소화 중 글루텐 분해를 위한 선택된 프로바이오틱 균주 혼합물의 사용
2023년 3월 22일 업데이트: Free University of Bozen-Bolzano
글루텐 분해 활성 및 장내 미생물 조절 효과가 있는 새로운 프로바이오틱 제제
글루텐 섭취는 전 세계적으로 확산되어 서구 식단에서 소비되는 주요 식품 단백질입니다(최대 20g 글루텐/일).
그러나 글루텐에는 독특하고 특이한 기능이 있습니다.
이것은 위, 췌장 및 장의 브러시 경계 효소에 의한 완전한 내강 소화에 저항하고 점막 트랜스글루타미나제에 의한 번역 후 변형(탈아미드화)에 민감합니다.
부분 소화와는 별도로 글루텐 자체는 전 세계 인구의 일관된 부분에 부정적인 영향을 미치며, 이는 주로 체강 질병(CD) 또는 기타 글루텐 관련 장애의 징후를 초래합니다.
이 연구는 시험관 내에서 글루텐을 비면역독성 펩타이드로 분해하는 것으로 입증된 새로운 다종 생균제를 생체 내에서 테스트할 수 있게 할 것입니다.
연구 개요
상세 설명
가설 및 의의:
이 프로젝트는 새로운 다종 생균제 제제가 증가하는 용량(50mg/d에서 최대 10g/d)으로 소화 시 글루텐을 분해하는 능력이 있는지 확인하려고 합니다. 또한 우리는 인간 장내 미생물을 조절하는 능력뿐만 아니라 인간 장을 지속하고 식민지화하는 프로바이오틱의 효율성을 평가하는 것을 목표로 합니다.
이것은 1상 시험이므로 CD 증상의 유발 요인을 피하기 위해 건강한 참가자를 모집할 것입니다. 참가자는 대변에서 글루텐의 흔적을 제거하기 위해 10일 동안 무글루텐 식이 요법을 받게 되며, 특정 양의 글루텐을 식사와 함께 섭취하는 한 프로바이오틱/플라시보 캡슐이 제공됩니다. 배설물 샘플은 증가하는 글루텐 양을 섭취한 각 기간이 끝날 때 수집됩니다. 대변의 잔류 글루텐 양을 평가하고 대변 미생물군집을 16S 메타바코딩 분석으로 연구합니다. 분변 대사체는 또한 qPCR에 의해 프로바이오틱 제제의 지속성 및 집락화 능력이 있는 한 평가될 것입니다.
특정 목표 1:
ELISA에 의한 프로바이오틱스의 글루텐 약탈 효율 평가
특정 목표 2:
개입 그룹과 가능한 조정 사이의 장내 마이크로바이옴 변화를 조사합니다.
특정 목표 2:
개입 그룹 간의 분변 대사체(휘발성 및 단쇄 지방산) 조사
특정 목표 2:
qPCR에 의한 프로바이오틱 제제의 지속성 및 집락화 능력 모니터링
연구 유형
중재적
등록 (실제)
70
단계
- 해당 없음
연락처 및 위치
이 섹션에서는 연구를 수행하는 사람들의 연락처 정보와 이 연구가 수행되는 장소에 대한 정보를 제공합니다.
연구 장소
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Bolzano, 이탈리아, 39100
- Free University of Bolzano-Bozen
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참여기준
연구원은 적격성 기준이라는 특정 설명에 맞는 사람을 찾습니다. 이러한 기준의 몇 가지 예는 개인의 일반적인 건강 상태 또는 이전 치료입니다.
자격 기준
공부할 수 있는 나이
18년 (성인, 고령자)
건강한 자원 봉사자를 받아들입니다
예
연구 대상 성별
모두
설명
포함 기준:
- 건강한 개인;
- 지중해식 식단을 고수하는
제외 기준:
- 알려진 의학적 질병;
- 알려진 소화기 질환 증상;
- 체강 질병(CD)의 알려진 가족력;
- 밀 알레르기;
- 처방약 사용(이전 2개월 동안의 항생제 또는 프로바이오틱스 포함)
공부 계획
이 섹션에서는 연구 설계 방법과 연구가 측정하는 내용을 포함하여 연구 계획에 대한 세부 정보를 제공합니다.
