HIV:n primaariset ja sekundaariset lääkeresistenssimutaatiot (DRM:t) ART:n epäonnistumisen riskitekijänä, mukaan lukien kaksi lääkepohjaista hoito-ohjelmaa.

Johdanto Lääkeresistenssimutaatioiden (DRM) esiintyminen HIV:ssä on tärkeä rooli ART-tehokkuudessa. Huolimatta erittäin hyvistä ART-tuloksista, on jatkuva huoli HIV-kantojen ilmaantumisesta DRM:iin, mikä voi johtaa virologisen suppression epäonnistumiseen. Primaarisia HIV DRM:itä esiintyy PLWH:illa, joita ei ole aiemmin hoidettu ART:lla. Nämä ihmiset aloittavat hoidon alhaisemmalla geneettisellä esteellä, suuremmalla virologisen epäonnistumisen riskillä ja suuremmalla riskillä kehittää resistenssiä muille lääkkeille, mikä voi johtaa AIDSin etenemiseen. Huolet lisääntyvät erityisesti potilailla, joita hoidetaan kahdella lääkepohjaisella hoito-ohjelmalla, mukaan lukien pitkävaikutteiset injektiohoidot (LAI ART) tai pre-altistusprofylaksia (PreP). Maailmanlaajuisesti raportoitujen tärkeiden HIV-1:n DRM:ien esiintyvyys vaihtelee 5–25 %:n välillä, kun taas lisälaitteiden (polymorfisten) DRM:ien tapauksessa jopa 50 %. On raportoitu, että korkean tulotason maissa hankittuja DRM:itä sisältävien sekvenssien esiintyvyys on laskussa, mutta välittyneen resistenssin osuus on selvästi kasvamassa hankittujen DRM:ien osaan verrattuna ja saavuttaa jopa 70 % kaikista DRM-tapauksista.

Tutkimuksen tarkoitus ART:n valinta perustuu epidemiologiseen tietoon HIV:n lääkeresistenssimutaatioiden esiintymisestä sekä HIV-genotyyppitestin tuloksista, jotka on arvioitu ennen hoidon aloittamista tai muutosta. DRM:ien esiintyminen ennen ART:n aloittamista voi olla riskitekijä riittämättömälle virologiselle suppressiolle, koska HIV-populaatio kehittyy edelleen (muuttuu replikaatioprosessin virheiden vuoksi). Samoin riittämätön antiretroviraalinen hoito voi ajaa viruspopulaation ensin alemmalle kuntotasolle ja sitten korkeammalle kuntotasolle. Koska HIV-lääkeresistenssin malli muuttuu jatkuvasti (uusien mutaatioiden ilmaantuminen) ja hoitoon otettiin uusia lääkkeitä, mukaan lukien kaksi lääkepohjaista hoito-ohjelmaa, kuten LAI ART, päätimme suorittaa tutkimuksen, joka määrittää HIV:n tyypin ja esiintymistiheyden. DRM:t (mukaan lukien NRTI ja NNRTI - RPV, 3TC ja InSTI - CAB, DTG) aiemmin hoitamattomien potilaiden populaatiossa sekä potilailla, joilla on ART-virologinen vajaatoiminta. Tulokset voivat auttaa arvioimaan ART:n epäonnistumisen riskiä, ​​mukaan lukien LAI, ja määrittämään ART-hoito-ohjelmia.

Metodologia Pyrimme tekemään monikeskus-, havainnointi-, poikkileikkaustutkimuksen. Potilastiedot poimitaan 2 vuoden ajalta (2023 - 2024). Rekrytointipaikkana on kolme kliinistä keskusta Puolassa (kaksi Varsovassa ja yksi Ostródassa). Osallistumiskriteerit ovat: diagnoosi HIV-1-infektiolla, ikä 18 vuotta tai vanhempi. Keräämme epidemiologisia tietoja, kuten: ikä, sukupuoli, BMI, tartuntareitti sekä kliiniset ja laboratoriolöydökset: HIV-viruskuorma, lymfosyyttien CD4-määrä ja CD4:CD8-suhde (diagnoosin/hoidon vaihdon yhteydessä), AIDSin esiintyminen - sairauksien määrittely, toteutettu ART-hoito. Kaikilla potilailla ennen ART:n aloittamista arvioidaan HIV-1:n DRM:ien esiintyminen nukleosidisten käänteiskopioijaentsyymin estäjien (NRTI), ei-nukleosidisten käänteiskopioijaentsyymin estäjien (NNRTI), proteaasi-inhibiittoreiden (PI) ja integraasiestäjien (InSTI) suhteen. osa rutiinihoitoa.

