Innvirkningen av myomektomi på IVF-resultater

Gruppering og blindingsmetode Dette er en nasjonal multisenter, randomisert kontrollert studie. Konkurrerende påmelding utføres blant alle sentrene. Studiegruppen fikk IVF etter myomektomi og kontrollgruppen ble henvist til IVF etter rutineevalueringen, sannsynligvis inkludert diagnostisk laparoskopi. I denne studien ble 836 pasienter tilfeldig delt inn i 2 grupper med 418 pasienter i hver gruppe i henhold til sentralisert tilfeldig system. En tilfeldig sekvens genereres med en tilfeldig blokkstørrelse på en blokkstørrelse på 4.

Innsamling av kliniske data og prøver Data og prøver samles inn i henhold til Case Report Form (CRF)-skjema, inkludert randomisert informasjon, epidemiologisk og klinisk informasjon. Evaluering av infertilitetshistorie og detaljer, bilderesultater, ovariereservasjon og kirurgiske funn er av spesiell interesse og detaljert registrert.

Prøver av perifert blod, livmorhalseksfolierte celler, endometrieeksfolierede celler, endometriebiopsi og myom i studiegruppen samles inn for multi-omics-analyse. Prosessen med prøveinnsamling bør ikke forstyrre eller forringe den kirurgiske og IVF-behandlingen.

IVF-behandling: IVF-kuren bør inkludere detaljerte registreringer av nedreguleringsplanen, antall sykluser, frosne eller ferske blastocyster, ①Studiegruppe: IVF-behandling utføres 6 måneder etter myomektomi, og pasienter bør følges opp i 1 år etter start av IVF . Hvis endometriet eksponeres under myomektomi, utføres IVF-behandling 12 måneder etter myomektomi. Det skal bemerkes at tiden for postoperativ prevensjon bør registreres, og også tidsintervallet mellom myomektomi og IVF.

②Kontrollgruppe: IVF-behandling ble utført umiddelbart etter relevant evaluering, og oppfølging i 1 år etter oppstart av IVF.

Genomisk trekkundersøkelse og bioinformatikkanalyse

1. Endometrial reseptive array (ERA) er en molekylær diagnostisk test basert på mikroarray-teknologi, som deler endometriebiopsi inn i reseptive, prereseptive eller proliferative typer basert på ekspresjonen av 238 utvalgte gener. ER Map/ER Stage er basert på uttrykket av 184 gener involvert i mors immunrespons relatert til endometrial proliferasjon og embryoimplantasjon.
2. Metyleringssekvensering: Trekk ut DNA relatert til perifert blod, vev og celler, og kvantifiser nøyaktig DNA-konsentrasjon ved hjelp av Qubit 2.0. Den totale mengden DNA påvist bør ikke være mindre enn 1 ug. Bibliotekkonstruksjon: Etter å ha bestått prøvedeteksjonen, ble 1 µg av genomisk DNA-prøve blandet med umetylert lambda-DNA ved bruk av Biouptor-systemet, og deretter fragmentert til en gjennomsnittlig størrelse på omtrent 250 bp. Etter fragmentering ble det rensede tilfeldige fragmenterte DNA reparert, passivert og fosforylert med en blanding av T4 DNA polymerase, Klenow fragment og T4 polynukleotid kinase. Det butte DNA-fragmentet ble deretter 3'adenosylert med Klenow-fragment (3'-5'exo-), og deretter koblet til linkeren som forbinder 5'-metylcytosin i stedet for Cytosin ved bruk av T4 DNA-ligase. Etter å ha fullført hvert trinn, bruk magnetiske perler for å rense DNA. Bruk deretter ZYMO EZ DNA-metyleringsgullsett for å konvertere umetylert Cytosin til Uracil i henhold til instruksjonene. Til slutt, bruk JumpStart Taq DNA-polymerase for PCR-amplifisering, og bruk deretter magnetiske perler for å rense PCR-produktet for å oppnå det endelige biblioteket. Kvalitetskontroll av biblioteket: Etter at byggingen av biblioteket er fullført, utføres foreløpig kvantifisering ved bruk av Qubit2.0, og biblioteket fortynnes til 1 ng/ul. Deretter testes innsettingsstørrelsen til biblioteket med Agilent 2100. Etter at innsatsstørrelsen oppfyller forventningene, kvantifiseres den effektive konsentrasjonen av biblioteket nøyaktig ved hjelp av qPCR-metoden (effektiv konsentrasjon av biblioteket>2nM) for å sikre bibliotekets kvalitet. Online sekvensering: Etter å ha bestått bibliotekdeteksjonen, blir forskjellige biblioteker slått sammen i henhold til kravene til effektiv konsentrasjon og mål offline datavolum, og deretter sekvensert på Illumina Nova-plattformen ved å bruke PE150-sekvenseringsstrategien. Deretter ble kvalitetskontroll av originale offline data, sekvenssammenligning, beregning av metyleringsnivå, identifisering og statistikk over differensiell metyleringsregion (DMR) utført.

