Uso de una mezcla seleccionada de cepas probióticas para degradar el gluten durante la digestión
22 de marzo de 2023 actualizado por: Free University of Bozen-Bolzano
Novedoso preparado probiótico con actividad degradante del gluten y efecto modulador de la microbiota intestinal
La ingesta de gluten se extiende por todo el mundo, siendo la principal proteína alimenticia consumida en las dietas occidentales (hasta 20 g de gluten/día).
Pero el gluten tiene características únicas e inusuales.
Resiste la digestión luminal completa por las enzimas gástricas, pancreáticas y del borde en cepillo intestinal, y es susceptible a la modificación postraduccional (desamidación) por las transglutaminasas mucosas.
Aparte de la digestión parcial, el gluten per se tiene un impacto negativo en una parte constante de la población mundial, lo que resulta principalmente en las manifestaciones de la enfermedad celíaca (EC) u otros trastornos relacionados con el gluten.
Este estudio permitirá probar in vivo un nuevo probiótico multiespecies que in vitro ha demostrado degradar el gluten a péptidos no inmunotóxicos.
Descripción general del estudio
Estado
Terminado
Condiciones
Intervención / Tratamiento
Descripción detallada
Hipótesis y significado:
El proyecto pretende confirmar si la nueva preparación probiótica multiespecies tiene la capacidad de degradar el gluten tras la digestión en dosis crecientes (desde 50 mg/d hasta 10 g/d). Además, nuestro objetivo es evaluar la eficiencia del probiótico para persistir y colonizar el intestino humano, así como su capacidad para modular el microbioma intestinal humano.
Dado que se trata de un ensayo de fase 1, se reclutarán participantes sanos para evitar cualquier desencadenante de los síntomas de la EC. Los participantes se someterán a una dieta sin gluten durante 10 días para eliminar cualquier rastro de gluten de sus heces y se les proporcionarán cápsulas de probióticos/placebo siempre que ingieran cantidades específicas de gluten con su comida. Se recogerán muestras fecales al final de cada período en el que se hayan ingerido cantidades crecientes de gluten. Se evaluarán las cantidades de gluten residual en las heces y se estudiará el microbioma fecal mediante análisis de código de barras 16S. También se evaluará el metaboloma fecal así como la persistencia y capacidad de colonización del preparado probiótico por qPCR.
Objetivo Específico 1:
Evaluar la eficiencia depredadora de gluten del probiótico por ELISA
Objetivo Específico 2:
Investigar las alteraciones del microbioma intestinal entre los grupos de intervención y su posible modulación
Objetivo Específico 2:
Investigar el metaboloma fecal (ácidos grasos volátiles y de cadena corta) entre los grupos de intervención
Objetivo Específico 2:
Monitorear la capacidad de persistencia y colonización de la preparación probiótica por qPCR
Tipo de estudio
Intervencionista
Inscripción (Actual)
70
Fase
- No aplica
Contactos y Ubicaciones
Esta sección proporciona los datos de contacto de quienes realizan el estudio e información sobre dónde se lleva a cabo este estudio.
Ubicaciones de estudio
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Bolzano, Italia, 39100
- Free University of Bolzano-Bozen
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Criterios de participación
Los investigadores buscan personas que se ajusten a una determinada descripción, denominada criterio de elegibilidad. Algunos ejemplos de estos criterios son el estado de salud general de una persona o tratamientos previos.
Criterio de elegibilidad
Edades elegibles para estudiar
18 años a 65 años (Adulto, Adulto Mayor)
Acepta Voluntarios Saludables
Sí
Géneros elegibles para el estudio
Todos
Descripción
Criterios de inclusión:
- individuos sanos;
- adherente a la dieta mediterránea
Criterio de exclusión:
- enfermedad médica conocida;
- síntomas conocidos de enfermedades digestivas;
- antecedentes familiares conocidos de enfermedad celíaca (CD);
- alergia al trigo;
- y uso de medicamentos recetados (incluidos antibióticos o probióticos en los 2 meses anteriores)
Plan de estudios
Esta sección proporciona detalles del plan de estudio, incluido cómo está diseñado el estudio y qué mide el estudio.