연구는 어떻게 설계됩니까?
디자인 세부사항
- 주 목적: 상영
- 할당: 무작위
- 중재 모델: 병렬 할당
- 마스킹: 삼루타
무기와 개입
참가자 그룹 / 팔 |
개입 / 치료 |
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활성 비교기: 홍보
50명의 건강한 지원자가 프로바이오틱스 부문에 무작위로 배정되었습니다.
배설물에서 잔류 미량의 글루텐 및 유사한 단백질을 제거하기 위해 두 그룹 모두 1일차부터 10일차까지 글루텐 프리 다이어트(GFD)를 시행했습니다.
10일 후, 글루텐 투여가 시작되었습니다.
증가하는 투여 계획은 다음과 같다: 4일 동안 50 mg/일; 이후 4일 동안 1g/일; 이후 4일 동안 3g/일; 이후 20일 동안 10g/일(이 경우 동일한 양의 밀 기반 빵 - 4조각)을 다시 도입합니다.
이 단계(10 + 4 + 4 + 4 + 10일 = 총 32일)에서 프로바이오틱스 제제의 투여를 중단하고 10일의 휴약 기간을 가졌습니다.
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락토바실러스 및 바실러스의 다종 균주를 포함한 프로바이오틱스 제제.
생균제는 기준선에서 투여되었고 32일 후에 중단되었습니다.
동시에 다른 쪽 팔에는 위약이 투여되었습니다.
10일 동안 무글루텐 식이요법을 한 후 글루텐을 점점 더 많이 제공했습니다.
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위약 비교기: PL
20명의 건강한 지원자가 위약에 무작위로 배정되었습니다. 대변 물질에서 잔류 미량의 글루텐 및 유사 단백질을 제거하기 위해 두 그룹 모두 1일차부터 10일차까지 글루텐 프리 식이요법(GFD)을 받았습니다.
10일 후, 글루텐 투여가 시작되었습니다.
증가하는 투여 계획은 다음과 같다: 4일 동안 50 mg/일; 이후 4일 동안 1g/일; 이후 4일 동안 3g/일; 이후 20일 동안 10g/일(이 경우 동일한 양의 밀 기반 빵 - 4조각)을 다시 도입합니다.
이 단계(10 + 4 + 4 + 4 + 10일 = 총 32일)에서 위약 제제의 투여를 중단하고 10일의 세척 기간을 가졌습니다.
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위약은 기준선에서 투여되었고 32일 후에 중단되었습니다.
동시에 다른 쪽 팔에는 프로바이오틱스를 투여했습니다.
10일 동안 무글루텐 식이요법을 한 후 글루텐을 점점 더 많이 제공했습니다.
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연구는 무엇을 측정합니까?
주요 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
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경쟁적 Elisa R5 항체에 의해 분변에서 가수분해된 글루텐 양(gluten ppm)
기간: 6 개월
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대변 샘플 수집은 기준선(T0)에 있을 것입니다. GFD 10일(T1); 4일 50mg/일 글루텐 섭취(T2); 4일 1g/일 글루텐 섭취(T3); 4일 3g/일 글루텐 섭취(T4); 20일 10g/일 글루텐 섭취(T5), 그 중 마지막 10일은 유실(T6)이었습니다. 프로바이오틱의 글루텐 분해 효율은 R5 항체를 사용하여 경쟁적 Elisa와 함께 위에서 언급한 모든 시점에서 평가됩니다. 가수분해된 글루텐(글리아딘 에피토프)의 경우.
그런 다음 글리아딘(ppm)의 농도는 제조업체에서 보고한 곱셈 계수(2)에 따라 글루텐으로 변환됩니다.
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6 개월
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장내 마이크로바이옴
기간: 7개월
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배설물 샘플 DNA는 기준선, 개입 기간 및 세척에서 16s rRNA 유전자의 V4 영역을 대상으로 시퀀싱되어 프로바이오틱 혼합물 투여로 인한 장내 마이크로바이옴의 변경 및 PR 부문의 가능한 변조를 평가합니다.
