子宫肌瘤切除术对 IVF 结果的影响

分组和盲法这是一项全国性多中心、随机对照研究。 所有中心之间都进行竞争性招生。 研究组在子宫肌瘤切除术后接受 IVF，对照组在常规评估（可能包括诊断性腹腔镜检查）后接受 IVF。 本研究将836例患者按照集中随机法随机分为2组，每组418例。 使用块大小为 4 的随机块大小生成随机序列。

临床数据和样本的收集 根据病例报告表（CRF）形式收集数据和样本，包括随机信息、流行病学和临床信息。 对不孕史和细节、影像结果、卵巢保留和手术结果的评估特别感兴趣并详细记录。

收集研究组的外周血、宫颈脱落细胞、子宫内膜脱落细胞、子宫内膜活检和肌瘤样本进行多组学分析。 样本采集过程不应干扰或恶化手术和体外受精治疗。

IVF治疗：IVF方案应包括下调计划、周期数、冷冻或新鲜囊胚等详细记录，①研究组：子宫肌瘤切除术后6个月进行IVF治疗，IVF开始后随访1年。 如果子宫内膜在子宫肌瘤切除术期间暴露，则在子宫肌瘤切除术后 12 个月进行 IVF 治疗。 需要注意的是，应记录术后避孕的时间，以及子宫肌瘤切除术与IVF之间的时间间隔。

②对照组：相关评估后立即进行IVF治疗，并在IVF开始后随访1年。

基因组特征检查和生物信息学分析

1. 子宫内膜感受性阵列（ERA）是一种基于微阵列技术的分子诊断测试，它根据238个选定基因的表达情况将子宫内膜活检分为感受性、预感受性或增殖性类型。 ER Map/ER Stage 基于 184 个基因的表达，这些基因涉及与子宫内膜增殖和胚胎植入相关的母体免疫反应。
2. 甲基化测序：提取外周血、组织、细胞相关DNA，利用Qubit 2.0准确定量DNA浓度。 检测到的DNA总量不应少于1ug。 文库构建：样品检测通过后，使用Biouptor系统将1μg样品基因组DNA与未甲基化的lambda DNA混合，然后片段化至平均大小约250bp。 片段化后，纯化的随机片段化 DNA 用 T4 DNA 聚合酶、Klenow 片段和 T4 多核苷酸激酶的混合物进行修复、钝化和磷酸化。 然后用Klenow片段(3'-5'外-)对平端DNA片段进行3'腺苷化，然后使用T4 DNA连接酶连接至连接5'-甲基胞嘧啶而不是胞嘧啶的接头。 完成每个步骤后，使用磁珠纯化 DNA。 然后，使用ZYMO EZ DNA甲基化金试剂盒按照说明将未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶。 最后使用JumpStart Taq DNA聚合酶进行PCR扩增，然后使用磁珠纯化PCR产物，得到最终的文库。 文库质检：文库建设完成后，利用Qubit2.0进行初步量化， 并将文库稀释至1ng/ul。 然后，使用 Agilent 2100 测试文库的插入片段大小。 插入片段大小达到预期后，利用qPCR方法准确定量文库有效浓度（文库有效浓度>2nM），确保文库质量。 在线测序：文库检测通过后，根据有效浓度和目标离线数据量要求汇集不同文库，然后在Illumina Nova平台上采用PE150测序策略进行测序。 之后对原始离线数据进行质量控制、序列比对、甲基化水平计算、差异甲基化区域（DMR）的识别和统计。

尿蛋白检测及生物信息学分析

1. 蛋白质分离技术：二维凝胶电泳（2DE）、二维荧光差示电泳（2D-DIGE）、等电聚焦电泳（IEF）、液相色谱；多维色谱（MDC）（包括尺寸排阻色谱、离子交换色谱、反相高效色谱、疏水作用色谱等）、多维液相色谱（MDLC）。
2. 蛋白质鉴定技术：初级质谱：根据离子源不同，可分为基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）和电喷雾质谱（ESI MS）；二级质谱：肽质量指纹图谱（PMF）；新技术：稳定核素特征生物质谱（SIAMS）。
3. 蛋白质肽段的鉴定：氨基端和羧基端分析，如Edman；质谱分析包括肽片段质谱分析和串联质谱分析。
4. 蛋白质相互作用：免疫沉淀技术、酵母二杂交系统、蛋白质芯片技术。

代谢组学和生物信息学分析

1. 子宫内膜组织分离后立即液氮冷冻，-80℃保存，研磨粉碎，冷有机液液提取。 采样前和采样过程中必须注意避免代谢变化。 对收集的细胞、组织、血液和尿液进行代谢组学分析。
2. 代谢物提取：代谢物提取中最常用的方法是用有机溶剂沉淀蛋白质，通过高速离心或超快过滤提取上清液，去除蛋白质沉淀。 使用冷冻干燥或氮吹浓缩，并将残留物溶解在复合溶剂中。
3. 样品检测：取一定量复溶上清液，使用Thermo Vanquish UHPLC超高效液相色谱系统和Thermo Q Active HF-X质谱平台进行机器检测。
4. 数据处理：质谱检测完成后，离线数据（. raw）文件导入到搜索软件中，可以简单筛选保留时间、质荷比等参数。 然后根据不同样品的保留时间偏差、质量偏差和信号强度偏差、信噪比、最小信号强度等信息，进行峰对齐和峰提取。 同时对峰面积进行定量，然后对目标离子进行积分，预测分子式并与数据库进行比对，得到数据的鉴定和定量结果。 因此，非靶向代谢组学数据库和搜索软件对实验结果起着决定性作用。 然而，LC-MS的公共数据库很少，而且大多数都是平台构建的数据库。 常用的数据库有HMDB、METLIN和一些自建库。
5. 信息分析：主成分分析、差异代谢物分析等。