Seuranta ja varhaisen vasteen arviointi HPV DNA:ta käyttämällä - Tutkimus potilaista, joilla on HPV-positiivinen kurkkusyöpä (MER-HPV) (MER-HPV)

Tausta:

Orofaryngeaalisen karsinooman (OPC) ilmaantuvuus lisääntyy vuosittain noin. 5 % Ruotsissa, pääasiassa miehiä. Yli 80 % kasvaimista on HPV (ihmisen papilloomavirus) -positiivisia. Tästä syystä verenkierrossa olevan kasvaimen HPV-DNA:n (ctHPVDNA) mittaamisesta plasmassa hoitovasteen merkkinä ja seurannan lisänä on tullut houkutteleva mahdollisuus.

Ruotsissa OPC:n parantavaan hoitoon tarkoitettuja potilaita hoidetaan yleensä (kemo)sädehoidolla (c)RT. Pieni osa joutuu leikkaukseen joko adjuvanttisäteilyn kanssa tai ilman. Kultastandardi hoidon arvioinnissa lopullisen (c)RT:n jälkeen on positroniemissiotomografia-tietokonetomografia (PET-CT), joka suoritetaan 12 viikkoa (c)RT:n päättymisen jälkeen. PET-CT-tulos on tärkein määritettäessä niskan dissektion tarve potilailla, joilla on solmukohtapositiivinen sairaus diagnoosin yhteydessä.

Aiempien ctHPVDNA:ta koskevien julkaisujen mukaan on seuraavat syyt tutkia tarkemmin ctHPVDNA:n arvoa rutiininomaisessa kliinisessä käytännössä potilailla, joilla on HPV-positiivinen OPC:

1. ctHPVDNA saattaa rajoittaa tai melkein erottaa ongelman, kun PET-CT-tulokset arvioidaan epäselväksi hoidon arviointivasteeksi. PET-CT-tuloksen ja ctHPVDNA-analyysin yhdistelmä näyttää lisäävän tarkkuutta.
2. ctHPVDNA:lla on suuri potentiaali havaita uusiutumiset ennen subjektiivisten oireiden ilmaantumista ja ennen kuin se tulee ilmeiseksi kliinisessä tutkimuksessa. Kaukaisten etäpesäkkeiden varhainen havaitseminen tässä potilasryhmässä voi olla arvokasta, koska heillä on mahdollisuus pidentää kokonaiseloonjäämistä pelastushoidon jälkeen verrattuna HPV-negatiivisiin potilaisiin. Ja pienen kasvaimen havaitseminen saattaa parantaa eloonjäämistä entisestään.
3. CtHPVDNA:n uusiutumisen tarkka havaitseminen plasmassa saattaa johtaa keskusteluun suunniteltujen seuranta-aikojen vähentämisestä ja sen sijaan potilaiden seurannasta plasmanäytteillä.

Kaikki potilaat, joilla on biopsialla todistettu OPC, joka on lähetetty Skånen yliopistollisen sairaalan korva- ja kaulakirurgian osastolle (ORL-HNS) ja joille on suunniteltu lopullista hoitoa monitieteisen tuumorilautakunnan (MDT) päätöksen mukaisesti. Vain potilaat, joilla on HPV-positiivinen kasvain, voidaan ottaa mukaan.

Ensisijaiselle päätepisteelle laskettu otoskoko:

65 %:n herkkyys havaittavalle ctHPVDNA:lle yhden kuukauden kohdalla päätettiin olevan kliinistä arvoa jäljellä olevan tai uusiutuvan kasvaimen ennustamisessa kahden vuoden sisällä hoidon päättymisestä. Arvioiden mukaan 15 % potilaista ei saavuttanut täydellistä remissiota primaarisen (c)RT:n jälkeen tai kärsivät uusiutumisesta kahden vuoden seurantajakson aikana. Vastaavasti vähintään 65 %:n herkkyys vaatii 150 potilaan otoskoon, jonka teho on 80 %. Clopper-Pearsonia käytettiin laskemaan 95 %:n binomiaalinen CI.

