Использование выбранной смеси пробиотических штаммов для деградации глютена во время пищеварения
22 марта 2023 г. обновлено: Free University of Bozen-Bolzano
Новый пробиотический препарат с активностью по разложению глютена и эффектом модуляции кишечной микробиоты
Потребление глютена распространяется по всему миру, поскольку он является основным пищевым белком, потребляемым в западных диетах (до 20 г глютена в день).
Но глютен имеет уникальные и необычные свойства.
Он устойчив к полному перевариванию в просвете желудка ферментами щеточной каймы желудка, поджелудочной железы и кишечника и восприимчив к посттрансляционной модификации (деамидированию) трансглютаминазами слизистой оболочки.
Помимо частичного переваривания, глютен сам по себе оказывает негативное влияние на значительную часть населения мира, что в основном приводит к проявлениям глютеновой болезни (ЦБ) или другим связанным с глютеном заболеваниям.
Это исследование позволит протестировать in vivo новый мультивидовой пробиотик, который, как было доказано in vitro, расщепляет глютен до неиммунотоксичных пептидов.
Обзор исследования
Статус
Завершенный
Условия
Подробное описание
Гипотеза и значение:
Целью проекта является подтверждение способности нового многокомпонентного пробиотического препарата расщеплять глютен при переваривании при увеличении дозировки (от 50 мг/день до 10 г/день). Кроме того, мы стремимся оценить эффективность пробиотика для сохранения и колонизации кишечника человека, а также его способность модулировать микробиом кишечника человека.
Поскольку это испытание фазы 1, будут набраны здоровые участники, чтобы избежать каких-либо триггеров симптомов целиакии. Участники будут проходить безглютеновую диету в течение 10 дней, чтобы устранить любые следы глютена из их фекалий, и им будут предоставлены капсулы с пробиотиками / плацебо до тех пор, пока определенное количество глютена будет поступать с пищей. Образцы фекалий будут собираться в конце каждого периода, в течение которого было проглочено увеличивающееся количество глютена. Остаточное количество глютена в фекалиях будет оцениваться, а фекальный микробиом будет изучаться с помощью анализа метабаркодирования 16S. Метаболом фекалий также будет оцениваться с помощью количественной ПЦР до тех пор, пока сохраняется способность пробиотического препарата к колонизации.
Конкретная цель 1:
Оцените эффективность пробиотика по уничтожению глютена с помощью ELISA.
Конкретная цель 2:
Изучите изменения кишечного микробиома между группами вмешательства и возможную модуляцию
Конкретная цель 2:
Изучите фекальный метаболизм (летучие вещества и короткоцепочечные жирные кислоты) между группами вмешательства.
Конкретная цель 2:
Мониторинг стойкости и колонизационной способности пробиотического препарата с помощью количественной ПЦР
Тип исследования
Интервенционный
Регистрация (Действительный)
70
Фаза
- Непригодный
Контакты и местонахождение
В этом разделе приведены контактные данные лиц, проводящих исследование, и информация о том, где проводится это исследование.
Места учебы
-
-
-
Bolzano, Италия, 39100
- Free University of Bolzano-Bozen
-
-
Критерии участия
Исследователи ищут людей, которые соответствуют определенному описанию, называемому критериям приемлемости. Некоторыми примерами этих критериев являются общее состояние здоровья человека или предшествующее лечение.
Критерии приемлемости
Возраст, подходящий для обучения
От 18 лет до 65 лет (Взрослый, Пожилой взрослый)
Принимает здоровых добровольцев
Да
Полы, имеющие право на обучение
Все
Описание
Критерии включения:
- здоровые люди;
- приверженец средиземноморской диеты
Критерий исключения:
- известное медицинское заболевание;
- симптомы известных заболеваний пищеварительной системы;
- известный семейный анамнез целиакии (CD);
- аллергия на пшеницу;
- и использование рецептурных лекарств (включая антибиотики или пробиотики в предыдущие 2 месяца)
Учебный план
В этом разделе представлена подробная информация о плане исследования, в том числе о том, как планируется исследование и что оно измеряет.
Как устроено исследование?
