De impact van myomectomie op IVF-resultaten

Groeperings- en blinderingsmethode Dit is een landelijke, gerandomiseerde, gecontroleerde studie in meerdere centra. Competitieve inschrijving wordt uitgevoerd tussen alle centra. De onderzoeksgroep kreeg IVF na myomectomie en de controlegroep werd na de routine-evaluatie doorverwezen naar IVF, waarschijnlijk inclusief diagnostische laparoscopie. In deze studie werden 836 patiënten willekeurig verdeeld in 2 groepen met 418 patiënten in elke groep volgens het gecentraliseerde willekeurige systeem. Er wordt een willekeurige reeks gegenereerd met een willekeurige blokgrootte van een blokgrootte van 4.

Verzameling van klinische gegevens en monsters Gegevens en monsters worden verzameld volgens het Case Report Form (CRF)-formulier, inclusief gerandomiseerde informatie, epidemiologische en klinische informatie. Evaluatie van onvruchtbaarheidsgeschiedenis en -details, beeldvormingsresultaten, ovariële reservering en chirurgische bevindingen zijn van bijzonder belang en worden gedetailleerd vastgelegd.

Monsters van perifeer bloed, geëxfolieerde cellen van de baarmoederhals, geëxfolieerde cellen van het endometrium, endometriumbiopsie en myoom in de onderzoeksgroep worden verzameld voor multi-omics-analyse. Het proces van het verzamelen van monsters mag de chirurgische en IVF-behandeling niet verstoren of verslechteren.

IVF-behandeling: het IVF-regime moet gedetailleerde verslagen bevatten van het downregulatieplan, het aantal cycli, bevroren of verse blastocysten, ①Studiegroep: IVF-behandeling wordt 6 maanden na myomectomie uitgevoerd en patiënten moeten gedurende 1 jaar na de start van IVF worden gevolgd . Als het endometrium wordt blootgesteld tijdens myomectoy, wordt de IVF-behandeling 12 maanden na myomectomie uitgevoerd. Opgemerkt moet worden dat de tijd voor postoperatieve anticonceptie moet worden geregistreerd, evenals het tijdsinterval tussen myomectomie en IVF.

②Controlegroep: IVF-behandeling werd uitgevoerd onmiddellijk na relevante evaluatie en follow-up gedurende 1 jaar na de start van IVF.

Genomisch kenmerkonderzoek en bioinformatica-analyse

1. Endometrial Receptive Array (ERA) is een moleculaire diagnostische test op basis van microarray-technologie, die endometriumbiopsie verdeelt in receptieve, pre-receptieve of proliferatieve typen op basis van de expressie van 238 geselecteerde genen. ER Map/ER Stage is gebaseerd op de expressie van 184 genen die betrokken zijn bij de immuunrespons van de moeder gerelateerd aan endometriumproliferatie en embryo-implantatie.
2. Methylatie-sequencing: extraheer DNA gerelateerd aan perifeer bloed, weefsel en cellen en kwantificeer nauwkeurig de DNA-concentratie met behulp van Qubit 2.0. De totale hoeveelheid gedetecteerd DNA mag niet minder zijn dan 1 µg. Bibliotheekconstructie: Nadat de monsterdetectie was doorstaan, werd 1 µg monster genomisch DNA gemengd met niet-gemethyleerd lambda-DNA met behulp van het Biouptor-systeem, en vervolgens gefragmenteerd tot een gemiddelde grootte van ongeveer 250 bp. Na fragmentatie werd het gezuiverde willekeurig gefragmenteerde DNA vervolgens gerepareerd, gepassiveerd en gefosforyleerd met een mengsel van T4 DNA-polymerase, Klenow-fragment en T4-polynucleotidekinase. Het stompe DNA-fragment werd vervolgens 3'-geadenosyleerd met Klenow-fragment (3'-5'exo-) en vervolgens gekoppeld aan de linker die 5'-methylcytosine in plaats van cytosine verbindt met behulp van T4 DNA-ligase. Gebruik na het voltooien van elke stap magnetische kralen om DNA te zuiveren. Gebruik vervolgens de ZYMO EZ DNA-methyleringsgoudkit om ongemethyleerd cytosine volgens de instructies om te zetten in Uracil. Gebruik ten slotte JumpStart Taq DNA-polymerase voor PCR-amplificatie en gebruik vervolgens magnetische korrels om het PCR-product te zuiveren om de uiteindelijke bibliotheek te verkrijgen. Bibliotheekkwaliteitsinspectie: nadat de constructie van de bibliotheek is voltooid, wordt voorlopige kwantificering uitgevoerd met behulp van Qubit2.0, en de bibliotheek wordt verdund tot 1 ng/ul. Vervolgens wordt de insert-grootte van de bibliotheek getest met behulp van Agilent 2100. Nadat de grootte van de insert aan de verwachtingen voldoet, wordt de effectieve concentratie van de bibliotheek nauwkeurig gekwantificeerd met behulp van de qPCR-methode (effectieve concentratie van de bibliotheek>2nM) om de kwaliteit van de bibliotheek te waarborgen. Online sequencing: nadat de bibliotheekdetectie is doorstaan, worden verschillende bibliotheken gepoold op basis van de effectieve concentratie en doelvereisten voor offline datavolume, en vervolgens gesequenced op het Illumina Nova-platform met behulp van de PE150-sequencingstrategie. Daarna werden kwaliteitscontrole van originele offline gegevens, sequentievergelijking, berekening van methylatieniveau, identificatie en statistieken van differentiële methylatieregio (DMR) uitgevoerd.

