使用精选的益生菌菌株混合物在消化过程中降解面筋
2023年3月22日 更新者：Free University of Bozen-Bolzano
具有麸质降解活性和肠道菌群调节作用的新型益生菌制剂
麸质摄入量遍布全球，是西方饮食中消耗的主要食物蛋白质（高达 20 克麸质/天）。
但是麸质具有独特和不寻常的特性。
它抵抗胃、胰腺和肠道刷状缘酶的完全管腔消化，并且容易受到粘膜转谷氨酰胺酶的翻译后修饰（脱酰胺作用）。
除了部分消化外，麸质本身对世界范围内的一部分人口有负面影响，这主要导致乳糜泻 (CD) 或其他麸质相关疾病的表现。
这项研究将能够在体内测试一种新型的多物种益生菌，这种益生菌在体外已被证明可以将麸质降解为非免疫毒性肽。
研究概览
详细说明
假设与意义：
该项目旨在确认新型多物种益生菌制剂是否具有在增加剂量（从 50mg/d 到 10g/d）的情况下消化后降解面筋的能力。 此外，我们的目标是评估益生菌在人体肠道中持续存在和定植的效率，以及它调节人体肠道微生物组的能力。
由于这是一项 1 期试验，因此将招募健康的参与者以避免任何 CD 症状的触发因素。 参与者将接受为期 10 天的无麸质饮食，以消除粪便中的任何麸质痕迹，并将提供益生菌/安慰剂胶囊，只要在用餐时摄入特定量的麸质即可。 粪便样本将在摄入增加面筋量的每个时期结束时收集。 将评估粪便中残留的麸质含量，并通过 16S 元条形码分析研究粪便微生物组。 只要通过 qPCR 益生菌制剂的持久性和定植能力，也将评估粪便代谢组。
具体目标 1：
ELISA法评价益生菌的麸质降解效率
具体目标 2：
调查干预组之间的肠道微生物组变化和可能的调节
具体目标 2：
调查干预组之间的粪便代谢组（挥发物和短链脂肪酸）
具体目标 2：
通过 qPCR 监测益生菌制剂的持久性和定植能力
研究类型
介入性
注册 (实际的)
70
阶段
- 不适用
联系人和位置
本节提供了进行研究的人员的详细联系信息，以及有关进行该研究的地点的信息。
学习地点
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Bolzano、意大利、39100
- Free University of Bolzano-Bozen
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参与标准
研究人员寻找符合特定描述的人，称为资格标准。这些标准的一些例子是一个人的一般健康状况或先前的治疗。
资格标准
适合学习的年龄
18年 至 65年 (成人、年长者)
接受健康志愿者
是的
有资格学习的性别
全部
描述
纳入标准：
- 健康的人；
- 坚持地中海饮食
排除标准：
- 已知的医学疾病；
- 已知的消化系统疾病症状；
- 已知的乳糜泻 (CD) 家族史；
- 小麦过敏;
- 以及在过去 2 个月内使用过处方药（包括抗生素或益生菌）
学习计划
本节提供研究计划的详细信息，包括研究的设计方式和研究的衡量标准。
研究是如何设计的？
设计细节
- 主要用途：放映
- 分配：随机化
- 介入模型：并行分配
- 屏蔽：三倍
武器和干预
参与者组/臂 |
干预/治疗 |
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有源比较器：公关
50 名健康志愿者被随机分配到益生菌组。
为了消除粪便中残留的麸质和类似蛋白质，两组人从第 1 天到第 10 天都进行了无麸质饮食 (GFD)。
10 天后，开始给予麸质。
递增给药方案如下：50mg/天，连续4天；随后 4 天 1 克/天；随后 4 天 3 克/天；在接下来的 20 天里，每天 10 克（在这种情况下，重新引入等量的小麦面包 - 4 片）。
在此阶段（10 + 4 + 4 + 4 + 10 天 = 总共 32 天），益生菌制剂的给药被中断，洗脱期为 10 天。
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益生菌制剂包括乳杆菌和芽孢杆菌的多菌种。
益生菌在基线时给药，并在 32 天后中断。
同时，另一只手臂接受了安慰剂。
无麸质饮食 10 天后，麸质的供应量逐渐增加
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安慰剂比较：PL
20 名健康志愿者被随机分配到安慰剂组。为了消除粪便中残留的麸质和类似蛋白质，两组均从第 1 天到第 10 天进行无麸质饮食 (GFD)。
10 天后，开始给予麸质。
递增给药方案如下：50mg/天，连续4天；随后 4 天 1 克/天；随后 4 天 3 克/天；在接下来的 20 天里，每天 10 克（在这种情况下，重新引入等量的小麦面包 - 4 片）。
在此阶段（10 + 4 + 4 + 4 + 10 天 = 总共 32 天），安慰剂制剂的给药被中断，洗脱期为 10 天。
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安慰剂在基线时给药，并在 32 天后中断。
同时另一只手臂接受益生菌。
无麸质饮食 10 天后，麸质的供应量逐渐增加
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研究衡量的是什么？
主要结果指标
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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竞争性 Elisa R5 抗体在粪便中水解的面筋量（面筋 ppm）
