두 가지 약물 기반 요법을 포함하여 ART 실패의 위험 요인인 HIV의 1차 및 2차 약물 저항성 돌연변이(DRM).

서문 HIV에서 약물 저항성 돌연변이(DRM)의 존재는 ART 효과에 중요한 역할을 합니다. ART의 매우 좋은 결과에도 불구하고, 바이러스 억제 실패로 이어질 수 있는 DRM이 포함된 HIV 변종의 출현에 대한 지속적인 우려가 있습니다. 일차 HIV DRM은 이전에 ART로 치료받은 적이 없는 PLWH에서 발생합니다. 이 사람들은 낮은 유전적 장벽, 높은 바이러스학적 실패 위험, 다른 약물에 대한 내성 발생 위험이 높은 상태에서 치료를 시작하여 AIDS로 진행될 수 있습니다. 특히 장기간 지속되는 주사 요법(LAI ART)이나 노출 전 예방 요법(PreP)을 포함한 두 가지 약물 기반 요법으로 치료받은 환자들 사이에서 우려가 커지고 있습니다. 전 세계적으로 보고된 주요 HIV-1 DRM의 유병률은 5~25%인 반면, 보조(다형성) DRM의 경우 최대 50%에 이릅니다. 고소득 국가에서는 획득된 DRM을 갖는 시퀀스의 유병률이 감소하고 있지만, 획득된 DRM의 비율에 비해 전송 저항의 비율이 분명히 증가하여 전체 DRM 사례의 70%에 달하는 것으로 보고되었습니다.

연구 목적 ART의 선택은 HIV의 약물 내성 돌연변이 존재에 관한 역학 데이터와 치료 시작 또는 변경 전에 평가된 HIV 유전형 검사 결과를 기반으로 합니다. ART 시작 전 DRM의 존재는 HIV 집단이 여전히 진화하고 있기 때문에(복제 과정 중 실수로 인해 변화) 바이러스 억제가 충분하지 않은 위험 요소가 될 수 있습니다. 또한 부적절한 항레트로바이러스 치료로 인해 바이러스 인구가 먼저 낮은 체력 수준을 거쳐 더 높은 체력 수준으로 증가할 수 있습니다. HIV 약물 내성 패턴의 지속적인 변화(새로운 돌연변이의 출현)와 LAI ART와 같은 두 가지 약물 기반 요법을 포함하여 치료에 새로운 약물의 도입으로 인해 우리는 HIV의 유형과 빈도를 결정하는 연구를 수행하기로 결정했습니다. DRM(NRTI 및 NNRTI - RPV, 3TC 및 InSTI - CAB, DTG 포함)은 이전에 치료받지 않은 환자 집단과 ART 바이러스학적 실패 환자 집단에서 사용됩니다. 결과는 LAI를 포함한 ART 실패의 위험을 평가하고 ART 요법을 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다.

방법론 우리는 다기관, 관찰, 단면 연구를 수행하는 것을 목표로 합니다. 환자 데이터는 2년(2023~2024) 동안 추출된다. 모집 장소는 폴란드의 임상 센터 3곳(바르샤바 2곳, 오스트로다 1곳)이 될 것입니다. 포함 기준은 HIV-1 감염 진단, 18세 이상입니다. 우리는 연령, 성별, BMI, 전염 경로, 임상 및 검사 결과, HIV 바이러스 수치, 림프구 CD4 수 및 CD4:CD8 비율(진단/치료 변경 시), AIDS 유무 등 역학 데이터를 수집합니다. -질병을 정의하고 ART 요법을 시행합니다. 모든 환자에서 ART를 시작하기 전에 뉴클레오사이드 역전사 효소 억제제(NRTI), 비뉴클레오사이드 역전사 효소 억제제(NNRTI) 프로테아제 억제제(PI) 및 인테그라제 억제제(InSTI)에 대한 HIV-1 DRM의 존재를 다음과 같이 평가합니다. 일상적인 관리의 일부입니다.

HIV-1 프로테아제(PR) 및 역전사효소(RT) 코딩 영역의 약물 저항성 유전형 분석은 상업적으로 이용 가능한 ViroSeq HIV-1 Genotyping System(Abbott Molecular, Des Plains, IL, USA)을 사용하여 Sanger 시퀀싱 방법을 기반으로 수행됩니다. ). 분석 절차는 제조업체의 지침에 따라 수행됩니다. HIV-1 RNA는 침전 및 원심분리 단계를 통해 수집된 혈장 샘플 0.5mL에서 수동으로 추출한 다음 MuLV 역전사효소를 사용하여 역전사합니다. 1.8kb pol 영역 단편에 해당하는 DNA 산물은 Uracil-N-Glycosylase(UNG) 효소와 함께 사전 배양한 후 AmpliTaq Gold DNA Polymerase를 사용한 PCR에서 생성됩니다. HIV-1 인테그라제 코딩 영역의 서열을 분석할 경우 ViroSeq HIV-1 Integrase Genotyping System(Celera Diagnostics, Alameda, CA, USA)을 1단계 RT-PCR 증폭 반응과 함께 적용합니다. 얻은 PCR 산물은 Exo-SAP 혼합물(엑소뉴클레아제 I + 새우 알칼리성 포스파타제)과 함께 인큐베이션하여 효소적으로 정제하고, 필요한 경우 희석하고, 적절한 터미네이터와 반응하여 형광 표지하고 데이터 수집 소프트웨어(Applied Biosystems)를 사용하여 ABI Prism 3130 유전자 분석기로 시퀀싱합니다. . 생성된 서열 크로마토그램은 ViroSeq 유전형 분석 시스템 소프트웨어(Abbott Molecular)를 사용하여 조립 및 분석됩니다. 프로테아제, 인테그라제 및 역전사효소의 약물 저항성 관련 돌연변이가 확인됩니다. 검출된 유전적 변이의 중요성 해석에 있어 잠재적인 차이를 비교하기 위해 유효하고 품질이 확인된 pol 서열을 스탠포드 대학교 HIV 약물 저항성 데이터베이스(http://hivdb.stanford.edu)에 제출할 것입니다. HIV-1 하위 유형 및 원형 재조합 형태(CRF) 제출된 부분 서열의 결정을 위해 REGA HIV-1 하위 유형 지정 도구 버전 3.0이 사용됩니다.

수집된 데이터의 통계적 평가는 1차 및 2차 HIV DRM이 있는 PLWH의 하위 그룹에서 수행됩니다. 분석은 또한 다양한 하위 유형의 HIV-1 감염 환자의 하위 그룹에서도 수행됩니다. 분석된 변수의 분포의 정규성을 검증하기 위해 Shapiro-Wilk 검정을 수행합니다. 학생의 t-검정 또는 Mann-Whitney U 검정을 사용하여 연속 변수의 평균값 차이를 평가하고 χ 2 또는 Fisher 정확 검정을 범주형 변수에 대해 수행합니다. <0.05의 p 값은 통계적으로 유의한 것으로 간주됩니다. 통계 분석은 Python 3.7 소프트웨어 및 Statistica 13.1 프로그램(StatSoft Polish, Kraków, 폴란드)을 사용하여 수행됩니다.

임상시험은 바르샤바 의과대학 생명윤리위원회로부터 긍정적인 의견을 받았습니다(동의 횟수: AKBE/72/2023). 분석된 모든 환자 데이터는 완전히 익명화됩니다. 이 연구는 헬싱키 선언의 원칙을 따릅니다.