Urine-eiwitdetectie en bio-informatica-analyse

1. Eiwitscheidingstechnologie: tweedimensionale gelelektroforese (2DE), tweedimensionale differentiële fluorescentie-elektroforese (2D-DIGE), iso-elektrische focusseringselektroforese (IEF), vloeistofchromatografie; Multidimensionale chromatografie (MDC) (inclusief grootte-uitsluitingschromatografie, ionenuitwisselingschromatografie, omgekeerde fase hogedrukchromatografie, hydrofobe interactiechromatografie, enz.) en multidimensionale vloeistofchromatografie (MDLC).
2. Eiwitidentificatietechnologie: primaire massaspectrometrie: volgens verschillende ionenbronnen kan het worden onderverdeeld in matrix-ondersteunde laserdesorptie-ionisatie vluchttijd massaspectrometrie (MALDI-TOF-MS) en elektrische spray-massaspectrometrie (ESI MS); Secundaire massaspectrometrie: peptide massavingerafdruk (PMF); Nieuwe technologie: Stabiele nuclidesignatuurbiomassaspectrometrie (SIAMS).
3. Identificatie van eiwitpeptidesegmenten: analyse van amino- en carboxyluiteinden, zoals Edman; Massaspectrometrie, inclusief massaspectrometrie van peptidefragmenten en tandemmassaspectrometrie.
4. Eiwitinteracties: immunoprecipitatietechnologie, gist twee hybride systeem, eiwitchiptechnologie.

Metabolomica en bio-informatica-analyse

1. Het endometriumweefsel werd na isolatie onmiddellijk ingevroren in vloeibare stikstof en vervolgens werd het weefsel bij -80 ℃ bewaard, gemalen en geplet en geëxtraheerd met koude organische vloeistof-vloeistofextractie. Er moet aandacht worden besteed aan het vermijden van metabolische veranderingen voor en tijdens de bemonstering. Voer metabolomics-analyse uit op verzamelde cellen, weefsels, bloed en urine.
2. Metabolietextractie: De meest gebruikte methode bij metabolietextractie is het neerslaan van eiwitten met organische oplosmiddelen en het supernatant extraheren door middel van hogesnelheidscentrifugeren of ultrasnelle filtratie om eiwitprecipitatie te verwijderen. Concentreer met behulp van vriesdrogen of stikstofblazen en los het residu op in een complex oplosmiddel.
3. Monsterdetectie: Neem een ​​bepaalde hoeveelheid opnieuw opgeloste supernatant en gebruik Thermo Vanquish UHPLC ultra-high performance vloeistofchromatografiesysteem en Thermo Q Active HF-X massaspectrometrieplatform voor machinale detectie.
4. Gegevensverwerking: Nadat de massaspectrometrische detectie is voltooid, worden de offline gegevens (. raw)-bestand wordt geïmporteerd in de zoeksoftware voor eenvoudige screening van retentietijd, massaladingsverhouding en andere parameters. Vervolgens worden, volgens de retentietijdafwijking, kwaliteitsafwijking en signaalsterkteafwijking, signaal-ruisverhouding, minimale signaalsterkte en andere informatie van verschillende monsters, piekuitlijning en piekextractie uitgevoerd. Tegelijkertijd wordt het piekgebied gekwantificeerd en vervolgens worden de doelionen geïntegreerd om de moleculaire formule te voorspellen en te vergelijken met de database om de identificatie en kwantitatieve resultaten van de gegevens te verkrijgen. Daarom spelen niet-gerichte metabolomics-databases en zoeksoftware een doorslaggevende rol in de experimentele resultaten. LC-MS heeft echter maar heel weinig openbare databases en de meeste zijn op het platform gebouwde databases. De meest gebruikte databases zijn HMDB, METLIN en enkele zelfgebouwde bibliotheken.
5. Informatieanalyse: analyse van hoofdcomponenten, analyse van differentiële metabolieten, enz.