Virkningen af ​​myomektomi på IVF-resultater

Gruppering og blindingsmetode Dette er en national multicenter, randomiseret kontrolleret undersøgelse. Konkurrencemæssig tilmelding udføres blandt alle centre. Studiegruppen modtog IVF efter myomektomi, og kontrolgruppen blev henvist til IVF efter den rutinemæssige evaluering, sandsynligvis inklusive diagnostisk laparoskopi. I denne undersøgelse blev 836 patienter tilfældigt opdelt i 2 grupper med 418 patienter i hver gruppe i henhold til centraliseret tilfældig system. En tilfældig sekvens genereres med en tilfældig blokstørrelse på en blokstørrelse på 4.

Indsamling af kliniske data og prøver Data og prøver indsamles i henhold til Case Report Form (CRF)-formularen, herunder randomiseret information, epidemiologisk og klinisk information. Evaluering af infertilitetshistorie og detaljer, billeddiagnostiske resultater, ovariereservation og kirurgiske fund er af særlig interesse og detaljeret registreret.

Prøver af perifert blod, cervikale eksfolierede celler, endometrieeksfolierede celler, endometriebiopsi og myom i undersøgelsesgruppen indsamles til multi-omics-analyse. Processen med prøveindsamling bør ikke forstyrre eller forringe den kirurgiske og IVF-behandling.

IVF-behandling: IVF-kuren bør omfatte detaljerede registreringer af nedreguleringsplanen, antal cyklusser, frosne eller friske blastocyster, ①Undersøgelsesgruppe: IVF-behandling udføres 6 måneder efter myomektomi, og patienterne bør følges op i 1 år efter starten af ​​IVF . Hvis endometriet blotlægges under myomektomi, udføres IVF-behandling 12 måneder efter myomektomi. Det skal bemærkes, at tiden for postoperativ prævention skal registreres, og også tidsintervallet mellem myomektomi og IVF.

②Kontrolgruppe: IVF-behandling blev udført umiddelbart efter relevant evaluering og opfølgning i 1 år efter start af IVF.

Genomisk trækundersøgelse og bioinformatikanalyse

1. Endometrial receptive array (ERA) er en molekylær diagnostisk test baseret på mikroarray-teknologi, som opdeler endometriebiopsi i receptive, præ-receptive eller proliferative typer baseret på ekspressionen af ​​238 udvalgte gener. ER Map/ER Stage er baseret på ekspressionen af ​​184 gener involveret i moderens immunrespons relateret til endometrieproliferation og embryoimplantation.
2. Methyleringssekventering: Udtræk DNA relateret til perifert blod, væv og celler, og kvantificer DNA-koncentrationen nøjagtigt ved hjælp af Qubit 2.0. Den samlede mængde påvist DNA bør ikke være mindre end 1 ug. Bibliotekskonstruktion: Efter at have bestået prøvedetekteringen blev 1 µg genomisk prøve-DNA blandet med umethyleret lambda-DNA ved anvendelse af Biouptor-systemet og derefter fragmenteret til en gennemsnitlig størrelse på ca. 250 bp. Efter fragmentering blev det oprensede tilfældige fragmenterede DNA derefter repareret, passiveret og phosphoryleret med en blanding af T4 DNA-polymerase, Klenow-fragment og T4-polynukleotidkinase. Det stumpe DNA-fragment blev derefter 3'adenosyleret med Klenow-fragment (3'-5'exo-) og derefter koblet til linkeren, der forbinder 5'-methylcytosin i stedet for Cytosin under anvendelse af T4 DNA-ligase. Efter at have gennemført hvert trin, brug magnetiske perler til at rense DNA. Brug derefter ZYMO EZ DNA-methyleringsguldsæt til at konvertere umethyleret cytosin til Uracil i henhold til instruktionerne. Til sidst skal du bruge JumpStart Taq DNA-polymerase til PCR-amplifikation, og derefter bruge magnetiske perler til at oprense PCR-produktet for at opnå det endelige bibliotek. Bibliotekskvalitetsinspektion: Efter at byggeriet af biblioteket er afsluttet, udføres foreløbig kvantificering ved brug af Qubit2.0, og biblioteket fortyndes til 1 ng/ul. Derefter testes bibliotekets indsatsstørrelse ved hjælp af Agilent 2100. Efter at insertstørrelsen lever op til forventningerne, kvantificeres den effektive koncentration af biblioteket nøjagtigt ved hjælp af qPCR-metoden (effektiv koncentration af biblioteket>2nM) for at sikre bibliotekets kvalitet. Online-sekventering: Efter at have bestået biblioteksdetektionen, samles forskellige biblioteker i henhold til de effektive koncentrations- og målkrav til offlinedatavolumen og sekventeres derefter på Illumina Nova-platformen ved hjælp af PE150-sekventeringsstrategien. Derefter blev der udført kvalitetskontrol af originale offline data, sekvenssammenligning, beregning af methyleringsniveau, identifikation og statistik af differentiel methyleringsregion (DMR).