Urinproteindeteksjon og bioinformatikkanalyse

1. Proteinseparasjonsteknologi: todimensjonal gelelektroforese (2DE), todimensjonal fluorescensdifferensialelektroforese (2D-DIGE), isoelektrisk fokuseringselektroforese (IEF), væskekromatografi; Multidimensjonal kromatografi (MDC) (inkludert størrelseseksklusjonskromatografi, ionebytterkromatografi, omvendt fase høyytelseskromatografi, hydrofob interaksjonskromatografi, etc.), og multidimensjonal væskekromatografi (MDLC).
2. Proteinidentifikasjonsteknologi: primær massespektrometri: i henhold til forskjellige ionekilder kan den deles inn i matriseassistert laserdesorpsjonioniseringstid for fly massespektrometri (MALDI-TOF-MS) og elektrisk spraymassespektrometri (ESI MS); Sekundær massespektrometri: peptidmassefingeravtrykk (PMF); Ny teknologi: Stabil nuklidsignatur biomassespektrometri (SIAMS).
3. Identifikasjon av proteinpeptidsegmenter: amino- og karboksylendeanalyse, slik som Edman; Massespektrometri, inkludert peptidfragmentmassespektrometri og tandemmassespektrometri.
4. Proteininteraksjoner: Immunutfellingsteknologi, Gjær to hybridsystem, Proteinbrikketeknologi.

Metabolomikk og bioinformatikkanalyse

1. Endometriumvevet ble umiddelbart frosset i flytende nitrogen etter å ha blitt isolert, og deretter ble vevet lagret ved -80 ℃, malt og knust og ekstrahert med kald organisk væske-væske-ekstraksjon. Det må tas hensyn til å unngå metabolske endringer før og under prøvetaking. Utfør metabolomikkanalyse på innsamlede celler, vev, blod og urin.
2. Metabolittekstraksjon: Den mest brukte metoden i metabolittekstraksjon er å utfelle protein med organiske løsningsmidler, og ekstrahere supernatanten gjennom høyhastighetssentrifugering eller ultrarask filtrering for å fjerne proteinutfelling. Konsentrer ved hjelp av frysetørking eller nitrogenblåsing, og løs opp resten i et komplekst løsemiddel.
3. Prøvedeteksjon: Ta en viss mengde oppløst supernatant og bruk Thermo Vanquish UHPLC ultrahøyytelses væskekromatografisystem og Thermo Q Active HF-X massespektrometriplattform for maskindeteksjon.
4. Databehandling: Etter at massespektrometrideteksjonen er fullført, vil offlinedataene (. rå)-filen importeres til søkeprogramvaren for enkel screening av retensjonstid, masseladingsforhold og andre parametere. Deretter, i henhold til retensjonstidsavviket, kvalitetsavvik og signalstyrkeavvik, signal/støyforhold, minimum signalstyrke og annen informasjon for forskjellige prøver, utføres toppjustering og toppekstraksjon. Samtidig kvantifiseres topparealet, og deretter integreres målionene for å forutsi den molekylære formelen og sammenligne med databasen for å få identifisering og kvantitative resultater av dataene. Derfor spiller ikke-målrettede metabolomikkdatabaser og søkeprogramvare en avgjørende rolle i de eksperimentelle resultatene. Imidlertid har LC-MS svært få offentlige databaser, og de fleste av dem er plattformbygde databaser. De mest brukte databasene inkluderer HMDB, METLIN og noen selvbygde biblioteker.
5. Informasjonsanalyse: Hovedkomponentanalyse, differensiell metabolittanalyse, etc.