Primäre und sekundäre Arzneimittelresistenzmutationen (DRMs) bei HIV als Risikofaktor für das Scheitern einer ART, einschließlich zweier medikamentenbasierter Therapien.

Einleitung Das Vorhandensein von Arzneimittelresistenzmutationen (DRMs) bei HIV spielt eine wichtige Rolle für die Wirksamkeit von ART. Trotz sehr guter Ergebnisse der ART besteht ständig Besorgnis über das Auftreten von HIV-Stämmen mit DRMs, die zu einem Versagen der virologischen Suppression führen können. Primäre HIV-DRMs treten bei Menschen mit HIV auf, die zuvor nicht mit ART behandelt wurden. Diese Menschen beginnen die Behandlung mit einer niedrigeren genetischen Barriere, einem höheren Risiko eines virologischen Versagens und einem höheren Risiko, eine Resistenz gegen andere Medikamente zu entwickeln, was zum Fortschreiten von AIDS führen kann. Die Besorgnis wächst insbesondere bei Patienten, die mit zwei medikamentösen Behandlungsschemata behandelt werden, darunter Langzeittherapien in Form von Injektionen (LAI ART) oder Behandlungsschemata zur Präexpositionsprophylaxe (PreP). Die weltweit gemeldete Prävalenz der wichtigsten HIV-1-DRMs liegt zwischen 5 und 25 %, bei akzessorischen (polymorphen) DRMs sogar bei bis zu 50 %. Es wurde berichtet, dass in Ländern mit hohem Einkommen die Prävalenz von Sequenzen mit erworbenen DRMs abnimmt, der Anteil der übertragenen Resistenzen jedoch im Vergleich zum Anteil der erworbenen DRMs deutlich zunimmt und sogar 70 % aller DRM-Fälle erreicht.

Ziel der Studie Die Wahl der ART basiert auf epidemiologischen Daten zum Vorhandensein von Arzneimittelresistenzmutationen bei HIV sowie auf der Grundlage der Ergebnisse der HIV-Genotypisierungstests, die vor Beginn oder Änderung der Behandlung ausgewertet wurden. Das Vorhandensein von DRMs vor Beginn der ART kann ein Risikofaktor für eine unzureichende virologische Unterdrückung sein, da sich die HIV-Population noch weiterentwickelt (sie verändert sich aufgrund von Fehlern während des Replikationsprozesses). Darüber hinaus kann eine unzureichende antiretrovirale Therapie die Viruspopulation zunächst auf ein niedrigeres Fitnessniveau und dann auf ein höheres Fitnessniveau treiben. Aufgrund der ständigen Veränderungen im Muster der HIV-Medikamentenresistenz (Auftreten neuer Mutationen) und der Einführung neuer Medikamente in die Behandlung, darunter zwei medikamentenbasierte Therapien wie LAI ART, haben wir uns entschieden, eine Studie durchzuführen, um die Art und Häufigkeit von zu bestimmen DRMs (einschließlich NRTI und NNRTI – RPV, 3TC und InSTI – CAB, DTG) in der Population zuvor unbehandelter Patienten sowie bei Patienten mit virologischem ART-Versagen. Die Ergebnisse können bei der Beurteilung des Risikos eines ART-Versagens, einschließlich LAI, und bei der Festlegung von ART-Therapien hilfreich sein.

Methodik Unser Ziel ist die Durchführung multizentrischer, beobachtender Querschnittsstudien. Die Patientendaten werden aus dem 2-Jahres-Zeitraum (2023 – 2024) extrahiert. Der Standort der Rekrutierung wird drei klinische Zentren in Polen sein (zwei in Warschau, eines in Ostróda). Einschlusskriterien sind: Diagnose einer HIV-1-Infektion, Alter 18 Jahre oder älter. Wir erfassen epidemiologische Daten wie: Alter, Geschlecht, BMI, Übertragungsweg sowie klinische und Laborbefunde: HIV-Viruslast, CD4-Lymphozytenzahl und CD4:CD8-Verhältnis (zum Zeitpunkt der Diagnose/Therapiewechsel), Vorliegen von AIDS -Definition von Krankheiten, implementierte ART-Therapie. Bei allen Patienten wird vor Beginn der ART das Vorhandensein von HIV-1-DRMs gegen nukleosidische Reverse-Transkriptase-Inhibitoren (NRTI), nicht-nukleosidische Reverse-Transkriptase-Inhibitoren (NNRTI), Protease-Inhibitoren (PI) und Integrase-Inhibitoren (InSTI) bewertet Teil der Routinepflege.

