L'impact de la myomectomie sur les résultats de la FIV

Méthode de regroupement et de mise en aveugle Il s'agit d'une étude nationale multicentrique, randomisée et contrôlée. L'inscription sur concours est effectuée entre tous les centres. Le groupe d'étude a reçu une FIV après myomectomie et le groupe témoin a été dirigé vers une FIV après l'évaluation de routine, incluant probablement une laparoscopie diagnostique. Dans cette étude, 836 patients ont été répartis au hasard en 2 groupes avec 418 patients dans chaque groupe selon le système aléatoire centralisé. Une séquence aléatoire est générée avec une taille de bloc aléatoire d'une taille de bloc de 4.

Collecte de données cliniques et d'échantillons Les données et les échantillons sont collectés selon le formulaire de rapport de cas (CRF), y compris les informations randomisées, épidémiologiques et cliniques. L'évaluation de l'historique et des détails de l'infertilité, les résultats d'imagerie, la réservation ovarienne et les résultats chirurgicaux présentent un intérêt particulier et sont enregistrés en détail.

Des échantillons de sang périphérique, de cellules exfoliées cervicales, de cellules exfoliées endométriales, de biopsie endométriale et de myome dans le groupe d'étude sont collectés pour une analyse multi-omique. Le processus de prélèvement des échantillons ne doit pas interférer ni détériorer le traitement chirurgical et de FIV.

Traitement de FIV : le schéma de FIV doit inclure des enregistrements détaillés du plan de régulation à la baisse, du nombre de cycles, des blastocystes congelés ou frais, ①Groupe d'étude : le traitement de FIV est effectué 6 mois après la myomectomie et les patients doivent être suivis pendant 1 an après le début de la FIV . Si l'endomètre est exposé pendant la myomectomie, le traitement de FIV est effectué 12 mois après la myomectomie. Il convient de noter que le temps de contraception postopératoire doit être enregistré, ainsi que l'intervalle de temps entre la myomectomie et la FIV.

②Groupe témoin : le traitement par FIV a été effectué immédiatement après l'évaluation pertinente et suivi pendant 1 an après le début de la FIV.

Examen des caractéristiques génomiques et analyse bioinformatique

1. Le réseau réceptif endométrial (ERA) est un test de diagnostic moléculaire basé sur la technologie des microréseaux, qui divise la biopsie endométriale en types réceptifs, préréceptifs ou prolifératifs en fonction de l'expression de 238 gènes sélectionnés. ER Map/ER Stage est basé sur l'expression de 184 gènes impliqués dans la réponse immunitaire maternelle liée à la prolifération de l'endomètre et à l'implantation d'embryons.
2. Séquençage de la méthylation : extrayez l'ADN lié au sang périphérique, aux tissus et aux cellules, et quantifiez avec précision la concentration d'ADN à l'aide de Qubit 2.0. La quantité totale d'ADN détectée ne doit pas être inférieure à 1 ug. Construction de la bibliothèque : Après avoir réussi la détection de l'échantillon, 1 µg d'échantillon d'ADN génomique a été mélangé avec de l'ADN lambda non méthylé à l'aide du système Biouptor, puis fragmenté à une taille moyenne d'environ 250 pb. Après fragmentation, l'ADN fragmenté au hasard purifié a ensuite été réparé, passivé et phosphorylé avec un mélange d'ADN polymérase T4, de fragment de Klenow et de polynucléotide kinase T4. Le fragment d'ADN franc a ensuite été adénosylé en 3' avec le fragment de Klenow (3'-5'exo-), puis lié au linker reliant la 5'-méthyl Cytosine au lieu de la Cytosine à l'aide de la T4 DNA ligase. Après avoir terminé chaque étape, utilisez des billes magnétiques pour purifier l'ADN. Ensuite, utilisez le kit d'or de méthylation d'ADN ZYMO EZ pour convertir la cytosine non méthylée en uracile conformément aux instructions. Enfin, utilisez l'ADN polymérase JumpStart Taq pour l'amplification PCR, puis utilisez des billes magnétiques pour purifier le produit PCR afin d'obtenir la bibliothèque finale. Inspection de la qualité de la bibliothèque : une fois la construction de la bibliothèque terminée, une quantification préliminaire est effectuée à l'aide de Qubit2.0, et la librairie est diluée à 1 ng/ul. Ensuite, la taille de l'insert de la bibliothèque est testée à l'aide d'Agilent 2100. Une fois que la taille de l'insert répond aux attentes, la concentration efficace de la bibliothèque est quantifiée avec précision à l'aide de la méthode qPCR (concentration efficace de la bibliothèque> 2 nM) pour garantir la qualité de la bibliothèque. Séquençage en ligne : après avoir passé la détection de la bibliothèque, différentes bibliothèques sont regroupées en fonction de la concentration effective et des exigences de volume de données hors ligne cibles, puis séquencées sur la plate-forme Illumina Nova à l'aide de la stratégie de séquençage PE150. Après cela, le contrôle de la qualité des données originales hors ligne, la comparaison des séquences, le calcul du niveau de méthylation, l'identification et les statistiques de la région de méthylation différentielle (DMR) ont été effectués.

