消化中にグルテンを分解するためのプロバイオティクス株の選択された混合物の使用
2023年3月22日 更新者：Free University of Bozen-Bolzano
グルテン分解活性と腸内細菌叢調節効果を備えた新規プロバイオティクス製剤
グルテンの摂取量は世界中に広がっており、西洋の食事で消費される主要な食品タンパク質です (最大 20 g グルテン/日)。
しかし、グルテンにはユニークで珍しい特徴があります。
それは、胃、膵臓、および腸の刷子縁酵素による完全な管腔消化に抵抗し、粘膜トランスグルタミナーゼによる翻訳後修飾 (脱アミド化) を受けやすい.
部分消化とは別に、グルテン自体は世界中の人口の一貫した部分に悪影響を及ぼし、主にセリアック病（CD）またはその他のグルテン関連障害の症状を引き起こします.
この研究により、in vitro でグルテンを非免疫毒性ペプチドに分解することが証明された新しい多種プロバイオティクスを in vivo でテストできるようになります。
調査の概要
詳細な説明
仮説と意義:
このプロジェクトは、新しい複数種のプロバイオティクス製剤が、用量を増加させた場合 (50mg/日から 10g/日まで)、消化時にグルテンを分解する能力があるかどうかを確認することを目的としています。 さらに、プロバイオティクスが人間の腸に持続して定着する効率と、人間の腸内微生物叢を調節する能力を評価することを目指しています。
これは第 1 相試験であるため、CD 症状の引き金を避けるために健康な参加者が募集されます。 参加者は、糞便から微量のグルテンを除去するために 10 日間グルテンフリーの食事を行い、特定の量のグルテンを食事で摂取する限り、プロバイオティクス/プラセボ カプセルが提供されます。 糞便サンプルは、摂取されたグルテン量が増加する各期間の終わりに収集されます。 糞便中の残留グルテン量を評価し、16S メタバーコーディング分析によって糞便マイクロバイオームを研究します。 糞便メタボロームは、qPCR によるプロバイオティクス製剤の持続性と定着能力が評価される限り評価されます。
特定の目的 1:
ELISA によるプロバイオティクスのグルテン除去効率の評価
特定の目的 2:
介入群間の腸内微生物叢の変化と調節の可能性を調査する
特定の目的 2:
介入グループ間の糞便メタボローム (揮発性および短鎖脂肪酸) を調査する
特定の目的 2:
qPCR によるプロバイオティクス製剤の持続性と定着能力を監視します
研究の種類
介入
入学 (実際)
70
段階
- 適用できない
連絡先と場所
このセクションには、調査を実施する担当者の連絡先の詳細と、この調査が実施されている場所に関する情報が記載されています。
研究場所
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Bolzano、イタリア、39100
- Free University of Bolzano-Bozen
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参加基準
研究者は、適格基準と呼ばれる特定の説明に適合する人を探します。これらの基準のいくつかの例は、人の一般的な健康状態または以前の治療です。
適格基準
就学可能な年齢
18年～65年 (大人、高齢者)
健康ボランティアの受け入れ
はい
受講資格のある性別
全て
説明
包含基準:
- 健康な個人;
- 地中海式ダイエットの遵守
除外基準:
- 既知の医学的疾患;
- 既知の消化器疾患の症状;
- セリアック病（CD）の既知の家族歴;
- 小麦アレルギー;
- 処方薬の使用（過去2か月の抗生物質またはプロバイオティクスを含む）
研究計画
このセクションでは、研究がどのように設計され、研究が何を測定しているかなど、研究計画の詳細を提供します。
研究はどのように設計されていますか？
デザインの詳細
- 主な目的：ふるい分け
- 割り当て：ランダム化
- 介入モデル：並列代入
- マスキング：トリプル
武器と介入
参加者グループ / アーム |
介入・治療 |
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アクティブコンパレータ：広報
50 人の健康なボランティアが、プロバイオティクス アームに無作為に割り当てられました。
糞便から残留微量のグルテンおよび類似のタンパク質を除去するために、両グループは 1 日目から 10 日目までグルテンフリーの食事 (GFD) を摂取しました。
10日後、グルテン投与開始。
増量計画は次のとおりです。50 mg/日を 4 日間。その後の 4 日間は 1 g/日。その後の 4 日間は 3 g/日。その後の 20 日間は、1 日あたり 10 g (この場合、同等量の小麦ベースのパン - 4 スライス) を再導入します。
この段階 (10 + 4 + 4 + 4 + 10 日 = 合計 32 日) で、プロバイオティクス製剤の投与を中断し、10 日間のウォッシュアウト期間を設けました。
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乳酸桿菌とバチルス菌の複数種の菌株を含むプロバイオティクス製剤。
プロバイオティクスはベースラインで投与され、32 日後に中断されました。
同時に、もう一方の腕にはプラセボが投与されました。
グルテンは、グルテンを含まない食事を 10 日間続けた後、量を増やして提供されました
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プラセボコンパレーター：PL
20 人の健康なボランティアが無作為にプラセボに割り当てられました.糞便から残留微量のグルテンおよび同様のタンパク質を排除するために、両方のグループが 1 日目から 10 日目までグルテンフリーの食事 (GFD) を受けました.