OPC:n epidemiologian mukaan Ruotsissa odotetaan, että 2/3 potilaista on miehiä.

Toimenpide ja ctHPVDNA-näytteet hoidon aikana:

Potilaat saavat suulliset ja kirjalliset tiedot tutkimuksesta ensimmäisellä käynnillään onkologian osastolla/osastolla. ORL:sta.

Tietoinen suostumus kerätään syöpätautien osastolta. Potilaita seurataan viiden vuoden ajan. Tutkimus päättyy, kun viimeistä mukana olevaa potilasta on seurattu kolmen vuoden ajan hoidon jälkeen.

Plasmanäytteet ctHPVDNA-analyysiä varten kerätään ennen (c)RT-aloitusta tai ennen leikkausta.

Sädehoidon (RT) aikana suunnitellaan viikoittaisia ​​näytteitä, eli seitsemän.

Kirurgisesti hoidetuilta potilailta otetaan kaksi näytettä. Ensimmäinen postoperatiivisena päivänä 1 ja toinen leikkauksen jälkeisenä päivänä 3. Jos potilaalle suositellaan adjuvanttia (c)RT, viikoittaiset näytteet otetaan edellä kuvatulla tavalla.

Hoidon arviointi:

Hoidon arviointia ja seurantaa varten plasman ctHPVDNA analysoidaan kuukauden kuluttua hoidon päättymisestä ja sen jälkeen kolmen kuukauden välein kahden ensimmäisen vuoden aikana ja kuuden kuukauden välein 2-5 hoidon jälkeen, eli samaan aikaan kuin aikataulun mukaiset seurantakäynnit. kansallisiin ohjeisiin.

Hoidon arvioinnissa kolmen kuukauden kuluttua (C)RT:n jälkeen ctHPVDNA:n tasot otetaan huomioon lisätietona PET CT:lle hoitovasteen arvioimiseksi. Jos PET-CT on arvioitu NI-RADS 1-2:ksi, mutta ctHPVDNA-taso nousee hoidon lopun tasoon verrattuna, uusi testi tehdään kahden viikon kuluttua sen päättämiseksi, onko lisäkäsittelyn suositus. Potilaat, joilla on täydellinen PET CT -vaste (eli NI-RADS 1-2) ja joilla on havaittamattomia ctHPVDNA-tasoja, siirtyvät suoraan seurantaohjelmaan. Lisäkäsittelyt, kuten toistetun kuvantamisen tai muiden lisätutkimusten ajoitus, on MDT:n harkinnassa.

Hoidon arviointia varten kolmen kuukauden kuluttua primaarisesta leikkauksesta ctHPVDNA:n lisääntyminen edellyttää varmistustestiä kaksi viikkoa myöhemmin, jotta voidaan päättää, onko hoito aiheellista. Jos potilaan ctHPVDNA-tasot laskevat, osallistuja jatkaa seuranta-ohjelmaan.

Seurannan aikana (eli kuuden kuukauden kuluttua ja siitä eteenpäin) positiivinen ctHPVDNA-testi varmistetaan uudella testillä kahden viikon kuluttua. Jos havaittavissa olevat ctHPVDNA-tasot varmistetaan, aloitetaan uusiutumistutkimus, mukaan lukien PET-CT ja lisätutkimukset MDT:n harkinnan mukaan ja ajoitetaan sen mukaisesti.

Perus- ja seurantatiedot:

Perustietoihin kuuluvat ikä, sukupuoli, tupakointitila, mikä tahansa aikaisempi pään ja kaulan syöpä (HNC), diagnoosipäivämäärä, primaarisen kasvaimen alakohta, TNM-luokitus/vaihe, p16-tila, HPV-alatyyppi primaarisessa kasvaimessa, ctHPVDNA-tasot ennen hoitoa.