Détection de protéines urinaires et analyse bioinformatique

1. Technologie de séparation des protéines : électrophorèse bidimensionnelle sur gel (2DE), électrophorèse différentielle à fluorescence bidimensionnelle (2D-DIGE), électrophorèse à focalisation isoélectrique (IEF), chromatographie liquide ; Chromatographie multidimensionnelle (MDC) (y compris la chromatographie d'exclusion stérique, la chromatographie par échange d'ions, la chromatographie haute performance en phase inverse, la chromatographie à interaction hydrophobe, etc.) et la chromatographie liquide multidimensionnelle (MDLC).
2. Technologie d'identification des protéines : spectrométrie de masse primaire : selon différentes sources d'ions, elle peut être divisée en spectrométrie de masse à temps de vol par ionisation par désorption laser assistée par matrice (MALDI-TOF-MS) et spectrométrie de masse à pulvérisation électrique (ESI MS) ; Spectrométrie de masse secondaire : empreinte de masse peptidique (PMF) ; Nouvelle technologie : Spectrométrie de masse biologique à signature de nucléide stable (SIAMS).
3. Identification des segments peptidiques protéiques : analyse des extrémités amino et carboxyle, comme Edman ; Spectrométrie de masse, y compris la spectrométrie de masse de fragments peptidiques et la spectrométrie de masse en tandem.
4. Interactions protéiques : technologie d'immunoprécipitation, système hybride à deux levures, technologie des puces à protéines.

Analyse métabolomique et bioinformatique

1. Le tissu de l'endomètre a été immédiatement congelé dans de l'azote liquide après avoir été isolé, puis le tissu a été stocké à -80 ℃, broyé et broyé, et extrait avec une extraction liquide-liquide organique froide. Il faut veiller à éviter les changements métaboliques avant et pendant l'échantillonnage. Effectuez une analyse métabolomique sur les cellules, les tissus, le sang et l'urine collectés.
2. Extraction de métabolites : La méthode la plus couramment utilisée dans l'extraction de métabolites consiste à précipiter les protéines avec des solvants organiques et à extraire le surnageant par centrifugation à grande vitesse ou filtration ultrarapide pour éliminer la précipitation des protéines. Concentrer par lyophilisation ou soufflage d'azote et dissoudre le résidu dans un solvant complexe.
3. Détection d'échantillon : Prélevez une certaine quantité de surnageant redissous et utilisez le système de chromatographie liquide ultra-haute performance Thermo Vanquish UHPLC et la plateforme de spectrométrie de masse Thermo Q Active HF-X pour la détection par machine.
4. Traitement des données : une fois la détection par spectrométrie de masse terminée, les données hors ligne (. raw) est importé dans le logiciel de recherche pour un filtrage simple du temps de rétention, du rapport de charge de masse et d'autres paramètres. Ensuite, selon l'écart de temps de rétention, l'écart de qualité et l'écart d'intensité du signal, le rapport signal sur bruit, l'intensité minimale du signal et d'autres informations de différents échantillons, l'alignement des pics et l'extraction des pics sont effectués. Dans le même temps, la surface du pic est quantifiée, puis les ions cibles sont intégrés pour prédire la formule moléculaire et comparer avec la base de données pour obtenir l'identification et les résultats quantitatifs des données. Par conséquent, les bases de données métabolomiques non ciblées et les logiciels de recherche jouent un rôle déterminant dans les résultats expérimentaux. Cependant, LC-MS a très peu de bases de données publiques, et la plupart d'entre elles sont des bases de données construites sur une plate-forme. Les bases de données couramment utilisées incluent HMDB, METLIN et certaines bibliothèques auto-construites.
5. Analyse de l'information : analyse en composantes principales, analyse différentielle des métabolites, etc.