Použití vybrané směsi probiotických kmenů pro degradaci lepku během trávení
22. března 2023 aktualizováno: Free University of Bozen-Bolzano
Nový probiotický přípravek s aktivitou degradující lepek a modulačním účinkem na střevní mikrobiotu
Příjem lepku se rozšiřuje po celém světě a je hlavní potravinovou bílkovinou konzumovanou v západní stravě (až 20 g lepku/den).
Ale lepek má jedinečné a neobvyklé vlastnosti.
Odolává úplnému luminálnímu trávení žaludečními, pankreatickými a střevními enzymy kartáčového lemu a je citlivý na posttranslační modifikaci (deamidaci) slizničními transglutaminázami.
Lepek sám o sobě má kromě částečného trávení negativní dopad na stálou část celosvětové populace, což má za následek především projevy celiakie (CD) nebo jiných poruch souvisejících s lepkem.
Tato studie umožní testovat in vivo nové vícedruhové probiotikum, které in vitro prokázalo degradaci lepku na neimunotoxické peptidy.
Přehled studie
Postavení
Dokončeno
Podmínky
Detailní popis
Hypotéza a význam:
Cílem projektu je potvrdit, zda nový vícedruhový probiotický přípravek má schopnost degradovat lepek při trávení při zvyšujících se dávkách (od 50 mg/d do 10 g/d). Dále se zaměřujeme na hodnocení účinnosti probiotik při přetrvávání a kolonizaci lidského střeva a také na jeho schopnost modulovat lidský střevní mikrobiom.
Protože se jedná o studii fáze 1, budou přijati zdraví účastníci, aby se předešlo jakémukoli spouštěči symptomů CD. Účastníci podstoupí bezlepkovou dietu po dobu 10 dnů, aby odstranili jakékoli stopy lepku z jejich stolice, a budou jim poskytnuty probiotické/placebové kapsle, pokud budou s jídlem přijímána konkrétní množství lepku. Vzorky stolice budou odebírány na konci každého období, kdy bylo požito zvyšující se množství lepku. Bude vyhodnoceno zbytkové množství lepku ve stolici a fekální mikrobiom bude studován pomocí 16S metabarcoding analýzy. Bude také hodnocen fekální metabolom, pokud jde o perzistenci a kolonizační schopnost probiotického přípravku pomocí qPCR.
Konkrétní cíl 1:
Vyhodnoťte účinnost probiotika na ničení lepku pomocí ELISA
Konkrétní cíl 2:
Prozkoumejte změny střevního mikrobiomu mezi intervenčními skupinami a možnou modulaci
Konkrétní cíl 2:
Prozkoumejte fekální metabolom (těkavé látky a mastné kyseliny s krátkým řetězcem) mezi intervenčními skupinami
Konkrétní cíl 2:
Monitorujte perzistenci a kolonizační schopnost probiotického přípravku pomocí qPCR
Typ studie
Intervenční
Zápis (Aktuální)
70
Fáze
- Nelze použít
Kontakty a umístění
Tato část poskytuje kontaktní údaje pro ty, kteří studii provádějí, a informace o tom, kde se tato studie provádí.
Studijní místa
-
-
-
Bolzano, Itálie, 39100
- Free University of Bolzano-Bozen
-
-
Kritéria účasti
Výzkumníci hledají lidi, kteří odpovídají určitému popisu, kterému se říká kritéria způsobilosti. Některé příklady těchto kritérií jsou celkový zdravotní stav osoby nebo předchozí léčba.
Kritéria způsobilosti
Věk způsobilý ke studiu
18 let až 65 let (Dospělý, Starší dospělý)
Přijímá zdravé dobrovolníky
Ano
Pohlaví způsobilá ke studiu
Všechno
Popis
Kritéria pro zařazení:
- zdraví jedinci;
- dodržující středomořskou stravu
Kritéria vyloučení:
- známé lékařské onemocnění;
- známé příznaky onemocnění trávicího traktu;
- známá rodinná anamnéza celiakie (CD);
- alergie na pšenici;
- a užívání léků na předpis (včetně antibiotik nebo probiotik v předchozích 2 měsících)
Studijní plán
Tato část poskytuje podrobnosti o studijním plánu, včetně toho, jak je studie navržena a co studie měří.
Jak je studie koncipována?