HIV-1-proteaasia (PR) ja käänteiskopioijaentsyymiä (RT) koodaavan alueen lääkeresistenssin genotyypitys suoritetaan Sangerin sekvensointimenetelmän perusteella käyttäen kaupallisesti saatavilla olevaa ViroSeq HIV-1 -genotyypitysjärjestelmää (Abbott Molecular, Des Plains, IL, USA) ). Analyysimenettely suoritetaan valmistajan ohjeiden mukaisesti. HIV-1 RNA uutetaan manuaalisesti 0,5 ml:sta kerättyjä plasmanäytteitä saostus- ja sentrifugointivaiheilla, minkä jälkeen suoritetaan käänteistranskriptio MuLV-käänteiskopioijaentsyymillä. DNA-tuotteet, jotka vastaavat 1,8 kb:n pol-alueen fragmenttia, muodostetaan PCR:ssä AmpliTaq Gold DNA -polymeraasin kanssa sen jälkeen, kun on esi-inkuboitu Uracil-N-Glycosylase (UNG) -entsyymin kanssa. Kun HIV-1-integraasia koodaava alue sekvensoidaan, ViroSeq HIV-1 -integraasigenotyypitysjärjestelmää (Celera Diagnostics, Alameda, CA, USA) sovelletaan yksivaiheisella RT-PCR-amplifikaatioreaktiolla. Saadut PCR-tuotteet puhdistetaan entsymaattisesti inkuboimalla Exo-SAP-seoksen kanssa (Exonukleaasi I + Shrimp Alkaline Fosphatase), laimennetaan tarvittaessa, leimataan fluoresoivasti reaktiossa sopivien terminaattoreiden kanssa ja sekvensoidaan ABI Prism 3130 Genetic Analyzerilla käyttämällä tiedonkeruuohjelmistoa (Applied Biosystems). . Tuloksena saadut sekvenssikromatogrammit kootaan ja analysoidaan käyttämällä ViroSeq Genotyping System Software -ohjelmistoa (Abbott Molecular). Lääkeresistenssiin liittyvät mutaatiot proteaasissa, integraasissa ja käänteistranskriptaasissa tunnistetaan. Kelvolliset, laatutarkistetut pol-sekvenssit toimitetaan Stanfordin yliopiston HIV-lääkeresistenssitietokantaan (http://hivdb.stanford.edu) havaittujen geneettisten varianttien merkityksen tulkinnan mahdollisten erojen vertailua varten. HIV-1-alatyypeille ja sirkulaarisille rekombinanttimuodoille (CRF) käytetään osittaisten pol-lähetettyjen sekvenssien määritystä REGA HIV-1 -alatyypitystyökalun versiota 3.0.

Kerättyjen tietojen tilastollinen arviointi suoritetaan PLWH:n alaryhmissä, joissa on primaarisia ja sekundaarisia HIV DRM:itä. Analyysi tehdään myös potilaiden alaryhmissä, joilla on erilainen HIV-1-infektio. Shapiro-Wilk-testi suoritetaan analysoitujen muuttujien jakaumien normaaliuden todentamiseksi. Studentin t-testiä tai Mann-Whitney U -testiä käytetään jatkuvien muuttujien keskiarvon eron arvioimiseen ja χ 2 - tai Fisherin eksaktit testit kategorisille muuttujille. P-arvoa <0,05 pidetään tilastollisesti merkitsevänä. Tilastolliset analyysit suoritetaan Python 3.7 -ohjelmistolla ja Statistica 13.1 -ohjelmalla (StatSoft Poland, Krakova, Puola).

Kliininen tutkimus on saanut myönteisen lausunnon Varsovan lääketieteellisen yliopiston bioetiikkakomitealta (lupanumero: AKBE/72/2023). Kaikki analysoidut potilaiden tiedot anonymisoidaan täysin. Tutkimus noudattaa Helsingin julistuksen periaatteita.