ART 失敗の危険因子としての HIV の一次および二次薬剤耐性変異 (DRM) (2 つの薬剤ベースのレジメンを含む)

はじめに HIV における薬剤耐性変異 (DRM) の存在は、ART の有効性において重要な役割を果たします。 ART の非常に良好な結果にもかかわらず、DRM を備えた HIV 株の出現、つまりウイルス学的抑制の失敗につながる可能性についての懸念が常にあります。 原発性 HIV DRM は、これまで ART による治療を受けていない PLWH で発生します。 これらの人々は、遺伝的障壁が低く、ウイルス学的失敗のリスクが高く、他の薬剤に対する耐性を獲得するリスクが高い状態で治療を開始し、それがエイズの進行につながる可能性があります。 特に、長時間作用型注射療法（LAI ART）や曝露前予防法（PreP）で使用されるレジメンなど、2つの薬物ベースのレジメンで治療を受けている患者の間で懸念が高まっています。 世界中で報告されている主要な HIV-1 DRM の普及率は 5 ～ 25% ですが、アクセサリ (多態性) DRM の場合は最大 50% に達することもあります。 高所得国では、取得された DRM を持つシーケンスの蔓延は減少しているが、伝達された抵抗の割合は取得された DRM の割合と比較して明らかに増加しており、DRM の全ケースの 70% にさえ達していることが報告されています。

研究の目的 ART の選択は、HIV における薬剤耐性変異の存在に関する疫学データ、および治療の開始または変更前に評価された HIV 遺伝子型検査の結果に基づいています。 HIV の集団は依然として進化している (複製プロセス中の間違いにより変化している) ため、ART 開始前の DRM の存在はウイルス学的抑制が不十分な危険因子である可能性があります。 同様に、不適切な抗レトロウイルス療法は、ウイルス集団を最初に低いフィットネスレベルに導き、次により高いフィットネスレベルに導く可能性があります。 HIV 薬剤耐性のパターンは常に変化しており (新たな変異の出現)、LAI ART として 2 つの薬剤ベースのレジメンを含む新薬剤が治療に導入されているため、我々は HIV 薬剤耐性の種類と頻度を決定する研究を実施することにしました。 DRM (NRTI および NNRTI - RPV、3TC および InSTI - CAB、DTG を含む)、未治療の患者集団、および ART ウイルス学的不全患者における。 この結果は、LAI を含む ART 不全のリスク評価や ART レジメンの決定に役立つ可能性があります。

方法論 私たちは、多施設、観察的、横断的研究を実施することを目指しています。 患者のデータは2年間（2023年から2024年）まで抽出されます。 募集場所はポーランド国内の3つの臨床センター（ワルシャワに2つ、オストルダに1つ）となる。 参加基準は次のとおりです: HIV-1 感染症と診断されている、年齢 18 歳以上。 年齢、性別、BMI、感染経路、臨床および検査所見などの疫学データを収集します: HIV ウイルス量、リンパ球 CD4 数および CD4:CD8 比 (診断時/治療変更時)、エイズの存在-定義疾患、ARTレジメンの導入。 すべての患者において、ART を開始する前に、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤 (NRTI)、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤 (NNRTI)、プロテアーゼ阻害剤 (PI)、およびインテグラーゼ阻害剤 (InSTI) に対する HIV-1 DRM の存在が評価されます。日常的なケアの一環。

HIV-1 プロテアーゼ (PR) および逆転写酵素 (RT) コード領域の薬剤耐性ジェノタイピングは、市販の ViroSeq HIV-1 ジェノタイピング システム (Abbott Molecular、米国イリノイ州デスプレーンズ) を使用したサンガー配列決定法に基づいて実行されます。 ）。 分析手順はメーカーの指示に従って実行されます。 HIV-1 RNA は、沈殿および遠心分離のステップによって収集された 0.5 mL の血漿サンプルから手動で抽出され、続いて MuLV 逆転写酵素による逆転写が行われます。 1.8 kb pol 領域フラグメントに対応する DNA 産物は、ウラシル-N-グリコシラーゼ (UNG) 酵素とのプレインキュベーション後、AmpliTaq Gold DNA ポリメラーゼを用いた PCR で生成されます。 HIV-1 インテグラーゼ コード領域の配列が決定される場合、ViroSeq HIV-1 インテグラーゼ ジェノタイピング システム (Celera Diagnostics、米国カリフォルニア州アラメダ) が 1 ステップの RT-PCR 増幅反応で適用されます。 得られた PCR 産物は、Exo-SAP ミックス (エキソヌクレアーゼ I + エビ アルカリホスファターゼ) とのインキュベーションによって酵素的に精製され、必要に応じて希釈され、適切なターミネーターとの反応で蛍光標識され、データ収集ソフトウェア (Applied Biosystems) を使用して ABI Prism 3130 Genetic Analyzer によって配列決定されます。 。 得られた配列クロマトグラムは、ViroSeq Genotyping System ソフトウェア (Abbott Molecular) を使用して組み立てられ、分析されます。 プロテアーゼ、インテグラーゼ、および逆転写酵素の薬剤耐性に関連する変異が特定されます。 有効で品質がチェックされた pol 配列は、検出された遺伝子変異の重要性の解釈における潜在的な差異を比較するために、スタンフォード大学 HIV 薬剤耐性データベース (http://hivdb.stanford.edu) に提出されます。 HIV-1 サブタイプおよび環状組換え型 (CRF) の部分的な pol 提出配列の決定には、REGA HIV-1 Subtyping Tool バージョン 3.0 が使用されます。

収集されたデータの統計的評価は、一次および二次 HIV DRM が存在する PLWH のサブグループで実行されます。 この分析は、さまざまなサブタイプの HIV-1 感染症患者のサブグループでも実行されます。 Shapiro-Wilk 検定は、分析された変数の分布の正規性を検証するために実行されます。 スチューデントの t 検定またはマン-ホイットニー U 検定を使用して連続変数の平均値の差を評価し、χ 2 検定またはフィッシャーの正確検定がカテゴリ変数に対して実行されます。 <0.05 の p 値は、統計的に有意であるとみなされます。 統計分析は、Python 3.7 ソフトウェアと Statistica 13.1 プログラム (StatSoft Poland、クラクフ、ポーランド) を使用して実行されます。

この臨床試験はワルシャワ医科大学の生命倫理委員会から肯定的な意見を得ています（同意番号：AKBE/72/2023）。 分析されたすべての患者データは完全に匿名化されます。 この研究はヘルシンキ宣言の原則に従っています。