¿Cómo está diseñado el estudio?
Detalles de diseño
- Propósito principal: Poner en pantalla
- Asignación: Aleatorizado
- Modelo Intervencionista: Asignación paralela
- Enmascaramiento: Triple
Armas e Intervenciones
Grupo de participantes/brazo |
Intervención / Tratamiento |
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Comparador activo: Relaciones públicas
Cincuenta voluntarios sanos fueron asignados al azar en el brazo de probióticos.
Para eliminar los rastros residuales de gluten y proteínas similares de la materia fecal, ambos grupos se sometieron a una dieta libre de gluten (DSG) desde el día 1 hasta el día 10.
A los 10 días se inició la administración de gluten.
El plan de administración creciente fue el siguiente: 50 mg/día durante 4 días; 1 g/día durante los 4 días siguientes; 3 g/día durante los 4 días siguientes; y 10 g/día (en este caso, reintroduciendo una cantidad equivalente de pan de trigo - 4 rebanadas) durante los 20 días siguientes.
En esta etapa (10 + 4 + 4 + 4 + 10 días = total de 32 días), se interrumpió la administración del preparado probiótico, con un período de lavado de 10 días.
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Preparación probiótica que incluye cepas multiespecies de Lactobacillus y Bacillus.
El probiótico se administró al inicio y se interrumpió después de 32 días.
Al mismo tiempo, el otro brazo recibió placebo.
Se proporcionó gluten después de 10 días de dieta sin gluten en cantidades crecientes
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Comparador de placebos: ES
Veinte voluntarios sanos fueron asignados aleatoriamente al grupo placebo. Para eliminar los restos de gluten y proteínas similares de la materia fecal, ambos grupos se sometieron a una dieta sin gluten (DSG) desde el día 1 hasta el día 10.
A los 10 días se inició la administración de gluten.
El plan de administración creciente fue el siguiente: 50 mg/día durante 4 días; 1 g/día durante los 4 días siguientes; 3 g/día durante los 4 días siguientes; y 10 g/día (en este caso, reintroduciendo una cantidad equivalente de pan de trigo - 4 rebanadas) durante los 20 días siguientes.
En esta etapa (10 + 4 + 4 + 4 + 10 días = total de 32 días), se interrumpió la administración de la preparación de placebo, con un período de lavado de 10 días.
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El placebo se administró al inicio y se interrumpió después de 32 días.
Al mismo tiempo, el otro brazo recibió probiótico.
Se proporcionó gluten después de 10 días de dieta sin gluten en cantidades crecientes
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¿Qué mide el estudio?
Medidas de resultado primarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Cantidad de gluten hidrolizado en heces por anticuerpo competitivo Elisa R5 (ppm de gluten)
Periodo de tiempo: 6 meses
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La recolección de muestras fecales será al inicio (T0); 10 días de DLG (T1); 4 días de ingesta de gluten de 50 mg/día (T2); 4 días de ingesta de gluten de 1 g/día (T3); 4 días de ingesta de gluten de 3 g/día (T4); 20 días de ingesta de gluten de 10 g/día (T5), de los cuales 10 últimos días fueron de lavado (T6). La eficiencia de degradación del gluten del probiótico se evaluará en todos los puntos de tiempo mencionados anteriormente con Elisa competitivo utilizando el anticuerpo R5 para gluten hidrolizado (epítopos de gliadina).
La concentración de gliadina (ppm) se convertirá luego en gluten de acuerdo con el factor de multiplicación (2) informado por el fabricante.
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6 meses
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Microbioma intestinal
Periodo de tiempo: 7 meses
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El ADN de las muestras fecales desde el inicio, el período de intervención y el lavado se secuenciará apuntando a la región V4 del gen 16s rRNA para evaluar las alteraciones del microbioma intestinal y la posible modulación en el brazo PR debido a la mezcla probiótica administrada.