Детали дизайна
- Основная цель: Скрининг
- Распределение: Рандомизированный
- Интервенционная модель: Параллельное назначение
- Маскировка: Тройной
Оружие и интервенции
Группа участников / Армия |
Вмешательство/лечение |
|---|---|
|
Активный компаратор: Пиар
Пятьдесят здоровых добровольцев были случайным образом распределены в пробиотическую группу.
Для устранения остаточных следов глютена и аналогичных белков из фекального материала обе группы подвергались безглютеновой диете (БГД) с 1-го по 10-й день.
Через 10 дней начали введение глютена.
План увеличения дозировки был следующим: 50 мг/день в течение 4 дней; 1 г/сут в течение последующих 4 дней; 3 г/сут в течение последующих 4 дней; и 10 г/сут (в этом случае повторно вводят эквивалентное количество пшеничного хлеба - 4 ломтика) в течение последующих 20 дней.
На этом этапе (10 + 4 + 4 + 4 + 10 дней = всего 32 дня) введение пробиотического препарата было прервано с периодом вымывания 10 дней.
|
Пробиотический препарат, включающий многовидовые штаммы Lactobacillus и Bacillus.
Пробиотик вводили на исходном уровне и прерывали через 32 дня.
В то же время другая рука получала плацебо.
Глютен был обеспечен после 10 дней безглютеновой диеты в возрастающих количествах.
|
|
Плацебо Компаратор: PL
Двадцать здоровых добровольцев были случайным образом распределены в группу плацебо. Для устранения остаточных следов глютена и аналогичных белков из фекального материала обе группы подвергались безглютеновой диете (БГД) с 1-го по 10-й день.
Через 10 дней начали введение глютена.
План увеличения дозировки был следующим: 50 мг/день в течение 4 дней; 1 г/сут в течение последующих 4 дней; 3 г/сут в течение последующих 4 дней; и 10 г/сут (в этом случае повторно вводят эквивалентное количество пшеничного хлеба - 4 ломтика) в течение последующих 20 дней.
На этом этапе (10 + 4 + 4 + 4 + 10 дней = всего 32 дня) введение препарата плацебо было прервано с периодом вымывания 10 дней.
|
Плацебо вводили на исходном уровне и прерывали через 32 дня.
В то же время другая рука получала пробиотик.
Глютен был обеспечен после 10 дней безглютеновой диеты в возрастающих количествах.
|
Что измеряет исследование?
Первичные показатели результатов
Мера результата |
Мера Описание |
Временное ограничение |
|---|---|---|
|
Количество гидролизованного глютена в фекалиях с помощью конкурентного антитела Elisa R5 (глютен в частях на миллион)
Временное ограничение: 6 месяцев
|
Сбор образцов фекалий будет базовым (T0); 10 дней безглютеновой диеты (Т1); 4 дня приема 50 мг глютена в день (T2); 4 дня приема 1 г глютена в день (T3); 4 дня приема 3 г глютена в день (T4); 20 дней приема 10 г/день глютена (T5), из которых 10 последних дней были вымыванием (T6). Эффективность разложения глютена пробиотиком будет оцениваться во всех вышеупомянутых временных точках с помощью конкурентного ELISA с использованием антитела R5. для гидролизованного глютена (эпитопы глиадина).
Затем концентрация глиадина (млн) будет преобразована в глютен в соответствии с коэффициентом умножения (2), указанным производителем.
|
6 месяцев
|
|
Микробиом кишечника
Временное ограничение: 7 месяцев
|
ДНК образцов фекалий от исходного уровня, периода вмешательства и вымывания будет секвенирована, нацеленная на область V4 гена 16s рРНК, чтобы оценить изменения микробиома кишечника и возможную модуляцию в группе PR из-за вводимой пробиотической смеси.
|
7 месяцев
|
|
Определение летучих соединений методом ГХ-МС с экстракцией ТФМЭ
Временное ограничение: 6 месяцев
|
Образцы фекалий в начале вмешательства (T1), в конце вмешательства (T5) и после вымывания (T6) будут оцениваться на наличие органических летучих соединений с помощью ГХ-МС.