Detaily designu
- Primární účel: Promítání
- Přidělení: Randomizované
- Intervenční model: Paralelní přiřazení
- Maskování: Trojnásobný
Zbraně a zásahy
Skupina účastníků / Arm |
Intervence / Léčba |
|---|---|
|
Aktivní komparátor: PR
Padesát zdravých dobrovolníků bylo náhodně rozděleno do probiotické větve.
Aby se odstranily zbytkové stopy lepku a podobných proteinů z fekálního materiálu, obě skupiny podstoupily bezlepkovou dietu (GFD) od 1. do 10. dne.
Po 10 dnech začalo podávání lepku.
Zvyšující se plán podávání byl následující: 50 mg/den po dobu 4 dnů; 1 g/den po následující 4 dny; 3 g/den po následující 4 dny; a 10 g/den (v tomto případě opětovné zavedení ekvivalentního množství chleba na bázi pšenice - 4 plátky) po dobu následujících 20 dnů.
V této fázi (10 + 4 + 4 + 4 + 10 dní = celkem 32 dní) bylo podávání probiotického přípravku přerušeno s dobou vymývání 10 dní.
|
Probiotický přípravek zahrnující vícedruhové kmeny Lactobacillus a Bacillus.
Probiotikum bylo podáváno na začátku a přerušeno po 32 dnech.
Ve stejné době druhé rameno dostávalo placebo.
Lepek byl podáván po 10 dnech bezlepkové diety ve zvyšujících se množstvích
|
|
Komparátor placeba: PL
Do placeba bylo náhodně rozděleno dvacet zdravých dobrovolníků. Aby se odstranily zbytkové stopy lepku a podobných proteinů z fekálního materiálu, obě skupiny podstoupily bezlepkovou dietu (GFD) od 1. do 10. dne.
Po 10 dnech začalo podávání lepku.
Zvyšující se plán podávání byl následující: 50 mg/den po dobu 4 dnů; 1 g/den po následující 4 dny; 3 g/den po následující 4 dny; a 10 g/den (v tomto případě opětovné zavedení ekvivalentního množství chleba na bázi pšenice - 4 plátky) po dobu následujících 20 dnů.
V této fázi (10 + 4 + 4 + 4 + 10 dní = celkem 32 dní) bylo podávání placeba přerušeno s obdobím 10 dnů vymývání.
|
Placebo bylo podáváno na začátku a přerušeno po 32 dnech.
Současně druhá paže dostávala probiotika.
Lepek byl podáván po 10 dnech bezlepkové diety ve zvyšujících se množstvích
|
Co je měření studie?
Primární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Množství hydrolyzovaného lepku ve stolici kompetitivní protilátkou Elisa R5 (ppm lepku)
Časové okno: 6 měsíců
|
Odběr vzorků stolice bude na výchozí hodnotě (T0); 10 dní GFD (T1); 4 dny příjmu 50 mg/den lepku (T2); 4 dny příjmu 1 g/den lepku (T3); 4 dny příjmu 3 g/den lepku (T4); 20 dní příjmu 10 g/den lepku (T5), z toho posledních 10 dní vyplavování (T6). Účinnost probiotika odbourávání lepku bude hodnocena ve všech výše uvedených časových bodech s konkurenční Elisou s použitím protilátky R5 pro hydrolyzovaný lepek (gliadinové epitopy).
Koncentrace gliadinu (ppm) bude poté převedena na lepek podle multiplikačního faktoru (2) uváděného výrobcem.
|
6 měsíců
|
|
Střevní mikrobiom
Časové okno: 7 měsíců
|
Vzorky stolice DNA ze základní linie, období intervence a vymytí budou sekvenovány zacílením na oblast V4 genu rRNA 16s, aby se vyhodnotily změny střevního mikrobiomu a možná modulace v rameni PR v důsledku podávané probiotické směsi
|
7 měsíců
|
|
Stanovení těkavých látek pomocí GC-MS pomocí extrakce SPME
Časové okno: 6 měsíců
|
Vzorky stolice na začátku intervence (T1), na konci intervence (T5) a vymývání (T6) budou hodnoceny na obsah organických těkavých látek pomocí GC-MS.
