Wykorzystanie wybranej mieszanki szczepów probiotycznych do rozkładu glutenu podczas trawienia
22 marca 2023 zaktualizowane przez: Free University of Bozen-Bolzano
Nowatorski preparat probiotyczny o działaniu rozkładającym gluten i działaniu modulującym mikroflorę jelitową
Spożycie glutenu rozprzestrzenia się na całym świecie, będąc głównym białkiem pokarmowym spożywanym w dietach zachodnich (do 20 g glutenu dziennie).
Ale gluten ma unikalne i niezwykłe cechy.
Jest odporny na całkowite trawienie w świetle jelita przez enzymy rąbka szczoteczkowego żołądka, trzustki i jelit i jest podatny na potranslacyjne modyfikacje (deamidację) przez śluzówkowe transglutaminazy.
Oprócz częściowego trawienia, gluten per se ma negatywny wpływ na stałą część światowej populacji, co skutkuje głównie objawami celiakii (CD) lub innych zaburzeń związanych z glutenem.
Badanie to umożliwi przetestowanie in vivo nowego wielogatunkowego probiotyku, który, jak udowodniono in vitro, rozkłada gluten do nieimmunotoksycznych peptydów.
Przegląd badań
Status
Zakończony
Warunki
Interwencja / Leczenie
Szczegółowy opis
Hipoteza i znaczenie:
Projekt ma na celu potwierdzenie, czy nowy wielogatunkowy preparat probiotyczny ma zdolność rozkładania glutenu podczas trawienia w rosnących dawkach (od 50mg/d do 10g/d). Ponadto naszym celem jest ocena skuteczności probiotyku w utrzymywaniu się i kolonizacji ludzkiego jelita, a także jego zdolności do modulowania mikrobiomu ludzkiego jelita.
Ponieważ jest to badanie fazy 1, zdrowi uczestnicy zostaną zrekrutowani, aby uniknąć wszelkich czynników wywołujących objawy CD. Uczestnicy przejdą dietę bezglutenową przez 10 dni, aby wyeliminować wszelkie ślady glutenu z kału i otrzymają kapsułki probiotyczne / placebo, o ile określone ilości glutenu zostaną spożyte z posiłkiem. Próbki kału będą pobierane pod koniec każdego okresu, w którym spożywano wzrastające ilości glutenu. Resztkowe ilości glutenu w kale zostaną ocenione, a mikrobiom kałowy zostanie zbadany za pomocą analizy metabarkodu 16S. Metabolom kału będzie również oceniany pod warunkiem utrzymywania się i zdolności kolonizacji preparatu probiotycznego metodą qPCR.
Cel szczegółowy 1:
Ocenić skuteczność probiotyku w niszczeniu glutenu za pomocą testu ELISA
Cel szczegółowy 2:
Zbadaj zmiany mikrobiomu jelitowego między grupami interwencyjnymi i możliwą modulację
Cel szczegółowy 2:
Zbadaj metabolom kału (substancje lotne i krótkołańcuchowe kwasy tłuszczowe) między grupami interwencyjnymi
Cel szczegółowy 2:
Monitorować trwałość i zdolność kolonizacji preparatu probiotycznego metodą qPCR
Typ studiów
Interwencyjne
Zapisy (Rzeczywisty)
70
Faza
- Nie dotyczy
Kontakty i lokalizacje
Ta sekcja zawiera dane kontaktowe osób prowadzących badanie oraz informacje o tym, gdzie badanie jest przeprowadzane.
Lokalizacje studiów
-
-
-
Bolzano, Włochy, 39100
- Free University of Bolzano-Bozen
-
-
Kryteria uczestnictwa
Badacze szukają osób, które pasują do określonego opisu, zwanego kryteriami kwalifikacyjnymi. Niektóre przykłady tych kryteriów to ogólny stan zdrowia danej osoby lub wcześniejsze leczenie.
Kryteria kwalifikacji
Wiek uprawniający do nauki
18 lat do 65 lat (Dorosły, Starszy dorosły)
Akceptuje zdrowych ochotników
Tak
Płeć kwalifikująca się do nauki
Wszystko
Opis
Kryteria przyjęcia:
- osoby zdrowe;
- zwolennikiem diety śródziemnomorskiej
Kryteria wyłączenia:
- znana choroba medyczna;
- znane objawy chorób przewodu pokarmowego;
- znana rodzinna historia celiakii (CD);
- alergia na pszenicę;
- i stosowanie leków na receptę (w tym antybiotyków lub probiotyków w ciągu ostatnich 2 miesięcy)
Plan studiów
Ta sekcja zawiera szczegółowe informacje na temat planu badania, w tym sposób zaprojektowania badania i jego pomiary.
Jak projektuje się badanie?
