原発性悪性骨腫瘍標本におけるカドヘリン6タンパク質（CDH6）の発現レベルと、予後評価におけるその臨床応用の調査

1. 免疫組織化学を使用して、骨肉腫患者とユーイング肉腫の組織学的白いスライドにおけるCDH6の発現レベルを検出する可能性を評価します。 標本監視のインフォームドコンセントフォームが最初に署名されました。 穿刺生検の間、約1cm3の体積を伴う新鮮な組織（骨組織ではなく軟部組織成分）を採取し、ホルマリン溶液で固定し、厚さ5ミクロンの組織スライス（白いスライス）を切断し、塗り、焼きました。 免疫組織化学染色は、CDH6発現分析（XP）®カドヘリン-6（D3T3I）ウサギmab猫に使用されました。

2. 治療プロセスとフォローアップ私たちのセンターでの骨肉腫の日常的なネオアジュバント化学療法レジメンには、シスプラチン、高用量のドキソルビシン、メトトレキセート、およびイオスファミドの連続的な使用が含まれますが、VDC-IEレジメンはユーイング肉腫に使用されます（図3.1.1Aを参照してください。 詳細についてはB）。 骨肉腫細胞の有意な不均一性のため、各薬物の影響を受けた細胞の亜集団は同じではなく、薬物後の壊死細胞と溶解した細胞の亜集団にも違いがあります。 患者組織スライスにおけるCDH6の発現レベルは、化学療法の感度とともに動的に変化します。 臨床評価の実施中、機会が与えられた場合、組織切片のCDH6レベルの変化を比較して、有効性モニタリングの価値を評価しようとします。

   患者は通常、ネオアジュバント化学療法後に外科的治療を受け、手術後に腫瘍の負担が急激に減少します。 手術中に得られた総腫瘍標本は、適格な腫瘍組織サンプル（少なくとも1cm3の量）で保持する必要があります。 腫瘍治療プロセス中に、手術の機会がある場合、CDH6発現レベルの変化を監視するために、腫瘍組織の生検または切除を再度実施する必要があります。 腫瘍治療の臨床評価は、2か月ごとに研究の終了または患者の死亡まで実施する必要があります。

   研究全体には、スクリーニング期間、採血および標本保持期間、および追跡期間が含まれます。 この研究のすべての参加者は、すべての包含および除外基準を満たす必要があります。

   スクリーニング期間中、潜在的な参加者は、インフォームドコンセントフォームに署名した後、研究の適格性評価を受けます。 被験者は、原発腫瘍部位の強化されたCTまたはMRI、胸部平野スキャンCT、ECT全身骨イメージング、または全身PET/CTを含む、ネオアジュバント化学療法の14日以内に疾患のX線撮影評価を受ける必要があります。

   被験者は、診断と治療のルーチンに従って化学療法と外科的治療を受け、実験で設計された時点で、被験者のルーチン化学療法と手術の前後に、病理学部門は3つの白いスライドを採取し、それぞれ4ミクロン、塗抹標本と焼きジェルを撮影し、免疫組織化学染色を行います。

   追跡期間中、被験者は化学療法と外科的治療を完了しましたが、生存状態と腫瘍学状態のフォローアップを受け取り、すべてのフォローアップはセンターでの日常的な治療になります。

3. 腫瘍組織におけるCDH6、β-カテニン、およびCDH17の発現を分析するために、免疫組織化学染色にFFPE腫瘍組織サンプルを使用します。

免疫組織化学染色：

一次抗体：CDH6ウサギモノクローナル抗体（D3T3I）; β-カテニンウサギモノクローナル抗体（D10A8）; CDH17マウスモノクローナル抗体（Xianxiang内部抗体）;二次抗体検出システム：結合ポリマー検出キット；抗体希釈液：CST、8112L、＃38；陽性写真：低、中、高発現細胞株のFFPEセクション。染色プログラムは、Xianxiangの確立された方法を使用しています。

病理学的解釈：

半定量分析にはHスコアを使用します。 Hスコアは、セル染色の割合に対応する強度値（0 =負、1 = 1+、2 = 2+、3 = 3+）を乗算し、0から300の範囲です。

腫瘍細胞染色強度値の解釈は次のとおりです。

高発現（3+）：X4倍率で強い細胞膜染色および/または細胞質染色が観察されました。中程度の発現（2+）：X10またはX20倍率で細胞膜染色が観察されました。低発現（1+）：x40倍率で弱い細胞膜染色および/または細胞質染色が観察されました。陰性（0）：腫瘍細胞では、細胞膜染色および/または細胞質染色は観察されませんでした。