Valitun probioottikantojen seoksen käyttö gluteenin hajottamiseksi ruoansulatuksen aikana
keskiviikko 22. maaliskuuta 2023 päivittänyt: Free University of Bozen-Bolzano
Uusi probioottivalmiste, jolla on gluteenia hajottava vaikutus ja suoliston mikrobiota moduloiva vaikutus
Gluteenin saanti leviää maailmanlaajuisesti, ja se on tärkein länsimaisessa ruokavaliossa kulutettu ruokaproteiini (jopa 20 g gluteenia päivässä).
Mutta gluteenilla on ainutlaatuisia ja epätavallisia ominaisuuksia.
Se vastustaa mahalaukun, haiman ja suoliston harjarajaentsyymien täydellistä luminaalista pilkkoutumista ja on herkkä limakalvon transglutaminaasien translaation jälkeiselle modifikaatiolle (deamidaatiolle).
Osittaista ruuansulatusta lukuun ottamatta gluteeni itsessään vaikuttaa negatiivisesti suureen osaan maailman väestöstä, mikä johtaa pääasiassa keliakiaan (CD) tai muihin gluteeniin liittyviin sairauksiin.
Tämä tutkimus antaa mahdollisuuden testata in vivo uutta usean lajin probioottia, jonka in vitro on osoitettu hajottavan gluteenia ei-immunotoksiseksi peptideiksi.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Valmis
Ehdot
Yksityiskohtainen kuvaus
Hypoteesi ja merkitys:
Hankkeen tarkoituksena on varmistaa, pystyykö uusi monilajinen probioottivalmiste hajottamaan gluteenia ruoansulatuksessa kasvavilla annoksilla (50 mg/d - 10 g/d). Lisäksi pyrimme arvioimaan probiootin tehokkuutta pysyä ja kolonisoida ihmisen suolistossa sekä sen kykyä muokata ihmisen suoliston mikrobiomia.
Koska tämä on vaiheen 1 koe, terveitä osallistujia rekrytoidaan välttääkseen CD-oireiden laukaisimia. Osallistujat noudattavat gluteenitonta ruokavaliota 10 päivän ajan gluteenijäämien poistamiseksi ulosteestaan, ja heille tarjotaan probiootti/plasebo-kapseleita niin kauan kuin tietty määrä gluteenia nautitaan aterian yhteydessä. Ulostenäytteet otetaan jokaisen jakson lopussa, jolloin gluteenia on nautittu. Ulosteen gluteenijäännösmäärät arvioidaan ja ulosteen mikrobiomia tutkitaan 16S-metabarkoodausanalyysillä. Ulosteen metabolomi arvioidaan myös niin kauan kuin probioottisen valmisteen pysyvyys ja kolonisaatiokyky qPCR:llä.
Erityinen tavoite 1:
Arvioi probiootin gluteenia poistava tehokkuus ELISA:lla
Erityinen tavoite 2:
Tutki suoliston mikrobiomimuutoksia interventioryhmien välillä ja mahdollista modulaatiota
Erityinen tavoite 2:
Tutki ulosteen metabolomia (haihtuvat ja lyhytketjuiset rasvahapot) interventioryhmien välillä
Erityinen tavoite 2:
Seuraa probioottisen valmisteen pysyvyyttä ja kolonisaatiokykyä qPCR:llä
Opintotyyppi
Interventio
Ilmoittautuminen (Todellinen)
70
Vaihe
- Ei sovellettavissa
Yhteystiedot ja paikat
Tässä osiossa on tutkimuksen suorittajien yhteystiedot ja tiedot siitä, missä tämä tutkimus suoritetaan.
Opiskelupaikat
-
-
-
Bolzano, Italia, 39100
- Free University of Bolzano-Bozen
-
-
Osallistumiskriteerit
Tutkijat etsivät ihmisiä, jotka sopivat tiettyyn kuvaukseen, jota kutsutaan kelpoisuuskriteereiksi. Joitakin esimerkkejä näistä kriteereistä ovat henkilön yleinen terveydentila tai aiemmat hoidot.
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
18 vuotta - 65 vuotta (Aikuinen, Vanhempi Aikuinen)
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Joo
Sukupuolet, jotka voivat opiskella
Kaikki
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
- terveet yksilöt;
- noudattaa välimerellistä ruokavaliota
Poissulkemiskriteerit:
- tunnettu lääketieteellinen sairaus;
- tunnetut ruoansulatuskanavan sairauden oireet;
- suvussa tunnettu keliakia (CD);
- vehnä allergia;
- ja reseptilääkkeiden käyttö (mukaan lukien antibiootit tai probiootit viimeisen 2 kuukauden aikana)
Opintosuunnitelma
Tässä osiossa on tietoja tutkimussuunnitelmasta, mukaan lukien kuinka tutkimus on suunniteltu ja mitä tutkimuksella mitataan.
