体外受精の結果に対する筋腫切除術の影響

グループ化および盲検法 これは、全国的な多施設のランダム化比較研究です。 競争登録はすべてのセンター間で行われます。 研究グループは筋腫切除術後に体外受精を受け、対照グループはおそらく診断用腹腔鏡検査を含む日常的な評価後に体外受精を指示されました。 この研究では、集中ランダムシステムに従って、836 人の患者が各グループ 418 人の患者からなる 2 つのグループにランダムに分割されました。 ランダム シーケンスは、ブロック サイズ 4 のランダム ブロック サイズで生成されます。

臨床データとサンプルの収集 データとサンプルは、無作為化された情報、疫学的情報、臨床情報を含む症例報告書 (CRF) フォームに従って収集されます。 不妊症の病歴と詳細、画像検査結果、卵巣予約および手術所見の評価は特に重要であり、詳細に記録されます。

研究グループの末梢血、子宮頸部剥離細胞、子宮内膜剥離細胞、子宮内膜生検および筋腫のサンプルがマルチオミックス分析のために収集されます。 サンプル採取のプロセスは、外科的治療や体外受精の治療を妨げたり、悪化させたりしてはなりません。

IVF治療：IVFレジメンには、ダウンレギュレーション計画、サイクル数、凍結胚盤胞または新鮮胚盤胞の詳細な記録を含める必要があります。 ①研究グループ：IVF治療は筋腫切除後6か月後に実行され、患者はIVF開始後1年間追跡される必要があります。 。 子宮筋腫摘出中に子宮内膜が露出した場合、体外受精治療は筋腫摘出術の 12 か月後に行われます。 術後の避妊期間、および筋腫切除術と体外受精の間の時間間隔も記録する必要があることに注意してください。

②対照群：関連評価後直ちに体外受精治療を実施し、体外受精開始後1年間経過観察を行った。

ゲノム特徴検査とバイオインフォマティクス解析

1. 子宮内膜受容アレイ (ERA) は、マイクロアレイ技術に基づく分子診断検査であり、238 個の選択された遺伝子の発現に基づいて子宮内膜生検を受容型、前受容型、または増殖型に分類します。 ER マップ/ER ステージは、子宮内膜の増殖と胚の着床に関連する母体の免疫応答に関与する 184 個の遺伝子の発現に基づいています。
2. メチル化シーケンス: 末梢血、組織、細胞に関連する DNA を抽出し、Qubit 2.0 を使用して DNA 濃度を正確に定量します。 検出される DNA の総量は 1ug 未満であってはなりません。 ライブラリー構築: サンプル検出を通過した後、Biouptor システムを使用して 1 μ g のサンプルゲノム DNA を非メチル化ラムダ DNA と混合し、平均サイズ約 250 bp に断片化しました。 断片化後、精製したランダム断片化 DNA を、T4 DNA ポリメラーゼ、クレノウ フラグメント、および T4 ポリヌクレオチド キナーゼの混合物で修復、不動態化およびリン酸化しました。 次に、平滑DNA断片をKlenow断片(3'-5'exo-)で3'アデノシル化し、T4 DNAリガーゼを使用してシトシンの代わりに5'-メチルシトシンを接続するリンカーに連結した。 各ステップが完了したら、磁気ビーズを使用して DNA を精製します。 次に、ZYMO EZ DNA メチル化ゴールド キットを使用して、指示に従って非メチル化シトシンをウラシルに変換します。 最後に、JumpStart Taq DNA ポリメラーゼを使用して PCR 増幅を行い、磁気ビーズを使用して PCR 産物を精製し、最終ライブラリを取得します。 ライブラリの品質検査：ライブラリの構築完了後、Qubit2.0を用いて予備定量を実施し、 そしてライブラリーを 1ng/ul に希釈します。 次に、Agilent 2100 を使用してライブラリのインサート サイズをテストします。 インサートのサイズが期待どおりになったら、qPCR 法を使用してライブラリーの有効濃度を正確に定量し (ライブラリーの有効濃度 > 2nM)、ライブラリーの品質を保証します。 オンラインシーケンス: ライブラリー検出に合格した後、有効濃度とターゲットのオフラインデータ量要件に従ってさまざまなライブラリーがプールされ、PE150 シーケンス戦略を使用して Illumina Nova プラットフォーム上でシーケンスされます。 その後、元のオフラインデータの品質管理、配列比較、メチル化レベルの計算、差次的メチル化領域（DMR）の同定と統計が行われました。

尿タンパク質の検出とバイオインフォマティクス分析

1. タンパク質分離技術：二次元ゲル電気泳動（2DE）、二次元蛍光示差電気泳動（2D-DIGE）、等電点電気泳動（IEF）、液体クロマトグラフィー。多次元クロマトグラフィー (MDC) (サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆相高速クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィーなどを含む)、および多次元液体クロマトグラフィー (MDLC)。
2. タンパク質同定技術: 一次質量分析: さまざまなイオン源に応じて、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析 (MALDI-TOF-MS) と電気スプレー質量分析 (ESI MS) に分けることができます。二次質量分析法: ペプチド質量フィンガープリント (PMF)。新技術: 安定核種シグネチャーバイオ質量分析法 (SIAMS)。
3. タンパク質ペプチドセグメントの同定：エドマンなどのアミノ末端およびカルボキシル末端分析。ペプチドフラグメント質量分析法およびタンデム質量分析法を含む質量分析法。
4. タンパク質相互作用: 免疫沈降技術、酵母ツーハイブリッドシステム、プロテインチップ技術。

メタボロミクスおよびバイオインフォマティクス分析

1. 子宮内膜組織を分離後、直ちに液体窒素中で凍結し、-80℃で保存し、粉砕・破砕し、冷有機液液抽出法により抽出した。 サンプリング前およびサンプリング中に代謝変化を避けるように注意を払う必要があります。 収集した細胞、組織、血液、尿に対してメタボロミクス分析を実行します。
2. 代謝産物の抽出: 代謝産物の抽出で最も一般的に使用される方法は、有機溶媒でタンパク質を沈殿させ、高速遠心分離または超高速濾過によって上清を抽出してタンパク質の沈殿を除去することです。 凍結乾燥または窒素吹き込みにより濃縮し、残留物を複合溶媒に溶解します。
3. サンプル検出: 一定量の再溶解した上清を採取し、機械検出には Thermo Vanquish UHPLC 超高速液体クロマトグラフィー システムと Thermo Q Active HF-X 質量分析プラットフォームを使用します。
4. データ処理: 質量分析検出が完了すると、オフライン データ (. raw) ファイルを検索ソフトウェアにインポートして、保持時間、質量電荷比、その他のパラメーターを簡単にスクリーニングします。 次に、さまざまなサンプルの保持時間偏差、品質偏差、信号強度偏差、信号対雑音比、最小信号強度、およびその他の情報に従って、ピークの位置合わせとピークの抽出が実行されます。 同時にピーク面積が定量化され、対象イオンを統合して分子式を予測し、データベースと比較してデータの同定と定量結果を取得します。 したがって、非標的メタボロミクス データベースと検索ソフトウェアは、実験結果において決定的な役割を果たします。 ただし、LC-MS には公開データベースがほとんどなく、そのほとんどはプラットフォームで構築されたデータベースです。 一般的に使用されるデータベースには、HMDB、METLIN、およびいくつかの自己構築ライブラリが含まれます。
5. 情報分析：主成分分析、示差代謝物分析など