Mutações primárias e secundárias de resistência a medicamentos (DRMs) no HIV como fator de risco de falha da TARV, incluindo dois regimes baseados em medicamentos.

Introdução A presença de mutações de resistência aos medicamentos (DRMs) no HIV desempenha um papel importante na eficácia da TARV. Apesar dos resultados muito bons da TARV, existe uma preocupação constante com o surgimento de estirpes de VIH com DRMs, o que pode levar ao fracasso da supressão virológica. Os DRM primários do VIH ocorrem em PVHS que não foram previamente tratadas com TARV. Estas pessoas iniciam o tratamento com uma barreira genética mais baixa, um risco mais elevado de falência virológica e um risco mais elevado de desenvolver resistência a outros medicamentos, o que pode levar à progressão para a SIDA. As preocupações crescem especialmente entre os pacientes tratados com dois regimes baseados em medicamentos, incluindo terapias de longa ação em injeções (LAI ART) ou regimes usados ​​na profilaxia pré-exposição (PreP). A prevalência dos principais DRM do VIH-1 notificados em todo o mundo varia entre 5 e 25%, enquanto no caso de DRM acessórios (polimórficos) chega mesmo a 50%. Foi relatado que em países de rendimento elevado a prevalência de sequências com DRM adquiridos está a diminuir, mas a fracção de resistência transmitida está claramente a aumentar em comparação com a fracção de DRM adquiridos, atingindo até 70% de todos os casos de DRM.

Objetivo do estudo A escolha da TARV baseia-se em dados epidemiológicos relativos à presença de mutações de resistência aos medicamentos no VIH, bem como nos resultados dos testes de genotipagem do VIH avaliados antes do início ou alteração do tratamento. A presença de DRMs antes do início da TARV pode ser um factor de risco para supressão virológica insuficiente, uma vez que a população do VIH ainda está em evolução (mudando devido a erros durante o processo de replicação). Da mesma forma, a terapia anti-retroviral inadequada pode levar a população viral primeiro a um nível de aptidão mais baixo e depois a um nível de aptidão mais elevado. Devido às constantes mudanças no padrão de resistência aos medicamentos do HIV (surgimento de novas mutações) e à introdução de novos medicamentos no tratamento, incluindo dois regimes baseados em medicamentos como LAI ART, decidimos realizar um estudo que determine o tipo e a frequência de DRMs (incluindo NRTI e NNRTI - RPV, 3TC e InSTI - CAB, DTG), na população de pacientes não tratados anteriormente, bem como entre pacientes com falência virológica da TARV. Os resultados podem ajudar na avaliação do risco de falha da TARV, incluindo LAI, e na determinação dos regimes de TARV.

Metodologia Nosso objetivo é realizar um estudo multicêntrico, observacional e transversal. Os dados dos pacientes serão extraídos do período de 2 anos (2023 - 2024). O local de recrutamento serão três centros clínicos na Polónia (dois em Varsóvia e um em Ostróda). Os critérios de inclusão são: diagnóstico de infecção pelo HIV-1, idade igual ou superior a 18 anos. Coletaremos dados epidemiológicos como: idade, sexo, IMC, via de transmissão também achados clínicos e laboratoriais: carga viral do HIV, contagem de linfócitos CD4 e relação CD4:CD8 (no momento do diagnóstico/mudança de terapia), presença de AIDS -definir doenças, regime de TAR implementado. Em todos os pacientes, antes de iniciar a TARV, será avaliada a presença de DRMs do HIV-1 para inibidores nucleosídeos da transcriptase reversa (NRTI), inibidores não nucleosídeos da transcriptase reversa (NNRTI), inibidores da protease (PI) e inibidores da integrase (InSTI), como um parte dos cuidados de rotina.

A genotipagem de resistência aos medicamentos da região codificadora da protease (PR) e transcriptase reversa (RT) do HIV-1 será realizada com base em um método de sequenciamento Sanger com uso do sistema de genotipagem ViroSeq HIV-1 disponível comercialmente (Abbott Molecular, Des Plains, IL, EUA). ). O procedimento de análise será realizado de acordo com as instruções do fabricante. O RNA do HIV-1 será extraído manualmente de 0,5 mL de amostras de plasma coletadas por etapas de precipitação e centrifugação, seguida de transcrição reversa com transcriptase reversa MuLV. Produtos de DNA correspondentes ao fragmento da região pol de 1,8 kb serão gerados em PCR com AmpliTaq Gold DNA Polimerase, após pré-incubação com enzima Uracil-N-Glicosilase (UNG). Onde a região codificadora da integrase do HIV-1 será sequenciada, o Sistema de Genotipagem ViroSeq HIV-1 Integrase (Celera Diagnostics, Alameda, CA, EUA) será aplicado com uma reação de amplificação RT-PCR em uma etapa. Os produtos de PCR obtidos serão purificados enzimaticamente por incubação com mistura Exo-SAP (Exonuclease I + Fosfatase Alcalina de Camarão), diluídos se necessário, marcados fluorescentemente em reação com terminadores apropriados e sequenciados pelo Analisador Genético ABI Prism 3130 usando Software de Coleta de Dados (Applied Biosystems) . Os cromatogramas de sequência resultantes serão montados e analisados ​​​​usando o software ViroSeq Genotyping System (Abbott Molecular). Serão identificadas mutações associadas à resistência a medicamentos em protease, integrase e transcriptase reversa. As sequências pol válidas e de qualidade verificada serão submetidas ao banco de dados de resistência a medicamentos contra HIV da Universidade de Stanford (//hivdb.stanford.edu) para comparação de diferenças potenciais na interpretação do significado das variantes genéticas detectadas. Para o subtipo de HIV-1 e formas recombinantes circulares (CRFs), a determinação de sequências parciais enviadas por pol será usada a ferramenta de subtipagem REGA HIV-1 versão 3.0.

A avaliação estatística dos dados coletados será realizada em subgrupos de PVHS com presença de DRMs de HIV primários e secundários. A análise também será realizada nos subgrupos de pacientes com diferentes subtipos de infecção pelo HIV-1. Será realizado o teste de Shapiro-Wilk para verificação da normalidade das distribuições nas variáveis ​​analisadas. O teste t de Student ou teste U de Mann-Whitney será usado para avaliar a diferença no valor médio em variáveis ​​​​contínuas e testes χ 2 ou exatos de Fisher serão realizados para variáveis ​​​​categóricas. Um valor de p <0,05 será considerado estatisticamente significativo. As análises estatísticas serão realizadas usando o software Python 3.7 e o programa Statistica 13.1 (StatSoft Polônia, Cracóvia, Polônia).

O ensaio clínico recebeu parecer positivo do Comitê de Bioética da Universidade Médica de Varsóvia (número de consentimento: AKBE/72/2023). Todos os dados dos pacientes analisados ​​serão totalmente anonimizados. O estudo segue os princípios da Declaração de Helsinque.