Mutaciones primarias y secundarias de resistencia a los medicamentos (DRM) en el VIH como factor de riesgo de fracaso del TAR, incluidos dos regímenes basados ​​en medicamentos.

Introducción La presencia de mutaciones de resistencia a los medicamentos (DRM) en el VIH juega un papel importante en la eficacia del TAR. A pesar de los muy buenos resultados del TAR, existe una preocupación constante por la aparición de cepas de VIH con DRM, lo que puede conducir al fracaso de la supresión virológica. Los DRM primarios del VIH ocurren en personas que viven con el VIH y que no han sido tratadas previamente con TAR. Estas personas inician el tratamiento con una barrera genética más baja, un mayor riesgo de fracaso virológico y un mayor riesgo de desarrollar resistencia a otros fármacos, lo que puede conducir a la progresión al SIDA. Las preocupaciones crecen especialmente entre los pacientes tratados con dos regímenes basados ​​en medicamentos, incluidas terapias de acción prolongada en inyecciones (LAI ART) o regímenes utilizados en profilaxis previa a la exposición (PreP). La prevalencia de los principales DRM del VIH-1 notificados en todo el mundo oscila entre el 5 y el 25 %, mientras que en el caso de los DRM accesorios (polimórficos) incluso hasta el 50 %. Se ha informado que en los países de altos ingresos la prevalencia de secuencias con DRM adquiridas está disminuyendo, pero la fracción de resistencia transmitida está aumentando claramente en comparación con la fracción de DRM adquiridas, alcanzando incluso el 70% de todos los casos de DRM.

Objetivo del estudio La elección del TAR se basa en datos epidemiológicos sobre la presencia de mutaciones de resistencia a los medicamentos en el VIH, así como en los resultados de la prueba de genotipado del VIH evaluados antes del inicio o cambio del tratamiento. La presencia de DRM antes del inicio del TAR puede ser un factor de riesgo de supresión virológica insuficiente, ya que la población de VIH aún está evolucionando (cambiando debido a errores durante el proceso de replicación). Además, una terapia antirretroviral inadecuada puede llevar a la población viral primero a un nivel de condición física más bajo y luego a un nivel de condición física más alto. Debido a los constantes cambios en el patrón de resistencia a los medicamentos del VIH (aparición de nuevas mutaciones) y la introducción de nuevos medicamentos en el tratamiento, incluidos dos regímenes basados ​​en medicamentos como LAI ART, decidimos realizar un estudio que determine el tipo y la frecuencia de DRM (incluidos NRTI y NNRTI - RPV, 3TC e InSTI - CAB, DTG), en la población de pacientes no tratados previamente, así como entre pacientes con fracaso virológico del TAR. Los resultados pueden ayudar a evaluar el riesgo de fracaso del TAR, incluida la LAI, y a determinar los regímenes de TAR.

Metodología Nuestro objetivo es realizar un estudio transversal, observacional y multicéntrico. Los datos de los pacientes se extraerán del período de 2 años (2023 - 2024). El lugar de contratación serán tres centros clínicos en Polonia (dos en Varsovia y uno en Ostróda). Los criterios de inclusión son: diagnóstico de infección por VIH-1, edad de 18 años o más. Recopilaremos datos epidemiológicos como: edad, sexo, IMC, vía de transmisión, también hallazgos clínicos y de laboratorio: carga viral del VIH, recuento de linfocitos CD4 y relación CD4:CD8 (en el momento del diagnóstico/cambio de terapia), presencia de SIDA. -Enfermedades definitorias, régimen de TAR implementado. En todos los pacientes, antes de iniciar el TAR, se evaluará la presencia de DRM del VIH-1 frente a inhibidores nucleósidos de la transcriptasa inversa (INTI), inhibidores no nucleósidos de la transcriptasa inversa (ITINN), inhibidores de la proteasa (IP) e inhibidores de la integrasa (InSTI), como parte de la atención de rutina.

La genotipificación de la resistencia a los medicamentos de la región codificante de la proteasa (PR) y la transcriptasa inversa (RT) del VIH-1 se realizará basándose en un método de secuenciación de Sanger con el uso del sistema de genotipado ViroSeq VIH-1 disponible comercialmente (Abbott Molecular, Des Plains, IL, EE. UU. ). El procedimiento de análisis se realizará según las instrucciones del fabricante. El ARN del VIH-1 se extraerá manualmente de 0,5 ml de muestras de plasma recolectadas mediante pasos de precipitación y centrifugación, seguidos de transcripción inversa con transcriptasa inversa MuLV. Los productos de ADN correspondientes al fragmento de la región pol de 1,8 kb se generarán en PCR con ADN polimerasa AmpliTaq Gold, después de la preincubación con la enzima uracil-N-glucosilasa (UNG). Cuando se secuenciará la región codificante de la integrasa del VIH-1, se aplicará el sistema de genotipado de la integrasa ViroSeq VIH-1 (Celera Diagnostics, Alameda, CA, EE. UU.) con una reacción de amplificación de RT-PCR de un paso. Los productos de PCR obtenidos se purificarán enzimáticamente mediante incubación con una mezcla Exo-SAP (Exonucleasa I + Fosfatasa alcalina de camarón), se diluirán si es necesario, se marcarán fluorescentemente en reacción con terminadores apropiados y se secuenciarán mediante el analizador genético ABI Prism 3130 utilizando el software de recopilación de datos (Applied Biosystems). . Los cromatogramas de secuencia resultantes se ensamblarán y analizarán utilizando el software ViroSeq Genotyping System (Abbott Molecular). Se identificarán mutaciones asociadas a la resistencia a los medicamentos en proteasa, integrasa y transcriptasa inversa. Las secuencias pol válidas y de calidad comprobada se enviarán a la base de datos de resistencia a los medicamentos contra el VIH de la Universidad de Stanford (http://hivdb.stanford.edu) para comparar posibles diferencias en la interpretación de la importancia de las variantes genéticas detectadas. Para el subtipo de VIH-1 y las formas recombinantes circulares (CRF), se utilizará la determinación de secuencias enviadas por pol parciales REGA VIH-1 Subtyping Tool versión 3.0.

La evaluación estadística de los datos recopilados se realizará en subgrupos de PLWH con presencia de DRM de VIH primarios y secundarios. El análisis también se realizará en los subgrupos de pacientes con diferentes subtipos de infección por VIH-1. Se realizará la prueba de Shapiro-Wilk para la verificación de la normalidad de las distribuciones en las variables analizadas. Se utilizará la prueba t de Student o la prueba U de Mann-Whitney para evaluar la diferencia en el valor medio en variables continuas y se realizarán pruebas de χ 2 o exactas de Fisher para variables categóricas. Un valor de p <0,05 se considerará estadísticamente significativo. Los análisis estadísticos se realizarán utilizando el software Python 3.7 y el programa Statistica 13.1 (StatSoft Polonia, Cracovia, Polonia).

El ensayo clínico recibió una opinión positiva del Comité de Bioética de la Universidad Médica de Varsovia (número de consentimiento: AKBE/72/2023). Todos los datos de los pacientes analizados serán completamente anónimos. El estudio sigue los principios de la Declaración de Helsinki.