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
- Ensisijainen käyttötarkoitus: Seulonta
- Jako: Satunnaistettu
- Inventiomalli: Rinnakkaistehtävä
- Naamiointi: Kolminkertaistaa
Aseet ja interventiot
Osallistujaryhmä / Arm |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Active Comparator: PR
Viisikymmentä tervettä vapaaehtoista jaettiin satunnaisesti probioottiryhmään.
Gluteenin ja vastaavien proteiinien jäämien poistamiseksi ulostemateriaalista molemmille ryhmille tehtiin gluteeniton ruokavalio (GFD) päivästä 1 päivään 10.
10 päivän kuluttua gluteenin antaminen aloitettiin.
Kasvava annostelusuunnitelma oli seuraava: 50 mg/vrk 4 päivän ajan; 1 g/päivä seuraavien 4 päivän ajan; 3 g/päivä seuraavien 4 päivän ajan; ja 10 g/päivä (tässä tapauksessa lisäämällä uudelleen vastaava määrä vehnäpohjaista leipää – 4 viipaletta) seuraavien 20 päivän ajan.
Tässä vaiheessa (10 + 4 + 4 + 4 + 10 päivää = yhteensä 32 päivää) probioottivalmisteen anto keskeytettiin 10 päivän ajan.
|
Probioottivalmiste, joka sisältää useita Lactobacillus- ja Bacillus-lajeja.
Probiootti annettiin lähtötilanteessa ja keskeytettiin 32 päivän kuluttua.
Samanaikaisesti toinen käsi sai lumelääkettä.
Gluteenia annettiin kasvavina määrinä 10 päivän gluteenittoman ruokavalion jälkeen
|
|
Placebo Comparator: PL
Kaksikymmentä tervettä vapaaehtoista jaettiin satunnaisesti lumelääkkeeseen. Gluteenin ja vastaavien proteiinien jäämien poistamiseksi ulostemateriaalista molemmille ryhmille tehtiin gluteeniton ruokavalio (GFD) päivästä 1 päivään 10.
10 päivän kuluttua gluteenin antaminen aloitettiin.
Kasvava annostelusuunnitelma oli seuraava: 50 mg/vrk 4 päivän ajan; 1 g/päivä seuraavien 4 päivän ajan; 3 g/päivä seuraavien 4 päivän ajan; ja 10 g/päivä (tässä tapauksessa lisäämällä uudelleen vastaava määrä vehnäpohjaista leipää – 4 viipaletta) seuraavien 20 päivän ajan.
Tässä vaiheessa (10 + 4 + 4 + 4 + 10 päivää = yhteensä 32 päivää) lumevalmisteen anto keskeytettiin 10 päivän ajan.
|
Lume annettiin lähtötilanteessa ja keskeytettiin 32 päivän kuluttua.
Samaan aikaan toinen käsi sai probioottia.
Gluteenia annettiin kasvavina määrinä 10 päivän gluteenittoman ruokavalion jälkeen
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Kilpailevan Elisa R5 -vasta-aineen hydrolysoitu gluteenimäärä ulosteessa (gluteeni ppm)
Aikaikkuna: 6 kuukautta
|
Ulostenäytteiden kerääminen on lähtötasolla (T0); 10 päivää GFD:tä (T1); 4 päivää 50 mg/päivä gluteenia (T2); 4 päivää 1 g/päivä gluteenia (T3); 4 päivää 3 g/päivä gluteenia (T4); 20 päivää gluteenia 10 g/vrk (T5), joista 10 viimeistä päivää oli huuhtelua (T6). Probiootin gluteenia hajottava tehokkuus arvioidaan kaikilla edellä mainituilla aikapisteillä kilpailevan Elisan kanssa käyttämällä R5-vasta-ainetta. hydrolysoidulle gluteenille (gliadiiniepitoopit).
Gliadiinin pitoisuus (ppm) muunnetaan sitten gluteeniksi valmistajan ilmoittaman kertoimen (2) mukaisesti.
|
6 kuukautta
|
|
Suoliston mikrobiomi
Aikaikkuna: 7 kuukautta
|
Ulostenäytteet DNA lähtötilanteesta, interventiojaksosta ja huuhtoutumisesta sekvensoidaan kohdentaen 16s rRNA-geenin V4-aluetta, jotta voidaan arvioida suoliston mikrobiomin muutoksia ja mahdollista modulaatiota PR-haarassa annetusta probioottiseoksesta johtuen.
|
7 kuukautta
|
|
Haihtuvien yhdisteiden määritys GC-MS:llä käyttäen SPME-uuttoa
Aikaikkuna: 6 kuukautta
|
Ulostenäytteet toimenpiteen alussa (T1), toimenpiteen lopussa (T5) ja huuhtoutumisvaiheessa (T6) arvioidaan niiden orgaanisten haihtuvien yhdisteiden suhteen GC-MS:llä.