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7개월
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SPME 추출을 사용한 GC-MS에 의한 휘발성 화합물 측정
기간: 6 개월
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개입 시작(T1), 개입 종료(T5) 및 세척(T6) 시점의 배설물 샘플을 GC-MS로 유기 휘발성 화합물에 대해 평가합니다.
휘발성 화합물 및 단쇄 지방산 구성은 중재 그룹 PL과 PR 사이에서 비교됩니다. 4-메틸-2펜탄올(최종 농도 1mg/L-1)은 모든 분석에서 내부 표준으로 사용되어 상대 면적 대 내부 표준 면적의 보간에 의해 확인된 화합물을 정량화합니다.
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6 개월
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SPME 추출을 사용한 GC-MS에 의한 단쇄 지방산 측정
기간: 6 개월
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개입 시작(T1), 개입 종료(T5) 및 세척(T6) 시 대변 샘플은 GC-MS에 의해 SCFA에 대해 평가됩니다.
SCFA 화합물 및 단쇄 지방산 구성은 개입 그룹 PL 대 PR 사이에서 비교될 것입니다.
SCFA 표준(아세트산, 부티르산, 프로피온산, 이소부티르산 및 발레르산)의 혼합물을 포함하는 원액은 초순수에 용해되어 1 μg mL-1 ~ 250 μg mL-1 범위의 검량선을 얻습니다. 교정 곡선은 개별 SCFA의 농도에 대한 정규화된 피크 면적을 플로팅하여 구성됩니다.
대변 샘플에서 SCFA의 상대 피크가 통합되고 SCFA의 농도는 보정 곡선 방정식으로 계산됩니다.
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6 개월
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정량적 PCR(카피수)에 의한 프로바이오틱스 제제의 지속성 및 집락화 능력
기간: 2 개월
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생균제 제제의 지속성 및 집락화 능력은 T1, T5 및 T6에서 cDNA 및 DNA에 대한 qPCR에 의해 평가될 것입니다.
프로바이오틱 제제에 속하는 각 종에 대해 종 특이적 프라이머가 사용됩니다.
qPCR 결과(주기 임계값, CT)는 순수 배양에서 추출한 DNA의 연속 희석액을 사용하여 이전에 구성한 표준 곡선을 기반으로 하는 복제 수(CN)로 변환됩니다.
CN 및 CN(Log)은 DNA 농도 및 앰플리콘 길이를 기준으로 계산됩니다.
CT 및 CN(Log) 보간에 의해 표준 곡선을 얻을 수 있습니다.
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2 개월
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공동 작업자 및 조사자
여기에서 이 연구와 관련된 사람과 조직을 찾을 수 있습니다.
수사관
- 수석 연구원: Olga Nikoloudaki, Ph.D, Free University of Bolzano-Bozen
간행물 및 유용한 링크
연구에 대한 정보 입력을 담당하는 사람이 자발적으로 이러한 간행물을 제공합니다. 이것은 연구와 관련된 모든 것에 관한 것일 수 있습니다.
연구 기록 날짜
이 날짜는 ClinicalTrials.gov에 대한 연구 기록 및 요약 결과 제출의 진행 상황을 추적합니다. 연구 기록 및 보고된 결과는 공개 웹사이트에 게시되기 전에 특정 품질 관리 기준을 충족하는지 확인하기 위해 국립 의학 도서관(NLM)에서 검토합니다.
연구 주요 날짜
연구 시작 (실제)
2020년 10월 1일
기본 완료 (실제)
2021년 4월 30일
연구 완료 (실제)
2021년 5월 31일
연구 등록 날짜
최초 제출
2023년 3월 3일
QC 기준을 충족하는 최초 제출
2023년 3월 22일
처음 게시됨 (실제)
2023년 4월 4일
연구 기록 업데이트
마지막 업데이트 게시됨 (실제)
2023년 4월 4일
QC 기준을 충족하는 마지막 업데이트 제출
2023년 3월 22일
마지막으로 확인됨
2023년 3월 1일
추가 정보
이 연구와 관련된 용어
키워드
기타 연구 ID 번호
- GlutProbiotic
약물 및 장치 정보, 연구 문서
미국 FDA 규제 의약품 연구
아니
미국 FDA 규제 기기 제품 연구
아니
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