Szczegóły projektu
- Główny cel: Ekranizacja
- Przydział: Randomizowane
- Model interwencyjny: Przydział równoległy
- Maskowanie: Potroić
Broń i interwencje
Grupa uczestników / Arm |
Interwencja / Leczenie |
|---|---|
|
Aktywny komparator: PR
Pięćdziesięciu zdrowych ochotników zostało losowo przydzielonych do grupy probiotycznej.
Aby wyeliminować pozostałości glutenu i podobnych białek z materiału kałowego, obie grupy przeszły dietę bezglutenową (GFD) od dnia 1 do dnia 10.
Po 10 dniach rozpoczęto podawanie glutenu.
Rosnący plan podawania był następujący: 50 mg/dzień przez 4 dni; 1 g/dzień przez kolejne 4 dni; 3 g/dzień przez kolejne 4 dni; i 10 g/dzień (w tym przypadku ponowne wprowadzenie równoważnej ilości pieczywa pszennego – 4 kromki) przez kolejne 20 dni.
Na tym etapie (10 + 4 + 4 + 4 + 10 dni = łącznie 32 dni) przerwano podawanie preparatu probiotycznego z 10-dniowym okresem wypłukiwania.
|
Preparat probiotyczny zawierający wielogatunkowe szczepy Lactobacillus i Bacillus.
Probiotyk podawano na początku badania i przerwano po 32 dniach.
W tym samym czasie drugie ramię otrzymywało placebo.
Gluten dostarczano po 10 dniach stosowania diety bezglutenowej w coraz większych ilościach
|
|
Komparator placebo: PL
Dwudziestu zdrowych ochotników losowo przydzielono do grupy placebo. Aby wyeliminować pozostałości glutenu i podobnych białek z kału, obie grupy przeszły dietę bezglutenową (GFD) od dnia 1 do dnia 10.
Po 10 dniach rozpoczęto podawanie glutenu.
Rosnący plan podawania był następujący: 50 mg/dzień przez 4 dni; 1 g/dzień przez kolejne 4 dni; 3 g/dzień przez kolejne 4 dni; i 10 g/dzień (w tym przypadku ponowne wprowadzenie równoważnej ilości pieczywa pszennego – 4 kromki) przez kolejne 20 dni.
Na tym etapie (10 + 4 + 4 + 4 + 10 dni = łącznie 32 dni) przerwano podawanie preparatu placebo z 10-dniowym okresem wypłukiwania.
|
Placebo podawano na początku badania i przerwano po 32 dniach.
W tym samym czasie drugie ramię otrzymało probiotyk.
Gluten dostarczano po 10 dniach stosowania diety bezglutenowej w coraz większych ilościach
|
Co mierzy badanie?
Podstawowe miary wyniku
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Zhydrolizowana ilość glutenu w kale przez konkurencyjne przeciwciało Elisa R5 (gluten ppm)
Ramy czasowe: 6 miesięcy
|
Pobieranie próbek kału będzie na linii podstawowej (T0); 10 dni GFD (T1); 4 dni 50 mg glutenu dziennie (T2); 4 dni z 1 g glutenu dziennie (T3); 4 dni z 3 g glutenu dziennie (T4); 20 dni z 10 g glutenu dziennie (T5), z czego 10 ostatnich dni było wypłukiwaniem (T6). Skuteczność probiotyku rozkładającego gluten zostanie oceniona we wszystkich wyżej wymienionych punktach czasowych za pomocą konkurencyjnego testu Elisa z użyciem przeciwciała R5 dla hydrolizatu glutenu (epitopy gliadyny).
Stężenie gliadyny (ppm) zostanie następnie przeliczone na gluten zgodnie z mnożnikiem (2) podanym przez producenta.
|
6 miesięcy
|
|
Mikrobiom jelitowy
Ramy czasowe: 7 miesięcy
|
Próbki kału DNA z okresu początkowego, okresu interwencji i wypłukiwania zostaną zsekwencjonowane w kierunku regionu V4 genu 16s rRNA w celu oceny zmian mikrobiomu jelitowego i możliwej modulacji w ramieniu PR z powodu podanej mieszaniny probiotycznej
|
7 miesięcy
|
|
Oznaczanie związków lotnych metodą GC-MS z wykorzystaniem ekstrakcji SPME
Ramy czasowe: 6 miesięcy
|
Próbki kału na początku interwencji (T1), na końcu interwencji (T5) i wypłukiwaniu (T6) zostaną ocenione pod kątem lotnych związków organicznych za pomocą GC-MS.
Związki lotne i skład krótkołańcuchowych kwasów tłuszczowych zostaną porównane między grupami interwencyjnymi PL i PR. 4-metylo-2pentanol (końcowe stężenie 1 mg L-1) będzie używany jako wzorzec wewnętrzny we wszystkich analizach w celu ilościowego określenia zidentyfikowanych związków poprzez interpolację względnych powierzchni w stosunku do powierzchni wzorca wewnętrznego.
|
6 miesięcy
|
|
Oznaczanie krótkołańcuchowych kwasów tłuszczowych metodą GC-MS z wykorzystaniem ekstrakcji SPME
Ramy czasowe: 6 miesięcy
|
Próbki kału na początku interwencji (T1), na końcu interwencji (T5) i wypłukiwaniu (T6) zostaną ocenione pod kątem SCFA za pomocą GC-MS.
Związki SCFA i skład krótkołańcuchowych kwasów tłuszczowych zostaną porównane między grupami interwencyjnymi PL i PR.
Roztwór podstawowy zawierający mieszaninę wzorców SCFA (kwas octowy, kwas masłowy, kwas propionowy, kwas izomasłowy i kwas walerianowy) zostanie rozpuszczony w ultraczystej wodzie w celu uzyskania krzywej kalibracji w zakresie od 1 μg ml-1 do 250 μg ml-1. Krzywa kalibracji zostanie utworzona przez wykreślenie powierzchni znormalizowanego piku w funkcji stężenia poszczególnych SCFA.
Względny pik SCFA w próbce kału zostanie zintegrowany, a stężenie SCFA zostanie obliczone za pomocą równania krzywej kalibracji
|
6 miesięcy
|
|
Trwałość i zdolność kolonizacji preparatu probiotycznego metodą ilościowego PCR (liczba kopii)
Ramy czasowe: 2 miesiące
|
Trwałość i zdolność do kolonizacji preparatu probiotycznego zostanie oceniona metodą qPCR na cDNA i DNA w T1, T5 i T6.
Dla każdego gatunku należącego do preparatu probiotycznego zastosowane zostaną startery specyficzne dla gatunku.
Wyniki qPCR (próg cyklu, CT) zostaną przeliczone na liczbę kopii (CN) w oparciu o krzywe standardowe skonstruowane wcześniej przy użyciu seryjnych rozcieńczeń DNA wyekstrahowanego z czystych kultur.
CN i CN(Log) zostaną obliczone na podstawie stężenia DNA i długości amplikonu.
Krzywe wzorcowe zostaną uzyskane przez interpolację CT i CN(Log).
|
2 miesiące
|
Współpracownicy i badacze
Tutaj znajdziesz osoby i organizacje zaangażowane w to badanie.
Sponsor
Współpracownicy
Śledczy
- Główny śledczy: Olga Nikoloudaki, Ph.D, Free University of Bolzano-Bozen
Publikacje i pomocne linki
Osoba odpowiedzialna za wprowadzenie informacji o badaniu dobrowolnie udostępnia te publikacje. Mogą one dotyczyć wszystkiego, co jest związane z badaniem.
Daty zapisu na studia
Daty te śledzą postęp w przesyłaniu rekordów badań i podsumowań wyników do ClinicalTrials.gov. Zapisy badań i zgłoszone wyniki są przeglądane przez National Library of Medicine (NLM), aby upewnić się, że spełniają określone standardy kontroli jakości, zanim zostaną opublikowane na publicznej stronie internetowej.
Główne daty studiów
Rozpoczęcie studiów (Rzeczywisty)
1 października 2020
Zakończenie podstawowe (Rzeczywisty)
30 kwietnia 2021
Ukończenie studiów (Rzeczywisty)
31 maja 2021
Daty rejestracji na studia
Pierwszy przesłany
3 marca 2023
Pierwszy przesłany, który spełnia kryteria kontroli jakości
22 marca 2023
Pierwszy wysłany (Rzeczywisty)
4 kwietnia 2023
Aktualizacje rekordów badań
Ostatnia wysłana aktualizacja (Rzeczywisty)
4 kwietnia 2023
Ostatnia przesłana aktualizacja, która spełniała kryteria kontroli jakości
22 marca 2023
Ostatnia weryfikacja
1 marca 2023
Więcej informacji
Terminy związane z tym badaniem
Słowa kluczowe
Inne numery identyfikacyjne badania
- GlutProbiotic
Informacje o lekach i urządzeniach, dokumenty badawcze
Bada produkt leczniczy regulowany przez amerykańską FDA
Nie
Bada produkt urządzenia regulowany przez amerykańską FDA
Nie
Te informacje zostały pobrane bezpośrednio ze strony internetowej clinicaltrials.gov bez żadnych zmian. Jeśli chcesz zmienić, usunąć lub zaktualizować dane swojego badania, skontaktuj się z register@clinicaltrials.gov. Gdy tylko zmiana zostanie wprowadzona na stronie clinicaltrials.gov, zostanie ona automatycznie zaktualizowana również na naszej stronie internetowej .