Urinproteinpåvisning og bioinformatikanalyse

1. Proteinseparationsteknologi: todimensionel gelelektroforese (2DE), todimensionel fluorescens differentiel elektroforese (2D-DIGE), isoelektrisk fokuseringselektroforese (IEF), væskekromatografi; Multidimensionel kromatografi (MDC) (herunder størrelsesudelukkelseskromatografi, ionbytningskromatografi, omvendt fase højtydende kromatografi, hydrofob interaktionschromatografi osv.) og multidimensionel væskekromatografi (MDLC).
2. Proteinidentifikationsteknologi: primær massespektrometri: ifølge forskellige ionkilder kan den opdeles i matrixassisteret laserdesorptionsioniseringstid for flyvemassespektrometri (MALDI-TOF-MS) og elektrisk spraymassespektrometri (ESI MS); Sekundær massespektrometri: peptidmassefingeraftryk (PMF); Ny teknologi: Stabil nuklidsignatur biomassespektrometri (SIAMS).
3. Identifikation af proteinpeptidsegmenter: amino- og carboxylendeanalyse, såsom Edman; Massespektrometri, herunder peptidfragmentmassespektrometri og tandemmassespektrometri.
4. Proteininteraktioner: Immunpræcipitationsteknologi, Gær to hybridsystem, Proteinchipteknologi.

Metabolomik og bioinformatik analyse

1. Endometriumvævet blev straks frosset i flydende nitrogen efter at være blevet isoleret, og derefter blev vævet opbevaret ved -80 ℃, formalet og knust og ekstraheret med kold organisk væske-væske-ekstraktion. Man skal være opmærksom på at undgå metaboliske ændringer før og under prøvetagning. Udfør metabolomiske analyser på indsamlede celler, væv, blod og urin.
2. Metabolitekstraktion: Den mest almindeligt anvendte metode til metabolitekstraktion er at udfælde protein med organiske opløsningsmidler og ekstrahere supernatanten gennem højhastighedscentrifugering eller ultrahurtig filtrering for at fjerne proteinudfældning. Koncentrer ved hjælp af frysetørring eller nitrogenblæsning, og opløs resten i et komplekst opløsningsmiddel.
3. Prøvedetektering: Tag en vis mængde genopløst supernatant og brug Thermo Vanquish UHPLC ultrahøjtydende væskekromatografisystem og Thermo Q Active HF-X massespektrometriplatform til maskindetektering.
4. Databehandling: Når massespektrometridetektionen er afsluttet, vil offlinedataene (. rå)-fil importeres til søgesoftwaren for simpel screening af retentionstid, masseladningsforhold og andre parametre. I henhold til retentionstidsafvigelsen, kvalitetsafvigelse og signalstyrkeafvigelse, signal til støjforhold, minimum signalstyrke og anden information om forskellige prøver, udføres topjustering og topekstraktion. Samtidig kvantificeres toparealet, og derefter integreres målionerne for at forudsige den molekylære formel og sammenligne med databasen for at opnå identifikation og kvantitative resultater af dataene. Derfor spiller ikke-målrettede metabolomiske databaser og søgesoftware en afgørende rolle i de eksperimentelle resultater. LC-MS har dog meget få offentlige databaser, og de fleste af dem er platformbyggede databaser. De almindeligt anvendte databaser inkluderer HMDB, METLIN og nogle selvbyggede biblioteker.
5. Informationsanalyse: Principal komponentanalyse, differentiel metabolitanalyse mv.