大体时间：6个月
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粪便样本的收集将处于基线 (T0)； 10天的GFD（T1）； 4 天 50 毫克/天的麸质摄入量 (T2)； 4 天 1 克/天麸质摄入量 (T3)； 4 天 3 克/天的麸质摄入量 (T4)； 20 天 10 克/天的麸质摄入量 (T5)，其中最后 10 天是清除 (T6)。将在上述所有时间点使用 R5 抗体通过竞争性 Elisa 评估益生菌的麸质降解效率用于水解面筋（醇溶蛋白表位）。
然后根据制造商报告的乘数 (2) 将麦醇溶蛋白的浓度 (ppm) 转换为面筋。
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6个月
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肠道菌群
大体时间：7个月
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来自基线、干预期和洗脱的粪便样本 DNA 将针对 16s rRNA 基因的 V4 区域进行测序，以评估肠道微生物组的改变以及 PR 臂由于施用益生菌混合物而可能发生的调节
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7个月
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使用 SPME 萃取通过 GC-MS 测定挥发性化合物
大体时间：6个月
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干预开始 (T1)、干预结束 (T5) 和清除 (T6) 时的粪便样本将通过 GC-MS 评估其有机挥发性化合物。
挥发性化合物和短链脂肪酸组成将在干预组 PL 与 PR 之间进行比较。 4-methyl-2pentanol（最终浓度 1 mg L-1）将用作所有分析中的内部标准，通过相对面积与内部标准面积的插值来量化已识别的化合物。
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6个月
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使用 SPME 萃取通过 GC-MS 测定短链脂肪酸
大体时间：6个月
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干预开始 (T1)、干预结束 (T5) 和清除 (T6) 时的粪便样本将通过 GC-MS 评估 SCFA。
将在干预组 PL 与 PR 之间比较 SCFA 化合物和短链脂肪酸组成。
将包含 SCFA 标准品（乙酸、丁酸、丙酸、异丁酸和戊酸）的混合物的储备溶液溶解在超纯水中，以获得范围为 1 μg mL-1 至 250 μg mL-1 的校准曲线。校准曲线将通过绘制归一化峰面积与单个 SCFA 浓度的关系图来构建。
对粪便样品中 SCFA 的相对峰进行积分，通过校准曲线方程计算 SCFA 的浓度
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6个月
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通过定量 PCR 检测益生菌制剂的持久性和定植能力（拷贝数）
大体时间：2个月
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益生菌制剂的持久性和定植能力将通过 qPCR 对 cDNA 和 T1、T5 和 T6 的 DNA 进行评估。
对于属于益生菌制剂的每个物种，将使用物种特异性引物。
qPCR 结果（循环阈值，CT）将根据先前使用从纯培养物中提取的连续稀释 DNA 构建的标准曲线转换为拷贝数 (CN)。
CN 和 CN(Log) 将根据 DNA 浓度和扩增子长度计算。
标准曲线将通过 CT 和 CN(Log) 插值获得。
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2个月
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合作者和调查者
在这里您可以找到参与这项研究的人员和组织。
调查人员
- 首席研究员：Olga Nikoloudaki, Ph.D、Free University of Bolzano-Bozen
出版物和有用的链接
负责输入研究信息的人员自愿提供这些出版物。这些可能与研究有关。
研究记录日期
这些日期跟踪向 ClinicalTrials.gov 提交研究记录和摘要结果的进度。研究记录和报告的结果由国家医学图书馆 (NLM) 审查，以确保它们在发布到公共网站之前符合特定的质量控制标准。
研究主要日期
学习开始 (实际的)
2020年10月1日
初级完成 (实际的)
2021年4月30日
研究完成 (实际的)
2021年5月31日
研究注册日期
首次提交
2023年3月3日
首先提交符合 QC 标准的
2023年3月22日
首次发布 (实际的)
2023年4月4日
研究记录更新
最后更新发布 (实际的)
2023年4月4日
上次提交的符合 QC 标准的更新
2023年3月22日
最后验证
2023年3月1日
更多信息
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