Kaadheriini 6 -proteiinin (CDH6) ekspressiotason tutkiminen primaarisissa pahanlaatuisissa luukasvaimenäytteissä ja sen kliininen sovellus ennustearvioinnissa

1. Arvioi immunohistokemian käytön toteutettavuus CDH6: n ekspressiotason havaitsemiseksi osteosarkoomaa ja Ewingin sarkoomaa sairastavien potilaiden histologisissa valkoisissa liukuissa biologisena markkerina prognostisen seurannan potilaan alkuperäisen vierailun kliinisesti korkealaatuisena osteosarkooman tai Ewingin sarkoomana. Näytteen seurannan tietoinen suostumuslomake allekirjoitettiin ensin. Punktiobiopsian aikana otettiin tuore kudos (pehmytkudoksen komponentti, ei luukuola), jonka tilavuus oli noin 1 cm3, kiinnitettiin formaliiniliuoksella ja kudosviipaleet (valkoiset viipaleet), joiden paksuus 5 mikronia leikattiin, levitettiin ja paistettiin. Immunohistokemian värjäytymistä käytettiin CDH6-ekspressioanalyysiin (XP) ® kadheriini-6 (D3T3I) kanin MAb-kissa:#48111, CellSignaling Technology）。

2. Hoitoprosessi ja seuranta rutiininomainen uusadjuvanttinen kemoterapiaohjelma osteosarkooman keskuksessa sisältää sisplatiinin, suuriannoksisen doksorubisiinin, metotreksaatin ja ifosfamidin peräkkäisen käytön, kun taas VDC-IE-ohjelmaa käytetään Sarkoomassa (katso kuva 3.1.1a ,A,, B Lisätietoja). Osteosarkoomasolujen merkittävän heterogeenisyyden vuoksi kunkin lääkkeen vaikuttavien solujen alaryhmät eivät ole samoja, ja nekroottisten ja hajotettujen solujen alaryhmissä on myös eroja lääkityksen jälkeen. CDH6: n ekspressiotaso potilaan kudosviipaleissa muuttuu dynaamisesti kemoterapian herkkyyden myötä. Kun kliinisiä arviointeja tehdään, jos heille annetaan mahdollisuus, yritämme verrata kudososien CDH6 -tasojen muutoksia niiden arvon arvioimiseksi tehokkuuden seurantaan.

   Potilaille tehdään yleensä kirurginen hoito neoadjuvanttisen kemoterapian jälkeen, ja kasvaintaakka vähenee voimakkaasti leikkauksen jälkeen. Leikkauksen aikana saadut bruttokasvaimenäytteet tulisi säilyttää pätevien tuumorikudoksenäytteillä (vähintään 1 cm3 tilavuutena). Kasvaimenhoitoprosessin aikana, jos on olemassa mahdollisuus leikkaukseen, biopsia tai kasvainkudoksen resektio tulisi suorittaa uudelleen CDH6 -ekspressiotasojen muutosten seuraamiseksi. Kasvainhoidon kliininen arviointi tulisi suorittaa kahden kuukauden välein tutkimuksen tai potilaan kuoleman loppuun saakka.

   Koko tutkimus sisältää seulontajakson, verenkeruu- ja näytteiden pidättämisajan ja seurantajakson. Kaikkien tutkimuksen osanottajien on täytettävä kaikki osallisuus- ja poissulkemiskriteerit.

   Seulontajakson aikana potentiaalisille osallistujille tehdään tutkimuksen kelpoisuusarviointi tietoisen suostumuslomakkeen allekirjoittamisen jälkeen. Koehenkilöille on suoritettava taudin radiografinen arviointi 14 päivän kuluessa ennen neoadjuvanttista kemoterapiaa, mukaan lukien ensisijaisen kasvainkohdan tehostettu CT tai MRI, rintakehän tavallinen skannaus CT, ECT koko kehon luun kuvantaminen tai koko kehon PET/CT.

   Koehenkilöt saavat kemoterapiaa ja kirurgista hoitoa diagnoosi- ja hoitorutiinin mukaisesti, ja kokeessa suunnitelluissa solmuissa ennen koehenkilöiden rutiinikemoterapiaa ja leikkausta patologian osasto ottaa 3 valkoista liukua, jokainen mittaa 4 mikronia, rasva- ja leipomogeeliä ja suorittaa immunohistokemiallisen värjäämisen.

   Seurantajakson aikana koehenkilöt ovat suorittaneet kemoterapian ja kirurgisen hoidon, mutta saavat silti seurannan selviytymistilastaan ​​ja onkologiatilastaan, ja kaikki seuranta on rutiinihoito keskustassamme.

3. Käytämme FFPE -kasvainkudosnäytteitä immunohistokemialliseen värjäytymiseen CDH6: n, β -kateniinin ja CdH17: n ekspression analysoimiseksi kasvainkudoksessa.

Immunohistokemiallinen värjäys:

Primaarinen vasta -aine: CDH6 -kanin monoklonaalinen vasta -aine (D3T3I); β - kateniini kanin monoklonaalinen vasta -aine (D10A8); CDH17 -hiiren monoklonaalinen vasta -aine (Xianxiangin sisäinen vasta -aine); Toissijainen vasta -aineiden havaitsemisjärjestelmä: Bond -polymeerin puhdistuksen havaitsemispakkaus ； Vasta -aineen laimennus: CST, 8112L,#38 ； Positiiviset valokuvat: FFPE -osat, joissa on matala, keskipitkä ja korkea ekspressiosolulinja; Värjäysohjelmassa käytetään Xianxiangin vakiintunutta menetelmää.

Patologinen tulkinta:

Käytä H-pistemäärää osittain kvantitatiiviseen analyysiin. H-pistemäärä on soluvärjäysprosentin prosenttiosuus kerrottuna vastaavilla intensiteettiarvoilla (0 = negatiivinen, 1 = 1+, 2 = 2+, 3 = 3+), välillä 0-300.

Kasvainsolujen värjäysintensiteettiarvojen tulkinta on seuraava:

Korkea ekspressio (3+): Vahva solukalvon värjäys ja/tai sytoplasminen värjäys havaittiin X4: n suurennuksella; Kohtalainen ekspressio (2+): Solukalvon värjäys havaittiin X10: n tai X20: n suurennuksella; Matala ekspressio (1+): Heikko solukalvojen värjäys ja/tai sytoplasminen värjäys havaittiin x40: n suurennuksella; Negatiivinen (0): Kasvainsoluissa ei havaittu solukalvojen värjäystä ja/tai sytoplasmista värjäystä.