Der Einfluss der Myomektomie auf die IVF-Ergebnisse

Gruppierungs- und Verblindungsmethode Dies ist eine nationale multizentrische, randomisierte kontrollierte Studie. In allen Zentren findet eine kompetitive Einschreibung statt. Die Studiengruppe erhielt nach der Myomektomie eine IVF und die Kontrollgruppe wurde nach der Routineuntersuchung, wahrscheinlich einschließlich diagnostischer Laparoskopie, zur IVF überwiesen. In dieser Studie wurden 836 Patienten nach dem zentralisierten Zufallssystem zufällig in zwei Gruppen mit 418 Patienten in jeder Gruppe eingeteilt. Es wird eine Zufallssequenz mit einer zufälligen Blockgröße einer Blockgröße von 4 generiert.

Sammlung klinischer Daten und Proben. Daten und Proben werden gemäß dem Case Report Form (CRF)-Formular gesammelt, einschließlich randomisierter Informationen, epidemiologischer und klinischer Informationen. Von besonderem Interesse sind die Auswertung der Unfruchtbarkeitsgeschichte und deren Details, Bildgebungsergebnisse, Eierstockreservierung und chirurgische Befunde, die detailliert dokumentiert werden.

Proben von peripherem Blut, abgeblätterten Gebärmutterhalszellen, abgeblätterten Endometriumzellen, Endometriumbiopsien und Myomen in der Studiengruppe werden für die Multi-Omics-Analyse gesammelt. Der Prozess der Probenentnahme sollte die chirurgische und IVF-Behandlung nicht beeinträchtigen oder verschlechtern.

IVF-Behandlung: Das IVF-Programm sollte detaillierte Aufzeichnungen über den Herunterregulierungsplan, die Anzahl der Zyklen, gefrorene oder frische Blastozysten enthalten. ①Studiengruppe: Die IVF-Behandlung wird 6 Monate nach der Myomektomie durchgeführt und die Patienten sollten nach Beginn der IVF ein Jahr lang nachbeobachtet werden . Wenn das Endometrium während der Myomektomie freigelegt wird, wird die IVF-Behandlung 12 Monate nach der Myomektomie durchgeführt. Es ist zu beachten, dass die Zeit für die postoperative Empfängnisverhütung sowie das Zeitintervall zwischen Myomektomie und IVF erfasst werden sollten.

②Kontrollgruppe: Die IVF-Behandlung wurde unmittelbar nach der entsprechenden Bewertung durchgeführt und ein Jahr nach Beginn der IVF nachuntersucht.

Untersuchung genomischer Merkmale und bioinformatische Analyse

1. Endometrial Receptive Array (ERA) ist ein molekulardiagnostischer Test auf Basis der Microarray-Technologie, der die Endometriumbiopsie anhand der Expression von 238 ausgewählten Genen in rezeptive, prärezeptive oder proliferative Typen unterteilt. ER Map/ER Stage basiert auf der Expression von 184 Genen, die an der mütterlichen Immunantwort im Zusammenhang mit der Endometriumproliferation und der Embryonenimplantation beteiligt sind.
2. Methylierungssequenzierung: Extrahieren Sie DNA aus peripherem Blut, Gewebe und Zellen und quantifizieren Sie die DNA-Konzentration genau mit Qubit 2.0. Die Gesamtmenge der nachgewiesenen DNA sollte nicht weniger als 1 µg betragen. Bibliotheksaufbau: Nach bestandener Probenerkennung wurde 1 µg genomische Proben-DNA mit unmethylierter Lambda-DNA unter Verwendung des Biouptor-Systems gemischt und dann auf eine durchschnittliche Größe von etwa 250 bp fragmentiert. Nach der Fragmentierung wurde die gereinigte, zufällig fragmentierte DNA mit einer Mischung aus T4-DNA-Polymerase, Klenow-Fragment und T4-Polynukleotidkinase repariert, passiviert und phosphoryliert. Das stumpfe DNA-Fragment wurde dann mit Klenow-Fragment (3'-5'exo-) 3'-adenosyliert und dann unter Verwendung von T4-DNA-Ligase mit dem Linker verknüpft, der 5'-Methyl-Cytosin anstelle von Cytosin verbindet. Verwenden Sie nach Abschluss jedes Schritts Magnetkügelchen, um die DNA zu reinigen. Verwenden Sie dann das ZYMO EZ DNA Methylation Gold Kit, um unmethyliertes Cytosin gemäß den Anweisungen in Uracil umzuwandeln. Verwenden Sie abschließend die JumpStart Taq-DNA-Polymerase für die PCR-Amplifikation und reinigen Sie das PCR-Produkt anschließend mit Magnetkügelchen, um die endgültige Bibliothek zu erhalten. Qualitätsprüfung der Bibliothek: Nach Abschluss des Bibliotheksbaus erfolgt eine vorläufige Quantifizierung mit Qubit2.0. und die Bibliothek wird auf 1 ng/ul verdünnt. Anschließend wird die Einfügungsgröße der Bibliothek mit Agilent 2100 getestet. Nachdem die Insertgröße den Erwartungen entspricht, wird die effektive Konzentration der Bibliothek mithilfe der qPCR-Methode genau quantifiziert (effektive Konzentration der Bibliothek > 2 nM), um die Qualität der Bibliothek sicherzustellen. Online-Sequenzierung: Nach bestandener Bibliothekserkennung werden verschiedene Bibliotheken entsprechend der effektiven Konzentration und den Ziel-Offline-Datenvolumenanforderungen gepoolt und dann auf der Illumina Nova-Plattform mithilfe der PE150-Sequenzierungsstrategie sequenziert. Anschließend wurden die Qualitätskontrolle der ursprünglichen Offline-Daten, der Sequenzvergleich, die Berechnung des Methylierungsgrads sowie die Identifizierung und Statistik der differentiellen Methylierungsregion (DMR) durchgeführt.

