Primaire en secundaire resistentiemutaties (DRM's) bij HIV als risicofactor voor het falen van ART, inclusief twee op medicijnen gebaseerde regimes.

Inleiding De aanwezigheid van resistentiemutaties (DRM's) bij HIV speelt een belangrijke rol in de effectiviteit van ART. Ondanks de zeer goede resultaten van ART bestaat er voortdurende bezorgdheid over de opkomst van HIV-stammen met DRM's, wat kan leiden tot falen van de virologische onderdrukking. Primaire HIV-DRM's komen voor bij PLWH die niet eerder met ART zijn behandeld. Deze mensen beginnen de behandeling met een lagere genetische barrière, een hoger risico op virologisch falen en een hoger risico op het ontwikkelen van resistentie tegen andere geneesmiddelen, wat kan leiden tot progressie naar AIDS. De zorgen groeien vooral onder patiënten die worden behandeld met twee op geneesmiddelen gebaseerde regimes, waaronder langwerkende therapieën in injecties (LAI ART) of regimes die worden gebruikt bij profylaxe vóór blootstelling (PreP). De prevalentie van belangrijke hiv-1-DRM's die wereldwijd worden gerapporteerd, varieert van 5 tot 25%, terwijl in het geval van bijkomende (polymorfe) DRM's zelfs 50% kan worden bereikt. Er is gerapporteerd dat in landen met hoge inkomens de prevalentie van sequenties met verworven DRM’s afneemt, maar het aandeel overgedragen resistentie neemt duidelijk toe in vergelijking met het aandeel verworven DRM’s, en bereikt zelfs 70% van alle gevallen van DRM.

Doel van het onderzoek De keuze voor ART is gebaseerd op epidemiologische gegevens over de aanwezigheid van geneesmiddelresistentiemutaties bij HIV, evenals op basis van de HIV-genotyperingstestresultaten die zijn beoordeeld vóór aanvang of verandering van de behandeling. De aanwezigheid van DRM's vóór de start van ART kan een risicofactor zijn voor onvoldoende virologische onderdrukking, aangezien de HIV-populatie nog steeds evolueert (verandert als gevolg van fouten tijdens het replicatieproces). Ook kan een ontoereikende antiretrovirale therapie de virale populatie eerst naar een lager fitnessniveau en vervolgens naar een hoger fitnessniveau drijven. Vanwege de voortdurende veranderingen in het patroon van resistentie tegen HIV-medicijnen (opkomst van nieuwe mutaties) en de introductie van nieuwe medicijnen in de behandeling, waaronder twee op medicijnen gebaseerde regimes als LAI ART, hebben we besloten een onderzoek uit te voeren waarin het type en de frequentie van de HIV-medicatie worden bepaald. DRM's (waaronder NRTI en NNRTI - RPV, 3TC en InSTI - CAB, DTG), in de populatie van niet eerder behandelde patiënten, evenals onder patiënten met virologisch falen van ART. De resultaten kunnen helpen bij het beoordelen van het risico op ART-falen, inclusief LAI, en bij het bepalen van ART-regimes.

Methodologie We streven ernaar om multicenter, observationeel, cross-sectioneel onderzoek uit te voeren. De patiëntengegevens worden uit de periode van 2 jaar (2023 - 2024) gehaald. De locatie van de rekrutering zal drie klinische centra in Polen zijn (twee in Warschau, één in Ostróda). Inclusiecriteria zijn: diagnose met HIV-1-infectie, leeftijd 18 jaar of ouder. We zullen epidemiologische gegevens verzamelen zoals: leeftijd, geslacht, BMI, transmissieroute, ook klinische en laboratoriumbevindingen: HIV-virale lading, CD4-aantal lymfocyten en CD4:CD8-ratio (op het moment van diagnose/verandering van therapie), aanwezigheid van AIDS -definiëren van ziekten, implementeren van ART-regime. Bij alle patiënten zal, voordat met ART wordt begonnen, de aanwezigheid van HIV-1 DRM’s op nucleoside reverse transcriptaseremmers (NRTI), niet-nucleoside reverse transcriptaseremmers (NNRTI), proteaseremmers (PI) en integraseremmers (InSTI) worden geëvalueerd. onderdeel van de reguliere zorg.