Seurantatiedot sisältävät saadun hoidon, kliinisen vasteen kolme kuukautta hoidon jälkeen, kliinisen tilan suunnitelluissa kliinisissä tarkasteluissa sekä lisätarkistuksia kliinisen uusiutumisen epäilyn varalta, PET-CT-vasteen 12 viikon kuluttua hoidon jälkeen NI-RADS:n mukaan, tulokset mahdolliset lisäkuvaukset, jotka liittyvät HNC:hen, ctHPVDNA i -plasmaan, syihin hoidon keskeyttämiseen ja/tai suunniteltujen tarkistusten lopettamiseen, uusiutumiseen, kuolinpäivämäärään, kuolinsyyn, elossa sairauden kanssa tai ilman viiden vuoden seurannan tai tutkimuksen päätyttyä .

Toistuminen:

Jos potilaalla diagnosoidaan jäännöskasvain tai uusiutumista suunnitellaan parantavaa tarkoitusta varten, ctHPVDNA:n plasmanäytekaavio aloitetaan uudelleen. Jos palliatiivinen hoito aloitetaan uusiutumisen jälkeen, lisää plasmanäytteitä ei oteta. Uusiutuminen diagnosoidaan, kun positiivinen sytologia tai biopsia vahvistaa syövän tai jos etenevä sairaus varmistetaan kuvantamisella. Päivämäärä, jolloin sytologia tai biopsia tehtiin, toimii uusiutumispäivänä. Ensimmäinen epäilys radiologian määritellystä uusiutumisesta toimii uusiutumispäivänä, jos potilas katsotaan kelpaamattomaksi sytologiaan tai biopsiaan.

HPV-DNA-analyysimenetelmä:

HPV-DNA-tyypin tunnistaminen ja kvantifiointi primaarisesta kasvaimesta ja ctHPV-DNA:n kvantifiointi plasmassa, jokaiselta potilaalta, suoritetaan Luminexilla ja vastaavasti ddPCR:llä. Luminex suoritetaan mikrobiologian laitoksella ja digitaalinen pisarapolymeraasiketjureaktio (ddPCR) Center for Molecular Diagnosticsissa (CMD), Lundissa.

Primaarinen kasvain:

Formaliinissa oleva kasvainnäyte lähetetään Dept. of Microbiology, Lundiin. Sitten leikkeitä formaliinilla kiinnitetystä parafiiniin upotetusta (FFPE) kasvainkudoksesta toimitetaan Dept. of Microbiologylle. DNA formaliinilla kiinnitetystä parafiiniin upotetusta (FFPE) kudoksesta uutetaan vakiintuneiden standardimenetelmien mukaisesti Dept. of Microbiologyssa. HPV-tyyppi määritetään PCR:llä, jota seuraa Luminex-pohjainen genotyypitys. Jos kasvain on HPV-positiivinen, kvantitatiivinen viruskuorma (HPV-kopioiden lukumäärä ihmissolua kohti) määritetään ddPCR:llä, joka sisältää alukkeita ja koettimia, jotka ovat spesifisiä kasvaimessa osoitetulle HPV-tyypille.

Plasma:

Verinäyte 8,5 ml kerätään vacutainer-putkeen (BD ACD-A -putki) ja lähetetään Dept. of Microbiology, Lund. Plasma erotetaan sentrifugoimalla nopeudella 1700 x RPM Dept. of Microbiologyssa. Sitten ctDNA uutetaan plasmasta automaattisesti QIAsymphony-robotilla käyttämällä DSP Circulating DNA Kit -sarjaa (Qiagen) (3 ml syöttö 60 ul lähtö). HPV-tyyppispesifinen ddPCR, jossa käytetään kasvaimessa osoitetulle HPV-tyypille spesifisiä alukkeita ja koettimia, suoritetaan viruskuorman määrittämiseksi (HPV-kopioiden määrä per ml plasmaa).

Tietojen seuranta:

Tutkimus on osittain tutkiva ja osittain suoritettu ctHPVDNA:n arvioinnina keinona seurata sairauden tilaa. Haitallisia vaikutuksia ei odoteta. Ei ole olemassa seurantakomiteaa tai pysäytysohjeita. Välianalyysi tehdään 50 potilaan sisällyttämisen jälkeen, jotta varmistetaan inkluusiotahti ja arvioidaan odottamattomia ongelmia. Sisäinen validointi suoritetaan.