Die Arzneimittelresistenz-Genotypisierung der kodierenden Region für HIV-1-Protease (PR) und Reverse Transkriptase (RT) wird auf der Grundlage einer Sanger-Sequenzierungsmethode unter Verwendung des kommerziell erhältlichen ViroSeq HIV-1-Genotypisierungssystems (Abbott Molecular, Des Plains, IL, USA) durchgeführt ). Das Analyseverfahren wird gemäß den Anweisungen des Herstellers durchgeführt. HIV-1-RNA wird manuell aus 0,5 ml gesammelten Plasmaproben durch Fällungs- und Zentrifugationsschritte extrahiert, gefolgt von einer reversen Transkription mit MuLV-Reverse-Transkriptase. DNA-Produkte, die dem 1,8 kb großen Pol-Region-Fragment entsprechen, werden in der PCR mit AmpliTaq Gold DNA Polymerase nach Vorinkubation mit dem Enzym Uracil-N-Glycosylase (UNG) erzeugt. Wo die HIV-1-Integrase-kodierende Region sequenziert wird, wird das ViroSeq HIV-1-Integrase-Genotypisierungssystem (Celera Diagnostics, Alameda, CA, USA) mit einer einstufigen RT-PCR-Amplifikationsreaktion angewendet. Die erhaltenen PCR-Produkte werden enzymatisch durch Inkubation mit Exo-SAP-Mix (Exonuklease I + Shrimp Alkaline Phosphatase) gereinigt, bei Bedarf verdünnt, in Reaktion mit geeigneten Terminatoren fluoreszierend markiert und mit dem ABI Prism 3130 Genetic Analyzer unter Verwendung von Datenerfassungssoftware (Applied Biosystems) sequenziert. . Die resultierenden Sequenzchromatogramme werden mit der ViroSeq Genotyping System Software (Abbott Molecular) zusammengestellt und analysiert. Arzneimittelresistenz-assoziierte Mutationen in Protease, Integrase und Reverse Transkriptase werden identifiziert. Die gültigen, qualitätsgeprüften Pol-Sequenzen werden an die HIV Drug Resistance Database der Stanford University (http://hivdb.stanford.edu) übermittelt, um mögliche Unterschiede bei der Interpretation der Bedeutung der erkannten genetischen Varianten zu vergleichen. Für die Bestimmung des HIV-1-Subtyps und der zirkulären rekombinanten Formen (CRFs) von partiellen pol-eingereichten Sequenzen wird das REGA HIV-1 Subtyping Tool Version 3.0 verwendet.

Die statistische Auswertung der gesammelten Daten erfolgt in Untergruppen von Menschen mit HIV mit Vorliegen primärer und sekundärer HIV-DRMs. Die Analyse wird auch in den Untergruppen von Patienten mit unterschiedlichen HIV-1-Infektionssubtypen durchgeführt. Der Shapiro-Wilk-Test wird zur Überprüfung der Normalität der Verteilungen in den analysierten Variablen durchgeführt. Der Student-T-Test oder der Mann-Whitney-U-Test werden verwendet, um die Differenz im Mittelwert in kontinuierlichen Variablen zu bewerten, und für kategoriale Variablen werden χ 2 - oder exakte Fisher-Tests durchgeführt. Ein p-Wert von <0,05 wird als statistisch signifikant angesehen. Statistische Analysen werden mit der Software Python 3.7 und dem Programm Statistica 13.1 (StatSoft Poland, Krakau, Polen) durchgeführt.

Die klinische Studie hat eine positive Stellungnahme des Bioethik-Komitees der Medizinischen Universität Warschau erhalten (Einwilligungsnummer: AKBE/72/2023). Alle analysierten Patientendaten werden vollständig anonymisiert. Die Studie folgt den Grundsätzen der Deklaration von Helsinki.