Влияние миомэктомии на исходы ЭКО

Метод группировки и ослепления Это национальное многоцентровое рандомизированное контролируемое исследование. Конкурсный набор осуществляется среди всех центров. Исследуемая группа получила ЭКО после миомэктомии, а контрольная группа была направлена ​​на ЭКО после планового обследования, возможно, включая диагностическую лапароскопию. В этом исследовании 836 пациентов были случайным образом разделены на 2 группы по 418 пациентов в каждой группе по централизованной случайной системе. Случайная последовательность генерируется со случайным размером блока размером 4.

Сбор клинических данных и образцов Данные и образцы собирают в соответствии с формой отчета о болезни (CRF), включая рандомизированную информацию, эпидемиологическую и клиническую информацию. Оценка анамнеза и деталей бесплодия, результаты визуализации, сохранение яичников и хирургические данные представляют особый интерес и подробно регистрируются.

Образцы периферической крови, отслоившихся клеток шейки матки, отслоившихся клеток эндометрия, биопсии эндометрия и миомы в исследуемой группе собирают для мультиомического анализа. Процесс сбора образцов не должен мешать или ухудшать хирургическое лечение и лечение ЭКО.

Лечение ЭКО: схема ЭКО должна включать подробные записи плана снижения регуляции, количества циклов, замороженных или свежих бластоцист. . Если во время миомэктомии обнажается эндометрий, лечение ЭКО проводят через 12 месяцев после миомэктомии. Следует отметить, что следует фиксировать время послеоперационной контрацепции, а также временной интервал между миомэктомией и ЭКО.

②Контрольная группа: лечение ЭКО проводилось сразу после соответствующей оценки и последующее наблюдение в течение 1 года после начала ЭКО.

Исследование геномных признаков и биоинформатический анализ

1. Рецепторная матрица эндометрия (ERA) — это молекулярный диагностический тест, основанный на технологии микрочипов, который разделяет биопсию эндометрия на рецептивную, пререцептивную или пролиферативную на основе экспрессии 238 выбранных генов. ER Map/ER Stage основан на экспрессии 184 генов, участвующих в материнском иммунном ответе, связанном с пролиферацией эндометрия и имплантацией эмбриона.
2. Секвенирование метилирования: Извлеките ДНК, относящуюся к периферической крови, тканям и клеткам, и точно определите концентрацию ДНК с помощью Qubit 2.0. Общее количество обнаруживаемой ДНК должно быть не менее 1 мкг. Создание библиотеки: после прохождения образца детекции 1 мкг геномной ДНК образца смешивали с неметилированной лямбда-ДНК с использованием системы Biouptor, а затем фрагментировали до среднего размера примерно 250 п.н. После фрагментации очищенную случайно фрагментированную ДНК репарировали, пассивировали и фосфорилировали смесью ДНК-полимеразы Т4, фрагмента Кленова и полинуклеотидкиназы Т4. Затем тупой фрагмент ДНК был 3'-аденозилирован фрагментом Кленова (3'-5'экзо-), а затем присоединен к линкеру, соединяющему 5'-метилцитозин вместо цитозина, с использованием ДНК-лигазы Т4. После завершения каждого шага используйте магнитные шарики для очистки ДНК. Затем используйте золотой набор для метилирования ДНК ZYMO EZ, чтобы преобразовать неметилированный цитозин в урацил в соответствии с инструкциями. Наконец, используйте ДНК-полимеразу JumpStart Taq для ПЦР-амплификации, а затем используйте магнитные шарики для очистки продукта ПЦР, чтобы получить окончательную библиотеку. Проверка качества библиотеки: после завершения строительства библиотеки проводится предварительная количественная оценка с использованием Qubit2.0, и библиотеку разбавляют до 1 нг/мкл. Затем размер вставки библиотеки проверяется с помощью Agilent 2100. После того, как размер вставки соответствует ожиданиям, эффективная концентрация библиотеки точно определяется количественно с использованием метода количественной ПЦР (эффективная концентрация библиотеки > 2 нМ) для обеспечения качества библиотеки. Онлайн-секвенирование: после прохождения проверки библиотеки различные библиотеки объединяются в пул в соответствии с требованиями к эффективной концентрации и целевому объему данных в автономном режиме, а затем секвенируются на платформе Illumina Nova с использованием стратегии секвенирования PE150. После этого проводили контроль качества исходных офлайн-данных, сравнение последовательностей, расчет уровня метилирования, идентификацию и статистику области дифференциального метилирования (DMR).

