPVDNA 可能会限制或几乎区分 PET-CT 结果评估为模棱两可的治疗评估反应的问题。 PET-CT 结果和 ctHPVDNA 分析的结合似乎可以提高准确性。
2. ctHPVDNA 具有在主观症状出现之前和在临床检查中变得明显之前检测复发的巨大潜力。 在这组患者中早期发现远处转移可能很有价值，因为与 HPV 阴性患者相比，他们在挽救治疗后有可能延长总生存期。 并且检测到小的肿瘤负荷可能会进一步提高生存率。
3. 准确检测血浆中 ctHPVDNA 的复发可能会引发关于减少定期随访预约并转而使用血浆样本跟踪患者的讨论。

所有经活组织检查证实为 OPC 的患者都将被转诊至斯科讷大学医院耳鼻喉科-头颈外科 (ORL-HNS) 科，并计划根据多学科肿瘤委员会 (MDT) 的决定接受最终治疗。 只有患有 HPV 阳性肿瘤的患者才有资格入选。

为主要终点计算的样本量：

1 个月时可检测到的 ctHPVDNA 的灵敏度为 65% 被认为具有预测治疗完成后两年内残留或复发肿瘤的临床价值。 估计有 15% 的患者在初次 (c)RT 后未达到完全缓解或在两年随访期间复发。 因此，至少 65% 的灵敏度需要 150 名患者的样本量和 80% 的功效。 Clopper-Pearson 用于计算 95% 的二项式置信区间。

根据瑞典 OPC 的流行病学，预计 2/3 的患者将是男性。

治疗期间的程序和 ctHPVDNA 样本：

患者将在首次访问肿瘤科/肿瘤科时收到有关该研究的口头和书面信息。 ORL。

将在肿瘤科收集知情同意书。 这些患者将被随访五年。 当最后一名纳入的患者在治疗后随访三年时，该研究将结束。

将在 (c)RT 开始或手术前收集用于 ctHPVDNA 分析的血浆样本。

在放疗 (RT) 过程中计划每周采样一次，即七次。

在接受手术治疗的患者中，将收集两个样本。 第一次在术后第 1 天，第二次在术后第 3 天。 如果建议患者接受辅助 (c)RT，则每周收集样本，如上所述。

治疗评价：

对于治疗评估和监测，血浆 ctHPVDNA 将在治疗完成后一个月进行分析，然后在前两年每三个月进行一次分析，治疗后第二至五年每六个月进行一次分析，即与根据到国家指导方针。

对于 (C)RT 后三个月的治疗评估，ctHPVDNA 的水平将被视为 PET CT 的附加信息，用于评估治疗反应。 如果 PET-CT 被评估为 NI-RADS 1-2，但 ctHPVDNA 水平与治疗结束时的水平相比有所增加，则两周后将进行新的测试以决定是否建议进行额外的检查。 具有完全 PET CT 反应（即 NI-RADS 1-2）和不可检测水平的 ctHPVDNA 的患者将直接进行后续治疗。 额外的检查，例如重复成像或其他进一步检查的时间将由 MDT 自行决定。

对于初次手术后三个月的治疗评估，ctHPVDNA 水平的增加将促使两周后进行确认测试，以确定是否需要进行后续检查。 如果患者的 ctHPVDNA 水平下降，参与者将继续进行后续治疗。

在随访期间（即从六个月及以后），将在两周后通过新测试确认 ctHPVDNA 测试呈阳性。 如果确认可检测到 ctHPVDNA 水平，将启动复发检查，包括 PET CT 和进一步检查，由 MDT 酌情决定并相应安排。

基线和后续数据：

基线数据包括年龄、性别、吸烟状况、任何既往头颈癌 (HNC)、诊断日期、原发肿瘤亚部位、TNM 分类/阶段、p16 状态、原发肿瘤中的 HPV 亚型、治疗前的 ctHPVDNA 水平。

随访数据包括接受的治疗、治疗后三个月的临床反应、预定临床检查的临床状态以及临床怀疑复发的额外检查、治疗后 12 周时根据 NI-RADS 的 PET-CT 反应、任何与 HNC、ctHPVDNA i 血浆、中止治疗和/或终止预定审查的原因、任何复发、死亡日期、死因、在五年随访或研究结束时有或无疾病存活的任何额外影像学.

复发：

如果患者被诊断出有残留肿瘤或计划复发，则将重新开始 ctHPVDNA 血浆样本方案。 如果在复发后开始姑息治疗，则不会再收集血浆样本。 当阳性细胞学或活组织检查证实癌症，或者如果在影像学上证实进行性疾病，则诊断为复发。 进行细胞学或活检的日期将作为复发日期。 如果认为患者不适合通过细胞学或活检进行确认，则首次怀疑放射学定义的复发将作为复发日期。

HPV-DNA分析方法：

分别使用 Luminex 和 ddPCR 对每位患者的原发性肿瘤进行 HPV-DNA 类型鉴定和定量，以及血浆中的 ctHPV-DNA 定量。 Luminex 在微生物学系进行，数字液滴聚合酶链反应 (ddPCR) 在隆德分子诊断中心 (CMD) 进行。

原发肿瘤：

福尔马林中的肿瘤样本被送到隆德微生物学系。 然后将福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 肿瘤组织的切片送到微生物学系。 福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 组织的 DNA 将根据微生物学系既定的标准方法提取。 HPV 类型将通过 PCR 确定，然后进行基于 Luminex 的基因分型。 如果肿瘤是 HPV 阳性，定量病毒载量（每个人类细胞的 HPV 拷贝数）将通过 ddPCR 确定，其中包含对肿瘤中显示的 HPV 类型具有特异性的引物和探针。

等离子体：

血样 8.5mL，收集在真空采血管（BD ACD-A 管）中并送往隆德微生物学系。 在微生物学系以 1700 xRPM 离心分离血浆。 然后 ctDNA 由 QIAsymphony 机器人使用 DSP 循环 DNA 试剂盒（Qiagen）（3 mL 输入 60 uL 输出）自动从血浆中提取。 HPV 类型特异性 ddPCR，使用肿瘤中显示的 HPV 类型特异性的引物和探针，将进行以确定病毒载量（每毫升血浆的 HPV 拷贝数）。

数据监控：

该研究部分是探索性的，部分是作为对 ctHPVDNA 的评估作为监测疾病状态的一种方式进行的。 预计不会产生不良影响。 没有监督委员会或停止指南。 纳入 50 名患者后将进行中期分析，以确保纳入速度并评估意外问题。 将进行内部验证。