Nachweis von Urinproteinen und bioinformatische Analyse

1. Proteintrennungstechnologie: zweidimensionale Gelelektrophorese (2DE), zweidimensionale Fluoreszenz-Differentialelektrophorese (2D-DIGE), isoelektrische Fokussierungselektrophorese (IEF), Flüssigkeitschromatographie; Mehrdimensionale Chromatographie (MDC) (einschließlich Größenausschlusschromatographie, Ionenaustauschchromatographie, Umkehrphasen-Hochleistungschromatographie, hydrophobe Interaktionschromatographie usw.) und mehrdimensionale Flüssigkeitschromatographie (MDLC).
2. Proteinidentifizierungstechnologie: Primärmassenspektrometrie: Je nach Ionenquelle kann sie in Matrix-unterstützte Laserdesorptions-Ionisations-Flugzeit-Massenspektrometrie (MALDI-TOF-MS) und Elektrospray-Massenspektrometrie (ESI MS) unterteilt werden. Sekundäre Massenspektrometrie: Peptid-Massen-Fingerprint (PMF); Neue Technologie: Stabile Nuklidsignatur-Biomassenspektrometrie (SIAMS).
3. Identifizierung von Protein-Peptid-Segmenten: Amino- und Carboxyl-Endanalyse, wie Edman; Massenspektrometrie, einschließlich Peptidfragment-Massenspektrometrie und Tandem-Massenspektrometrie.
4. Proteininteraktionen: Immunpräzipitationstechnologie, Hefe-Zwei-Hybridsystem, Protein-Chip-Technologie.

Metabolomik und Bioinformatik-Analyse

1. Das Endometriumgewebe wurde nach der Isolierung sofort in flüssigem Stickstoff eingefroren und dann bei -80 °C gelagert, gemahlen und zerkleinert und mit kalter organischer Flüssig-Flüssig-Extraktion extrahiert. Es muss darauf geachtet werden, Stoffwechselveränderungen vor und während der Probenahme zu vermeiden. Führen Sie eine Metabolomik-Analyse an gesammelten Zellen, Geweben, Blut und Urin durch.
2. Metabolitenextraktion: Die am häufigsten verwendete Methode bei der Metabolitenextraktion besteht darin, Protein mit organischen Lösungsmitteln auszufällen und den Überstand durch Hochgeschwindigkeitszentrifugation oder ultraschnelle Filtration zu extrahieren, um Proteinniederschläge zu entfernen. Durch Gefriertrocknung oder Stickstoffeinblasen aufkonzentrieren und den Rückstand in einem komplexen Lösungsmittel auflösen.
3. Probendetektion: Nehmen Sie eine bestimmte Menge wieder aufgelösten Überstands und verwenden Sie das Ultrahochleistungs-Flüssigkeitschromatographiesystem Thermo Vanquish UHPLC und die Massenspektrometrieplattform Thermo Q Active HF-X für die maschinelle Detektion.
4. Datenverarbeitung: Nachdem die massenspektrometrische Erkennung abgeschlossen ist, werden die Offline-Daten (. Die RAW-Datei wird in die Suchsoftware importiert, um die Retentionszeit, das Massenladungsverhältnis und andere Parameter einfach zu überprüfen. Anschließend werden entsprechend der Retentionszeitabweichung, der Qualitätsabweichung und der Signalstärkeabweichung, dem Signal-Rausch-Verhältnis, der minimalen Signalstärke und anderen Informationen verschiedener Proben eine Peakausrichtung und Peakextraktion durchgeführt. Gleichzeitig wird die Peakfläche quantifiziert und anschließend die Zielionen integriert, um die Molekularformel vorherzusagen und mit der Datenbank zu vergleichen, um die Identifizierung und quantitative Ergebnisse der Daten zu erhalten. Daher spielen nicht zielgerichtete Metabolomics-Datenbanken und Suchsoftware eine entscheidende Rolle für die experimentellen Ergebnisse. LC-MS verfügt jedoch nur über sehr wenige öffentliche Datenbanken, und die meisten davon sind plattformbasierte Datenbanken. Zu den häufig verwendeten Datenbanken gehören HMDB, METLIN und einige selbst erstellte Bibliotheken.
5. Informationsanalyse: Hauptkomponentenanalyse, Differenzialmetabolitenanalyse usw.