Vliv myomektomie na výsledky IVF

Metoda seskupování a zaslepení Jedná se o národní multicentrickou, randomizovanou kontrolovanou studii. Soutěžní zápis se provádí mezi všemi středisky. Studijní skupina podstoupila IVF po myomektomii a kontrolní skupina byla nasměrována k IVF po rutinním vyšetření, pravděpodobně včetně diagnostické laparoskopie. V této studii bylo 836 pacientů náhodně rozděleno do 2 skupin se 418 pacienty v každé skupině podle centralizovaného náhodného systému. Náhodná sekvence je generována s náhodnou velikostí bloku o velikosti 4.

Sběr klinických dat a vzorků Data a vzorky jsou shromažďovány podle formuláře Case Report Form (CRF), včetně randomizovaných informací, epidemiologických a klinických informací. Vyhodnocení anamnézy neplodnosti a podrobností, výsledky zobrazení, rezervace vaječníků a chirurgické nálezy jsou zvláště zajímavé a podrobně zaznamenané.

Vzorky periferní krve, cervikálních exfoliovaných buněk, endometriálních exfoliovaných buněk, endometriální biopsie a myomu ve studijní skupině jsou odebírány pro multi-omickou analýzu. Proces odběru vzorku by neměl narušovat nebo zhoršovat chirurgickou a IVF léčbu.

Léčba IVF: režim IVF by měl obsahovat podrobné záznamy plánu downregulace, počtu cyklů, zmrazených nebo čerstvých blastocyst, ①Studijní skupina: Léčba IVF se provádí 6 měsíců po myomektomii a pacienti by měli být sledováni po dobu 1 roku po zahájení IVF . Pokud je endometrium obnaženo během myomektomie, léčba IVF se provádí 12 měsíců po myomektomii. Je třeba poznamenat, že je třeba zaznamenat dobu pooperační antikoncepce a také časový interval mezi myomektomií a IVF.

②Kontrolní skupina: Léčba IVF byla provedena okamžitě po příslušném vyhodnocení a sledování po dobu 1 roku po zahájení IVF.

Zkoumání genomických rysů a bioinformatická analýza

1. Endometrial receptive array (ERA) je molekulární diagnostický test založený na technologii microarray, který rozděluje endometriální biopsii na receptivní, prereceptivní nebo proliferativní typy na základě exprese 238 vybraných genů. ER Map/ER Stage je založena na expresi 184 genů zapojených do mateřské imunitní odpovědi související s proliferací endometria a implantací embrya.
2. Methylační sekvenování: Extrahujte DNA související s periferní krví, tkání a buňkami a přesně kvantifikujte koncentraci DNA pomocí Qubit 2.0. Celkové množství detekované DNA by nemělo být menší než 1 ug. Konstrukce knihovny: Po průchodu detekcí vzorku byl 1 ug vzorku genomové DNA smíchán s nemethylovanou lambda DNA pomocí systému Biouptor a poté fragmentován na průměrnou velikost přibližně 250 bp. Po fragmentaci byla purifikovaná náhodně fragmentovaná DNA opravena, pasivována a fosforylována směsí T4 DNA polymerázy, Klenowova fragmentu a T4 polynukleotidkinázy. Tupý fragment DNA byl poté 3'adenosylován Klenowovým fragmentem (3'-5'exo-) a poté spojen s linkerem spojujícím 5'-methylcytosin místo cytosinu pomocí T4 DNA ligázy. Po dokončení každého kroku použijte magnetické kuličky k čištění DNA. Poté pomocí sady ZYMO EZ DNA methylation gold kit převeďte nemethylovaný cytosin na uracil podle pokynů. Nakonec použijte JumpStart Taq DNA polymerázu pro PCR amplifikaci a poté použijte magnetické kuličky k čištění produktu PCR, abyste získali konečnou knihovnu. Kontrola kvality knihovny: Po dokončení výstavby knihovny se provádí předběžná kvantifikace pomocí Qubit2.0, a knihovna se zředí na 1 ng/ul. Poté se pomocí Agilent 2100 otestuje velikost vložky knihovny. Poté, co velikost inzertu splní očekávání, je účinná koncentrace knihovny přesně kvantifikována pomocí metody qPCR (efektivní koncentrace knihovny > 2 nM), aby se zajistila kvalita knihovny. Online sekvenování: Po průchodu detekcí knihovny jsou různé knihovny sloučeny podle efektivní koncentrace a požadavků na cílový objem offline dat a poté sekvenovány na platformě Illumina Nova pomocí strategie sekvenování PE150. Poté byla provedena kontrola kvality původních offline dat, porovnání sekvencí, výpočet úrovně metylace, identifikace a statistika oblasti diferenciální metylace (DMR).