Летучие соединения и состав короткоцепочечных жирных кислот будут сравниваться между группами вмешательства PL и PR. 4-метил-2-пентанол (конечная концентрация 1 мг л-1) будет использоваться в качестве внутреннего стандарта во всех анализах для количественного определения идентифицированных соединений путем интерполяции относительных площадей по сравнению с площадью внутреннего стандарта.
|
6 месяцев
|
|
Определение короткоцепочечных жирных кислот с помощью ГХ-МС с экстракцией ТФМЭ
Временное ограничение: 6 месяцев
|
Образцы фекалий в начале вмешательства (T1), в конце вмешательства (T5) и после вымывания (T6) будут оцениваться на наличие короткоцепочечных жирных кислот с помощью ГХ-МС.
Соединения SCFAs и состав короткоцепочечных жирных кислот будут сравниваться между группами вмешательства PL и PR.
Исходный раствор, содержащий смесь стандартов SCFA (уксусная кислота, масляная кислота, пропионовая кислота, изомасляная кислота и валериановая кислота), будет растворен в сверхчистой воде для получения калибровочной кривой в диапазоне от 1 мкг мл-1 до 250 мкг мл-1. Калибровочная кривая будет построена путем построения нормализованной площади пика в зависимости от концентрации отдельных SCFAs.
Относительный пик SCFAs в образце фекалий будет интегрирован, и концентрация SCFAs будет рассчитана по уравнению калибровочной кривой.
|
6 месяцев
|
|
Стойкость и колонизирующая способность пробиотического препарата с помощью количественной ПЦР (количество копий)
Временное ограничение: 2 месяца
|
Стойкость и способность пробиотического препарата к колонизации будут оцениваться с помощью количественной ПЦР на кДНК и ДНК в Т1, Т5 и Т6.
Для каждого вида, входящего в состав пробиотического препарата, будут использоваться видоспецифичные праймеры.
Результаты qPCR (порог цикла, CT) будут преобразованы в число копий (CN) на основе стандартных кривых, ранее построенных с использованием серийных разведений ДНК, извлеченных из чистых культур.
CN и CN(Log) будут рассчитываться на основе концентрации ДНК и длины ампликона.
Стандартные кривые будут получены интерполяцией CT и CN(Log).
|
2 месяца
|
Соавторы и исследователи
Здесь вы найдете людей и организации, участвующие в этом исследовании.
Спонсор
Соавторы
Следователи
- Главный следователь: Olga Nikoloudaki, Ph.D, Free University of Bolzano-Bozen
Публикации и полезные ссылки
Лицо, ответственное за внесение сведений об исследовании, добровольно предоставляет эти публикации. Это может быть что угодно, связанное с исследованием.
Даты записи исследования
Эти даты отслеживают ход отправки отчетов об исследованиях и сводных результатов на сайт ClinicalTrials.gov. Записи исследований и сообщаемые результаты проверяются Национальной медицинской библиотекой (NLM), чтобы убедиться, что они соответствуют определенным стандартам контроля качества, прежде чем публиковать их на общедоступном веб-сайте.
Изучение основных дат
Начало исследования (Действительный)
1 октября 2020 г.
Первичное завершение (Действительный)
30 апреля 2021 г.
Завершение исследования (Действительный)
31 мая 2021 г.
Даты регистрации исследования
Первый отправленный
3 марта 2023 г.
Впервые представлено, что соответствует критериям контроля качества
22 марта 2023 г.
Первый опубликованный (Действительный)
4 апреля 2023 г.
Обновления учебных записей
Последнее опубликованное обновление (Действительный)
4 апреля 2023 г.
Последнее отправленное обновление, отвечающее критериям контроля качества
22 марта 2023 г.
Последняя проверка
1 марта 2023 г.
Дополнительная информация
Термины, связанные с этим исследованием
Ключевые слова
Другие идентификационные номера исследования
- GlutProbiotic
Информация о лекарствах и устройствах, исследовательские документы
Изучает лекарственный продукт, регулируемый FDA США.
Нет
Изучает продукт устройства, регулируемый Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США.
Нет
Эта информация была получена непосредственно с веб-сайта clinicaltrials.gov без каких-либо изменений. Если у вас есть запросы на изменение, удаление или обновление сведений об исследовании, обращайтесь по адресу register@clinicaltrials.gov. Как только изменение будет реализовано на clinicaltrials.gov, оно будет автоматически обновлено и на нашем веб-сайте. .