Обнаружение белка в моче и биоинформатический анализ

1. Технология разделения белков: двумерный гель-электрофорез (2DE), двумерный дифференциальный флуоресцентный электрофорез (2D-DIGE), изоэлектрофокусный электрофорез (IEF), жидкостная хроматография; Многомерная хроматография (МДХ) (включая эксклюзионную хроматографию, ионообменную хроматографию, высокоэффективную хроматографию с обращенной фазой, гидрофобную хроматографию и т. д.) и многомерную жидкостную хроматографию (МДХ).
2. Технология идентификации белков: первичная масс-спектрометрия: в зависимости от различных источников ионов ее можно разделить на времяпролетную масс-спектрометрию с лазерной десорбцией и ионизацией с помощью матрицы (MALDI-TOF-MS) и масс-спектрометрию с электрическим распылением (ESI MS); Вторичная масс-спектрометрия: масс-отпечаток пептида (PMF); Новая технология: биомасс-спектрометрия сигнатуры стабильных нуклидов (SIAMS).
3. Идентификация белково-пептидных сегментов: анализ амино- и карбоксильных концов, например, по Эдману; Масс-спектрометрия, включая масс-спектрометрию пептидных фрагментов и тандемную масс-спектрометрию.
4. Белковые взаимодействия: технология иммунопреципитации, двухгибридная система дрожжей, технология белковых чипов.

Метаболомика и биоинформатический анализ

1. Ткань эндометрия была немедленно заморожена в жидком азоте после выделения, а затем ткань хранилась при температуре -80 ℃, измельчалась и измельчалась, а затем экстрагировалась с помощью холодной органической жидкостно-жидкостной экстракции. Следует обратить внимание на то, чтобы избежать метаболических изменений до и во время отбора проб. Выполните метаболический анализ собранных клеток, тканей, крови и мочи.
2. Экстракция метаболитов: наиболее часто используемый метод экстракции метаболитов заключается в осаждении белка органическими растворителями и извлечении надосадочной жидкости с помощью высокоскоростного центрифугирования или сверхбыстрой фильтрации для удаления белкового осадка. Концентрируют, используя сушку вымораживанием или продувку азотом, и растворяют остаток в сложном растворителе.
3. Обнаружение образца: возьмите определенное количество повторно растворенного супернатанта и используйте сверхвысокоэффективную систему жидкостной хроматографии Thermo Vanquish UHPLC и платформу масс-спектрометра Thermo Q Active HF-X для машинного обнаружения.
4. Обработка данных: после завершения масс-спектрометрического обнаружения автономные данные (. raw) файл импортируется в поисковую программу для простой проверки времени удерживания, коэффициента массового заряда и других параметров. Затем, в соответствии с отклонением времени удерживания, отклонением качества и отклонением мощности сигнала, отношением сигнал-шум, минимальной силой сигнала и другой информацией о различных образцах, выполняется выравнивание пиков и извлечение пиков. В то же время площадь пика определяется количественно, а затем целевые ионы интегрируются для прогнозирования молекулярной формулы и сравнения с базой данных для получения идентификационных и количественных результатов данных. Таким образом, нецелевые базы данных метаболомики и поисковое программное обеспечение играют решающую роль в экспериментальных результатах. Однако у LC-MS очень мало общедоступных баз данных, и большинство из них являются базами данных, созданными платформой. Обычно используемые базы данных включают HMDB, METLIN и некоторые самостоятельно созданные библиотеки.
5. Анализ информации: анализ основных компонентов, дифференциальный анализ метаболитов и т. д.