Detekce bílkovin v moči a bioinformatická analýza

1. Technologie separace proteinů: dvourozměrná gelová elektroforéza (2DE), dvourozměrná fluorescenční diferenciální elektroforéza (2D-DIGE), izoelektrická fokusační elektroforéza (IEF), kapalinová chromatografie; Vícerozměrná chromatografie (MDC) (včetně vylučovací chromatografie, iontoměničové chromatografie, vysokoúčinné chromatografie na reverzní fázi, chromatografie s hydrofobní interakcí atd.) a vícerozměrné kapalinové chromatografie (MDLC).
2. Technologie identifikace proteinů: primární hmotnostní spektrometrie: podle různých iontových zdrojů ji lze rozdělit na hmotnostní spektrometrii letu s laserovou desorpcí a ionizací za pomoci matrice (MALDI-TOF-MS) a hmotnostní spektrometrii s elektrickým rozprašováním (ESI MS); Sekundární hmotnostní spektrometrie: hmotnostní otisk peptidu (PMF); Nová technologie: Bio hmotnostní spektrometrie se stabilním podpisem nuklidů (SIAMS).
3. Identifikace proteinových peptidových segmentů: analýza amino a karboxylových konců, jako je Edman; Hmotnostní spektrometrie, včetně hmotnostní spektrometrie peptidových fragmentů a tandemové hmotnostní spektrometrie.
4. Proteinové interakce: Imunoprecipitační technologie, kvasinkový dvouhybridní systém, technologie proteinových čipů.

Metabolomická a bioinformatická analýza

1. Tkáň endometria byla po izolaci okamžitě zmražena v kapalném dusíku a poté byla tkáň skladována při -80 °C, rozemleta a rozdrcena a extrahována studenou organickou extrakcí kapalina-kapalina. Před odběrem a během odběru je třeba věnovat pozornost tomu, aby se zabránilo metabolickým změnám. Proveďte metabolomickou analýzu odebraných buněk, tkání, krve a moči.
2. Extrakce metabolitů: Nejběžněji používanou metodou při extrakci metabolitů je vysrážení proteinu organickými rozpouštědly a extrakce supernatantu pomocí vysokorychlostní centrifugace nebo ultrarychlé filtrace, aby se odstranila precipitace proteinu. Koncentruje se pomocí lyofilizace nebo profukování dusíkem a zbytek se rozpustí v komplexním rozpouštědle.
3. Detekce vzorku: Odeberte určité množství znovu rozpuštěného supernatantu a pro strojní detekci použijte Thermo Vanquish UHPLC ultra-výkonný systém kapalinové chromatografie a platformu hmotnostní spektrometrie Thermo Q Active HF-X.
4. Zpracování dat: Po dokončení detekce hmotnostní spektrometrií se offline data (. raw) se importuje do vyhledávacího softwaru pro jednoduché prověření retenčního času, poměru hmotnostního náboje a dalších parametrů. Poté se podle odchylky retenčního času, odchylky kvality a odchylky síly signálu, poměru signálu k šumu, minimální síly signálu a dalších informací o různých vzorcích provede zarovnání píku a extrakce píku. Současně je kvantifikována plocha píku a poté jsou integrovány cílové ionty, aby se předpověděl molekulární vzorec a porovnaly se s databází, aby se získaly identifikační a kvantitativní výsledky dat. Rozhodující roli ve výsledcích experimentů proto hrají necílené metabolomické databáze a vyhledávací software. LC-MS má však velmi málo veřejných databází a většina z nich jsou databáze postavené na platformě. Mezi běžně používané databáze patří HMDB, METLIN a některé vlastní knihovny.
5. Informační analýza: Analýza hlavních složek, diferenciální analýza metabolitů atd.