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7 meses
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Determinación de compuestos volátiles por GC-MS mediante extracción SPME
Periodo de tiempo: 6 meses
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Las muestras fecales al comienzo de la intervención (T1), al final de la intervención (T5) y al lavado (T6) serán evaluadas por sus compuestos orgánicos volátiles por GC-MS.
Se comparará la composición de compuestos volátiles y ácidos grasos de cadena corta entre los grupos de intervención PL vs PR. Se utilizará 4-metil-2pentanol (concentración final 1 mg L-1) como patrón interno en todos los análisis, para cuantificar los compuestos identificados por interpolación de las áreas relativas versus el área del patrón interno.
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6 meses
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Determinación de ácidos grasos de cadena corta por GC-MS utilizando extracción SPME
Periodo de tiempo: 6 meses
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Las muestras fecales al comienzo de la intervención (T1), al final de la intervención (T5) y al lavado (T6) serán evaluadas para SCFA por GC-MS.
Los compuestos SCFA y la composición de ácidos grasos de cadena corta se compararán entre los grupos de intervención PL frente a PR.
Una solución madre que contenga la mezcla de estándares SCFA (ácido acético, ácido butírico, ácido propiónico, ácido isobutírico y ácido valérico) se disolverá en agua ultrapura para obtener una curva de calibración que varíe de 1 μg mL-1 a 250 μg mL-1. La curva de calibración se construirá trazando el área del pico normalizado frente a la concentración de SCFA individuales.
El pico relativo de SCFA en la muestra fecal se integrará y la concentración de SCFA se calculará mediante la ecuación de la curva de calibración
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6 meses
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Persistencia y capacidad de colonización de la preparación probiótica por PCR cuantitativa (número de copias)
Periodo de tiempo: 2 meses
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La capacidad de persistencia y colonización de la preparación probiótica se evaluará mediante qPCR en ADNc y ADN en T1, T5 y T6.
Para cada especie perteneciente a la preparación probiótica se utilizarán cebadores específicos de especie.
Los resultados de qPCR (umbral de ciclo, CT) se convertirán en número de copia (CN) en función de las curvas estándar construidas previamente mediante el uso de diluciones en serie de ADN extraído de cultivos puros.
El CN y el CN(Log) se calcularán en función de la concentración de ADN y la longitud del amplicón.
Las curvas estándar se obtendrán por interpolación CT y CN(Log).
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2 meses
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Colaboradores e Investigadores
Aquí es donde encontrará personas y organizaciones involucradas en este estudio.
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Colaboradores
Investigadores
- Investigador principal: Olga Nikoloudaki, Ph.D, Free University of Bolzano-Bozen
Publicaciones y enlaces útiles
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Fechas de registro del estudio
Estas fechas rastrean el progreso del registro del estudio y los envíos de resultados resumidos a ClinicalTrials.gov. Los registros del estudio y los resultados informados son revisados por la Biblioteca Nacional de Medicina (NLM) para asegurarse de que cumplan con los estándares de control de calidad específicos antes de publicarlos en el sitio web público.
Fechas importantes del estudio
Inicio del estudio (Actual)
1 de octubre de 2020
Finalización primaria (Actual)
30 de abril de 2021
Finalización del estudio (Actual)
31 de mayo de 2021
Fechas de registro del estudio
Enviado por primera vez
3 de marzo de 2023
Primero enviado que cumplió con los criterios de control de calidad
22 de marzo de 2023
Publicado por primera vez (Actual)
4 de abril de 2023
Actualizaciones de registros de estudio
Última actualización publicada (Actual)
4 de abril de 2023
Última actualización enviada que cumplió con los criterios de control de calidad
22 de marzo de 2023
Última verificación
1 de marzo de 2023
Más información
Términos relacionados con este estudio
Palabras clave
Otros números de identificación del estudio
- GlutProbiotic
Información sobre medicamentos y dispositivos, documentos del estudio
Estudia un producto farmacéutico regulado por la FDA de EE. UU.
No
Estudia un producto de dispositivo regulado por la FDA de EE. UU.
No
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