10日後、グルテン投与開始。
増量計画は次のとおりです。50 mg/日を 4 日間。その後の 4 日間は 1 g/日。その後の 4 日間は 3 g/日。その後の 20 日間は、1 日あたり 10 g (この場合、同等量の小麦ベースのパン - 4 スライス) を再導入します。
この段階 (10 + 4 + 4 + 4 + 10 日 = 合計 32 日) で、プラセボ製剤の投与を中断し、10 日間のウォッシュアウト期間を設けました。
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プラセボはベースラインで投与され、32 日後に中断されました。
同時に、もう一方の腕にはプロバイオティクスが投与されました。
グルテンは、グルテンを含まない食事を 10 日間続けた後、量を増やして提供されました
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この研究は何を測定していますか？
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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競合Elisa R5抗体による糞便中の加水分解グルテン量（グルテンppm）
時間枠：6ヵ月
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糞便サンプルの収集はベースライン (T0) になります。 10 日間の GFD (T1); 4 日間 50 mg/日のグルテン摂取 (T2); 1 g/日のグルテン摂取量を 4 日間 (T3); 1 日 3 g のグルテンを 4 日間摂取する (T4)。 20 日間の 10 g/日のグルテン摂取量 (T5)、そのうち最後の 10 日間はウォッシュアウト (T6) でした。プロバイオティクスのグルテン分解効率は、R5 抗体を使用した競合 Elisa を使用して、上記のすべての時点で評価されます。加水分解されたグルテン (グリアジン エピトープ) 用。
グリアジンの濃度 (ppm) は、メーカーによって報告された倍率 (2) に従ってグルテンに変換されます。
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6ヵ月
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腸内細菌叢
時間枠：7ヶ月
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ベースライン、介入期間、ウォッシュアウトからの糞便サンプル DNA は、16s rRNA 遺伝子の V4 領域をターゲットとして配列決定され、腸内細菌叢の変化と、投与されたプロバイオティクス混合物による PR アームの調節の可能性を評価します。
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7ヶ月
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SPME 抽出を使用した GC-MS による揮発性化合物の測定
時間枠：6ヵ月
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介入の開始時 (T1)、介入の終了時 (T5)、およびウォッシュアウト時 (T6) の糞便サンプルは、GC-MS によって有機揮発性化合物について評価されます。
揮発性化合物と短鎖脂肪酸組成は、介入群 PL と PR の間で比較されます。 4-メチル-2 ペンタノール (最終濃度 1 mg L-1) をすべての分析で内部標準として使用し、相対面積と内部標準面積の補間によって同定された化合物を定量化します。
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6ヵ月
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SPME 抽出を使用した GC-MS による短鎖脂肪酸の測定
時間枠：6ヵ月
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介入の開始時（T1）、介入の終了時（T5）、およびウォッシュアウト時（T6）の糞便サンプルは、GC-MS によって SCFA について評価されます。
SCFA 化合物と短鎖脂肪酸組成は、介入群 PL と PR の間で比較されます。
SCFA 標準 (酢酸、酪酸、プロピオン酸、イソ酪酸、吉草酸) の混合物を含む原液を超純水に溶解して、1 μg mL-1 から 250 μg mL-1 の範囲の検量線を取得します。検量線は、正規化されたピーク面積と個々の SCFA の濃度をプロットすることによって作成されます。
糞便サンプル中の SCFA の相対ピークが積分され、SCFA の濃度が検量線式によって計算されます。
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6ヵ月
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定量的 PCR (コピー数) によるプロバイオティクス製剤の持続性と定着能力
時間枠：2ヶ月
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プロバイオティクス調製物の持続性および定着能力は、T1、T5、および T6 での cDNA および DNA に対する qPCR によって評価されます。
プロバイオティクス調製物に属する種ごとに、種特異的プライマーが使用されます。
qPCR の結果 (サイクルしきい値、CT) は、純粋な培養物から抽出された DNA の連続希釈を使用して以前に作成された標準曲線に基づいて、コピー数 (CN) に変換されます。
CN および CN(Log) は、DNA 濃度とアンプリコンの長さに基づいて計算されます。
標準曲線は、CT および CN(Log) 補間によって得られます。
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2ヶ月
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協力者と研究者
ここでは、この調査に関係する人々や組織を見つけることができます。
捜査官
- 主任研究者：Olga Nikoloudaki, Ph.D、Free University of Bolzano-Bozen
出版物と役立つリンク
研究に関する情報を入力する責任者は、自発的にこれらの出版物を提供します。これらは、研究に関連するあらゆるものに関するものである可能性があります。
研究記録日
これらの日付は、ClinicalTrials.gov への研究記録と要約結果の提出の進捗状況を追跡します。研究記録と報告された結果は、国立医学図書館 (NLM) によって審査され、公開 Web サイトに掲載される前に、特定の品質管理基準を満たしていることが確認されます。
主要日程の研究
研究開始 (実際)
2020年10月1日
一次修了 (実際)
2021年4月30日
研究の完了 (実際)
2021年5月31日
試験登録日
最初に提出
2023年3月3日
QC基準を満たした最初の提出物
2023年3月22日
最初の投稿 (実際)
2023年4月4日
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
2023年4月4日
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
2023年3月22日
最終確認日
2023年3月1日
詳しくは
この情報は、Web サイト clinicaltrials.gov から変更なしで直接取得したものです。研究の詳細を変更、削除、または更新するリクエストがある場合は、register@clinicaltrials.gov。 までご連絡ください。 clinicaltrials.gov に変更が加えられるとすぐに、ウェブサイトでも自動的に更新されます。