Haihtuvien yhdisteiden ja lyhytketjuisten rasvahappojen koostumusta verrataan interventioryhmien PL vs PR välillä. 4-metyyli-2pentanolia (lopullinen pitoisuus 1 mg L-1) käytetään sisäisenä standardina kaikissa analyyseissä tunnistettujen yhdisteiden kvantifioimiseksi interpoloimalla suhteelliset pinta-alat sisäisen standardin pinta-alaan.
|
6 kuukautta
|
|
Lyhytketjuisten rasvahappojen määritys GC-MS:llä käyttäen SPME-uuttoa
Aikaikkuna: 6 kuukautta
|
Ulostenäytteet toimenpiteen alussa (T1), toimenpiteen lopussa (T5) ja huuhtoutumisvaiheessa (T6) arvioivat SCFA:n GC-MS:llä.
SCFA-yhdisteitä ja lyhytketjuisia rasvahappoja verrataan interventioryhmien PL vs PR välillä.
Varastoliuos, joka sisältää SCFA-standardien (etikkahappo, voihappo, propionihappo, isovoihappo ja valeriaanahappo) seoksen, liuotetaan ultrapuhtaan veteen, jotta saadaan kalibrointikäyrä, joka vaihtelee välillä 1 μg ml-1 - 250 μg ml-1. Kalibrointikäyrä muodostetaan piirtämällä normalisoitu piikin pinta-ala yksittäisen SCFA:n pitoisuuden funktiona.
SCFA:n suhteellinen huippu ulostenäytteessä integroidaan ja SCFA:n pitoisuus lasketaan kalibrointikäyräyhtälön avulla
|
6 kuukautta
|
|
Probioottivalmisteen pysyvyys ja kolonisaatiokyky kvantitatiivisella PCR:llä (kopionumerot)
Aikaikkuna: 2 kuukautta
|
Probioottisen valmisteen pysyvyys ja kolonisaatiokyky arvioidaan qPCR:llä cDNA:sta ja DNA:sta T1, T5 ja T6.
Jokaiselle probioottivalmisteeseen kuuluvalle lajille käytetään lajikohtaisia alukkeita.
qPCR-tulokset (syklin kynnysarvo, CT) muunnetaan kopioluvuksi (CN) standardikäyrien perusteella, jotka on muodostettu aiemmin käyttämällä puhtaista viljelmistä uutetun DNA:n sarjalaimennoksia.
CN ja CN(Log) lasketaan DNA-pitoisuuden ja amplikonin pituuden perusteella.
Standardikäyrät saadaan CT- ja CN(Log)-interpoloinnilla.
|
2 kuukautta
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Täältä löydät tähän tutkimukseen osallistuvat ihmiset ja organisaatiot.
Sponsori
Yhteistyökumppanit
Tutkijat
- Päätutkija: Olga Nikoloudaki, Ph.D, Free University of Bolzano-Bozen
Julkaisuja ja hyödyllisiä linkkejä
Tutkimusta koskevien tietojen syöttämisestä vastaava henkilö toimittaa nämä julkaisut vapaaehtoisesti. Nämä voivat koskea mitä tahansa tutkimukseen liittyvää.
Opintojen ennätyspäivät
Nämä päivämäärät seuraavat ClinicalTrials.gov-sivustolle lähetettyjen tutkimustietueiden ja yhteenvetojen edistymistä. National Library of Medicine (NLM) tarkistaa tutkimustiedot ja raportoidut tulokset varmistaakseen, että ne täyttävät tietyt laadunvalvontastandardit, ennen kuin ne julkaistaan julkisella verkkosivustolla.
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Todellinen)
Torstai 1. lokakuuta 2020
Ensisijainen valmistuminen (Todellinen)
Perjantai 30. huhtikuuta 2021
Opintojen valmistuminen (Todellinen)
Maanantai 31. toukokuuta 2021
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Perjantai 3. maaliskuuta 2023
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Keskiviikko 22. maaliskuuta 2023
Ensimmäinen Lähetetty (Todellinen)
Tiistai 4. huhtikuuta 2023
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Tiistai 4. huhtikuuta 2023
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Keskiviikko 22. maaliskuuta 2023
Viimeksi vahvistettu
Keskiviikko 1. maaliskuuta 2023
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muut tutkimustunnusnumerot
- GlutProbiotic
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Ei
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Ei
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .