Uso de uma mistura selecionada de cepas probióticas para degradar o glúten durante a digestão
22 de março de 2023 atualizado por: Free University of Bozen-Bolzano
Nova preparação probiótica com atividade de degradação do glúten e efeito modulador da microbiota intestinal
A ingestão de glúten se espalha em todo o mundo, sendo a principal proteína alimentar consumida nas dietas ocidentais (até 20 g de glúten/d).
Mas o glúten tem características únicas e incomuns.
Resiste à digestão luminal completa pelas enzimas da borda em escova gástrica, pancreática e intestinal e é suscetível à modificação pós-traducional (desamidação) pelas transglutaminases mucosas.
Além da digestão parcial, o glúten per se tem um impacto negativo em uma parte consistente da população mundial, o que resulta principalmente nas manifestações da doença celíaca (DC) ou outros distúrbios relacionados ao glúten.
Este estudo permitirá testar in vivo um novo probiótico multiespécie que in vitro provou degradar o glúten em peptídeos não imunotóxicos.
Visão geral do estudo
Status
Concluído
Condições
Descrição detalhada
Hipótese e Significado:
O projeto pretende confirmar se a nova preparação probiótica multiespécie tem a capacidade de degradar o glúten durante a digestão em dosagens crescentes (de 50mg/d até 10g/d). Além disso, pretendemos avaliar a eficiência do probiótico em persistir e colonizar o intestino humano, bem como sua capacidade de modular o microbioma intestinal humano.
Como este é um estudo de fase 1, participantes saudáveis serão recrutados para evitar qualquer desencadeamento de sintomas de DC. Os participantes serão submetidos a uma dieta isenta de glúten por 10 dias para eliminar quaisquer vestígios de glúten de suas fezes e serão fornecidas cápsulas de probiótico/placebo desde que quantidades específicas de glúten sejam ingeridas com a refeição. Amostras fecais serão coletadas ao final de cada período em que quantidades crescentes de glúten foram ingeridas. As quantidades residuais de glúten nas fezes serão avaliadas e o microbioma fecal será estudado por análise de metabarcoding 16S. O metaboloma fecal também será avaliado quanto à persistência e capacidade de colonização da preparação probiótica por qPCR.
Objetivo Específico 1:
Avaliar a eficiência depredadora de glúten do probiótico por ELISA
Objetivo Específico 2:
Investigar as alterações do microbioma intestinal entre os grupos de intervenção e possível modulação
Objetivo Específico 2:
Investigar o metaboloma fecal (Voláteis e ácidos graxos de cadeia curta) entre os grupos de intervenção
Objetivo Específico 2:
Monitore a capacidade de persistência e colonização da preparação probiótica por qPCR
Tipo de estudo
Intervencional
Inscrição (Real)
70
Estágio
- Não aplicável
Contactos e Locais
Esta seção fornece os detalhes de contato para aqueles que conduzem o estudo e informações sobre onde este estudo está sendo realizado.
Locais de estudo
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Bolzano, Itália, 39100
- Free University of Bolzano-Bozen
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Critérios de participação
Os pesquisadores procuram pessoas que se encaixem em uma determinada descrição, chamada de critérios de elegibilidade. Alguns exemplos desses critérios são a condição geral de saúde de uma pessoa ou tratamentos anteriores.
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
18 anos a 65 anos (Adulto, Adulto mais velho)
Aceita Voluntários Saudáveis
Sim
Gêneros Elegíveis para o Estudo
Tudo
Descrição
Critério de inclusão:
- indivíduos saudáveis;
- aderente à dieta mediterrânica
Critério de exclusão:
- doença médica conhecida;
- sintomas de doenças digestivas conhecidas;
- história familiar conhecida de doença celíaca (DC);
- alergia ao trigo;
- e uso de medicamentos prescritos (incluindo antibióticos ou probióticos nos últimos 2 meses)
Plano de estudo
Esta seção fornece detalhes do plano de estudo, incluindo como o estudo é projetado e o que o estudo está medindo.
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
- Finalidade Principal: Triagem
- Alocação: Randomizado
- Modelo Intervencional: Atribuição Paralela
- Mascaramento: Triplo
Armas e Intervenções
Grupo de Participantes / Braço |
Intervenção / Tratamento |
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Comparador Ativo: Relações públicas
Cinquenta voluntários saudáveis foram alocados aleatoriamente no braço probiótico.
Para eliminar vestígios residuais de glúten e proteínas semelhantes do material fecal, ambos os grupos foram submetidos a uma dieta sem glúten (GFD) do dia 1 ao dia 10.
Após 10 dias, iniciou-se a administração do glúten.
O plano de administração crescente foi o seguinte: 50 mg/dia por 4 dias; 1 g/dia nos 4 dias subsequentes; 3 g/dia por 4 dias subseqüentes; e 10 g/dia (neste caso, reintroduzindo uma quantidade equivalente de pão à base de trigo - 4 fatias) para os 20 dias subsequentes.
Nesta fase (10 + 4 + 4 + 4 + 10 dias = total de 32 dias), a administração da preparação probiótica foi interrompida, com um período de 10 dias de wash-out.
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Preparação probiótica incluindo cepas multiespécies de Lactobacillus e Bacillus.
O probiótico foi administrado no início e interrompido após 32 dias.
Ao mesmo tempo, o outro braço recebeu placebo.
Glúten foi fornecido após 10 dias de dieta isenta de glúten em quantidades crescentes
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Comparador de Placebo: PL
Vinte voluntários saudáveis foram alocados aleatoriamente no placebo. Para eliminar vestígios residuais de glúten e proteínas semelhantes do material fecal, ambos os grupos foram submetidos a uma dieta sem glúten (GFD) do dia 1 ao dia 10.
Após 10 dias, iniciou-se a administração do glúten.
O plano de administração crescente foi o seguinte: 50 mg/dia por 4 dias; 1 g/dia nos 4 dias subsequentes; 3 g/dia por 4 dias subseqüentes; e 10 g/dia (neste caso, reintroduzindo uma quantidade equivalente de pão à base de trigo - 4 fatias) para os 20 dias subsequentes.
Nesta fase (10 + 4 + 4 + 4 + 10 dias = total de 32 dias), a administração da preparação placebo foi interrompida, com um período de 10 dias de wash-out.
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O placebo foi administrado no início do estudo e interrompido após 32 dias.
Ao mesmo tempo, o outro braço recebeu probiótico.
Glúten foi fornecido após 10 dias de dieta isenta de glúten em quantidades crescentes
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O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Quantidade de glúten hidrolisado nas fezes por anticorpo competitivo Elisa R5 (glúten ppm)
Prazo: 6 meses
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A coleta de amostras fecais será na linha de base (T0); 10 dias de dieta sem glúten (T1); 4 dias de ingestão de 50 mg/dia de glúten (T2); 4 dias de ingestão de 1 g/dia de glúten (T3); 4 dias de ingestão de 3 g/dia de glúten (T4); 20 dias de ingestão de 10 g/dia de glúten (T5), dos quais 10 últimos dias foram o wash-out (T6). A eficiência de degradação do glúten do probiótico será avaliada em todos os pontos de tempo mencionados acima com Elisa competitivo usando o anticorpo R5 para glúten hidrolisado (epítopos de gliadina).
A concentração de gliadina (ppm) será então convertida em glúten de acordo com o fator de multiplicação (2) informado pelo fabricante.
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6 meses
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Microbioma intestinal
Prazo: 7 meses
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Amostras fecais de DNA da linha de base, período de intervenção e wash out serão sequenciadas visando a região V4 do gene 16s rRNA para avaliar as alterações do microbioma intestinal e possível modulação no braço PR devido à mistura probiótica administrada
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7 meses
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Determinação de compostos voláteis por GC-MS usando extração SPME
Prazo: 6 meses
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Amostras fecais no início da intervenção (T1), final da intervenção (T5) e wash-out (T6) serão avaliadas quanto aos seus compostos orgânicos voláteis por GC-MS.
Compostos voláteis e composição de ácidos graxos de cadeia curta serão comparados entre os grupos de intervenção PL vs PR. O 4-metil-2pentanol (concentração final 1 mg L-1) será utilizado como padrão interno em todas as análises, para quantificar os compostos identificados por interpolação das áreas relativas versus área do padrão interno.
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6 meses
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Determinação de ácidos graxos de cadeia curta por GC-MS usando extração SPME
Prazo: 6 meses
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Amostras fecais no início da intervenção (T1), final da intervenção (T5) e wash-out (T6) serão avaliadas para SCFA por GC-MS.
Compostos de SCFA e composição de ácidos graxos de cadeia curta serão comparados entre os grupos de intervenção PL vs PR.
Uma solução estoque contendo a mistura dos padrões SCFA (ácido acético, ácido butírico, ácido propiônico, ácido isobutírico e ácido valérico) será dissolvida em água ultrapura para obtenção de uma curva de calibração variando de 1 μg mL-1 a 250 μg mL-1. A curva de calibração será construída plotando a área de pico normalizada versus concentração de SCFA individual.
O pico relativo de SCFA na amostra fecal será integrado e a concentração de SCFA será calculada pela equação da curva de calibração
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6 meses
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Capacidade de persistência e colonização da preparação probiótica por PCR quantitativo (números de cópias)
Prazo: 2 meses
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A persistência e capacidade de colonização da preparação probiótica serão avaliadas por qPCR em cDNA e DNA em T1, T5 e T6.
Para cada espécie pertencente à preparação probiótica, serão utilizados primers espécie-específicos.
Os resultados de qPCR (limite de ciclo, CT) serão convertidos em Número de Cópia (CN) com base em curvas padrão previamente construídas usando diluições seriadas de DNA extraído de culturas puras.
O CN e o CN(Log) serão calculados com base na concentração de DNA e comprimento do amplicon.
As curvas padrão serão obtidas por interpolação CT e CN(Log).
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2 meses
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Colaboradores e Investigadores
É aqui que você encontrará pessoas e organizações envolvidas com este estudo.
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Colaboradores
Investigadores
- Investigador principal: Olga Nikoloudaki, Ph.D, Free University of Bolzano-Bozen
Publicações e links úteis
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Datas de registro do estudo
Essas datas acompanham o progresso do registro do estudo e os envios de resumo dos resultados para ClinicalTrials.gov. Os registros do estudo e os resultados relatados são revisados pela National Library of Medicine (NLM) para garantir que atendam aos padrões específicos de controle de qualidade antes de serem publicados no site público.
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Real)
1 de outubro de 2020
Conclusão Primária (Real)
30 de abril de 2021
Conclusão do estudo (Real)
31 de maio de 2021
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
3 de março de 2023
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
22 de março de 2023
Primeira postagem (Real)
4 de abril de 2023
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
4 de abril de 2023
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
22 de março de 2023
Última verificação
1 de março de 2023
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Palavras-chave
Outros números de identificação do estudo
- GlutProbiotic
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Não
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
Não
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