Těkavé sloučeniny a složení mastných kyselin s krátkým řetězcem budou porovnány mezi intervenčními skupinami PL vs. 4-methyl-2pentanol (konečná koncentrace 1 mg L-1) bude použit jako vnitřní standard ve všech analýzách pro kvantifikaci identifikovaných sloučenin interpolací relativních ploch versus plocha vnitřního standardu.
|
6 měsíců
|
|
Stanovení mastných kyselin s krátkým řetězcem pomocí GC-MS pomocí extrakce SPME
Časové okno: 6 měsíců
|
Vzorky stolice na začátku intervence (T1), na konci intervence (T5) a vymývání (T6) budou vyhodnoceny na SCFA pomocí GC-MS.
Sloučeniny SCFA a složení mastných kyselin s krátkým řetězcem budou porovnány mezi intervenčními skupinami PL vs. PR.
Zásobní roztok obsahující směs standardů SCFA (kyselina octová, kyselina máselná, kyselina propionová, kyselina isomáselná a kyselina valerová) se rozpustí v ultračisté vodě, aby se získala kalibrační křivka v rozsahu od 1 μg ml-1 do 250 μg ml-1. Kalibrační křivka bude sestrojena vynesením normalizované plochy píku proti koncentraci jednotlivých SCFA.
Relativní pík SCFA ve vzorku stolice bude integrován a koncentrace SCFA bude vypočtena pomocí rovnice kalibrační křivky
|
6 měsíců
|
|
Perzistence a kolonizační schopnost probiotického přípravku pomocí kvantitativní PCR (počet kopií)
Časové okno: 2 měsíce
|
Perzistence a kolonizační schopnost probiotického přípravku bude hodnocena pomocí qPCR na cDNA a DNA v T1, T5 a T6.
Pro každý druh patřící do probiotického přípravku budou použity druhově specifické primery.
Výsledky qPCR (prahová hodnota cyklu, CT) budou převedeny na počet kopií (CN) na základě standardních křivek, které byly dříve vytvořeny pomocí sériových ředění DNA extrahované z čistých kultur.
CN a CN(Log) budou vypočteny na základě koncentrace DNA a délky amplikonu.
Standardní křivky budou získány interpolací CT a CN(Log).
|
2 měsíce
|
Spolupracovníci a vyšetřovatelé
Zde najdete lidi a organizace zapojené do této studie.
Sponzor
Spolupracovníci
Vyšetřovatelé
- Vrchní vyšetřovatel: Olga Nikoloudaki, Ph.D, Free University of Bolzano-Bozen
Publikace a užitečné odkazy
Osoba odpovědná za zadávání informací o studiu tyto publikace poskytuje dobrovolně. Mohou se týkat čehokoli, co souvisí se studiem.
Termíny studijních záznamů
Tato data sledují průběh záznamů studie a předkládání souhrnných výsledků na ClinicalTrials.gov. Záznamy ze studií a hlášené výsledky jsou před zveřejněním na veřejné webové stránce přezkoumány Národní lékařskou knihovnou (NLM), aby se ujistily, že splňují specifické standardy kontroly kvality.
Hlavní termíny studia
Začátek studia (Aktuální)
1. října 2020
Primární dokončení (Aktuální)
30. dubna 2021
Dokončení studie (Aktuální)
31. května 2021
Termíny zápisu do studia
První předloženo
3. března 2023
První předloženo, které splnilo kritéria kontroly kvality
22. března 2023
První zveřejněno (Aktuální)
4. dubna 2023
Aktualizace studijních záznamů
Poslední zveřejněná aktualizace (Aktuální)
4. dubna 2023
Odeslaná poslední aktualizace, která splnila kritéria kontroly kvality
22. března 2023
Naposledy ověřeno
1. března 2023
Více informací
Termíny související s touto studií
Klíčová slova
Další identifikační čísla studie
- GlutProbiotic
Informace o lécích a zařízeních, studijní dokumenty
Studuje lékový produkt regulovaný americkým FDA
Ne
Studuje produkt zařízení regulovaný americkým úřadem FDA
Ne
Tyto informace byly beze změn načteny přímo z webu clinicaltrials.gov. Máte-li jakékoli požadavky na změnu, odstranění nebo aktualizaci podrobností studie, kontaktujte prosím register@clinicaltrials.gov. Jakmile bude změna implementována na clinicaltrials.gov, bude automaticky aktualizována i na našem webu .