De genotypering van de geneesmiddelresistentie van het HIV-1-protease (PR) en het reverse transcriptase (RT)-coderende gebied zal worden uitgevoerd op basis van een Sanger-sequencingmethode met gebruik van het in de handel verkrijgbare ViroSeq HIV-1 Genotyping System (Abbott Molecular, Des Plains, IL, VS). ). De analyseprocedure wordt uitgevoerd volgens de instructies van de fabrikant. HIV-1 RNA zal handmatig worden geëxtraheerd uit 0,5 ml verzamelde plasmamonsters door precipitatie- en centrifugatiestappen, gevolgd door omgekeerde transcriptie met MuLV reverse transcriptase. DNA-producten die overeenkomen met het pol-regiofragment van 1,8 kb zullen worden gegenereerd in PCR met AmpliTaq Gold DNA-polymerase, na pre-incubatie met het Uracil-N-Glycosylase (UNG)-enzym. Waar de voor HIV-1 integrase coderende regio zal worden gesequenced, zal het ViroSeq HIV-1 Integrase Genotyping System (Celera Diagnostics, Alameda, CA, VS) worden toegepast met eenstaps RT-PCR-amplificatiereactie. Verkregen PCR-producten zullen enzymatisch worden gezuiverd door incubatie met Exo-SAP-mix (Exonuclease I + Shrimp Alkaline Phosphatase), indien nodig verdund, fluorescent gelabeld in reactie met geschikte terminators en gesequenced door ABI Prism 3130 Genetic Analyzer met behulp van software voor gegevensverzameling (Applied Biosystems) . De resulterende sequentiechromatogrammen zullen worden samengesteld en geanalyseerd met behulp van ViroSeq Genotyping System Software (Abbott Molecular). Geneesmiddelresistentie-geassocieerde mutaties in protease, integrase en reverse transcriptase zullen geïdentificeerd worden. De geldige, op kwaliteit gecontroleerde pol-sequenties zullen worden ingediend bij de Stanford University HIV Drug Resistance Database (//hivdb.stanford.edu) om potentiële verschillen in de interpretatie van de betekenis van gedetecteerde genetische varianten te vergelijken. Voor HIV-1-subtype en circulaire recombinante vormen (CRF's) zal bepaling van gedeeltelijke pol-ingediende sequenties REGA HIV-1 Subtyping Tool versie 3.0 worden gebruikt.

Statistische evaluatie van de verzamelde gegevens zal worden uitgevoerd in subgroepen van PLWH met de aanwezigheid van primaire en secundaire HIV-DRM's. De analyse zal ook worden uitgevoerd in de subgroepen van patiënten met verschillende subtypes HIV-1-infectie. De Shapiro-Wilk-test zal worden uitgevoerd voor de verificatie van de normaliteit van de verdelingen in de geanalyseerde variabelen. Student's t-test of Mann-Whitney U-test zal worden gebruikt om het verschil in gemiddelde waarde in continue variabelen te evalueren en χ 2 of Fisher exact-tests zullen worden uitgevoerd voor categorische variabelen. Een p-waarde van <0,05 wordt als statistisch significant beschouwd. Statistische analyses zullen worden uitgevoerd met behulp van Python 3.7-software en Statistica 13.1-programma (StatSoft Polen, Krakau, Polen).

De klinische proef heeft een positief advies gekregen van de Bio-ethische Commissie van de Medische Universiteit van Warschau (toestemmingsnummer: AKBE/72/2023). Alle geanalyseerde patiëntgegevens worden volledig geanonimiseerd. De studie volgt de principes van de Verklaring van Helsinki.