Onderzoek naar het expressieniveau van cadherine 6 -eiwit (CDH6) in primaire kwaadaardige bottumorspecimens en de klinische toepassing ervan bij de beoordeling van de prognose

1. Evalueer de haalbaarheid van het gebruik van immunohistochemie om het expressieniveau van CDH6 te detecteren in histologische witte dia's van patiënten met osteosarcoom en het sarcoom van Ewing als een biologische marker voor prognostische monitoring van het aanvankelijke bezoek van de patiënt werd klinisch gediagnosticeerd als hoogwaardige osteosarcoma of Ewing's Sarcoma. Het geïnformeerde toestemmingsformulier voor monsterbewaking werd eerst ondertekend. Tijdens de biopsie van het punctie werd vers weefsel (zacht weefselcomponent, niet botweefsel) met een volume van ongeveer 1 cm3 genomen, gefixeerd met formaline -oplossing en weefselplakjes (witte plakjes) met een dikte van 5 micron werden gesneden, besmeurd en gebakken. Immunohistochemie-kleuring werd gebruikt voor CDH6 Expression Analysis (XP) ® Cadherin-6 (D3T3I) Konijnen MAB Cat:#48111, Cellenignaling Technology）。。

2. Behandelingsproces en follow-up Het routinematige neoadjuvante chemotherapie-regime voor osteosarcoom in ons centrum omvat sequentieel gebruik van cisplatine, hoge dosis doxorubicine, methotrexaat en ifosfamide, terwijl het VDC-IE-regime wordt gebruikt voor Ewing Sarcoma (zie figuur 3.1.1a, B voor meer informatie). Vanwege de significante heterogeniteit van osteosarcoomcellen zijn de subpopulaties van cellen die door elk geneesmiddel worden getroffen niet hetzelfde en zijn er ook verschillen in de subpopulaties van necrotische en gelyseerde cellen na medicatie. Het expressieniveau van CDH6 in plakjes patiëntenweefsel zal dynamisch veranderen met de gevoeligheid van chemotherapie. Hoewel we klinische evaluaties uitvoeren, zullen we, indien de kans krijgen, proberen de veranderingen in CDH6 -niveaus in weefselsecties te vergelijken om hun waarde voor werkzaamheidsbewaking te beoordelen.

   Patiënten ondergaan meestal chirurgische behandeling na neoadjuvante chemotherapie en de tumorlast neemt sterk af na de operatie. Het bruto tumormonster dat tijdens de operatie wordt verkregen, moet worden behouden met gekwalificeerde tumorweefselmonsters (ten minste 1 cm3 in volume). Tijdens het tumorbehandelingsproces, als er een mogelijkheid is voor chirurgie, moet biopsie of resectie van tumorweefsel opnieuw worden uitgevoerd om veranderingen in CDH6 -expressieniveaus te volgen. De klinische evaluatie van tumorbehandeling moet om de twee maanden worden uitgevoerd tot het einde van het onderzoek of de overlijden van de patiënt.

   De hele studie omvat een screeningperiode, bloedverzameling en het bewaarperiode van het exemplaar en de follow-upperiode. Alle deelnemers aan het onderzoek moeten voldoen aan alle inclusie- en uitsluitingscriteria.

   Tijdens de screeningperiode zullen potentiële deelnemers een in aanmerking komende beoordeling voor het onderzoek ondergaan na het ondertekenen van het geïnformeerde toestemmingsformulier. Proefpersonen moeten binnen 14 dagen voorafgaand aan neoadjuvante chemotherapie radiografische evaluatie van de ziekte ondergaan, inclusief verbeterde CT of MRI van de primaire tumorplaats, CT-vlaktecan CT, ECT Bot-beeldvorming van het hele lichaam of PET/CT van het hele lichaam.

   De proefpersonen ontvangen chemotherapie en chirurgische behandeling volgens de diagnose- en behandelingsroutine, en op de tijd die in het experiment is ontworpen, voor en na de routinematige chemotherapie en chirurgie van de proefpersonen, zal de pathologieafdeling 3 witte dia's nemen, elk meten van 4 micron, uitstrijkje en bakgel en immunohistochemische stin.

   Tijdens de follow-upperiode hebben de proefpersonen chemotherapie en chirurgische behandeling voltooid, maar zullen ze nog steeds een follow-up krijgen van hun overlevingsstatus en oncologiestatus, en alle follow-up zal een routinematige behandeling in ons centrum zijn.

3. We zullen FFPE -tumorweefselmonsters gebruiken voor immunohistochemische kleuring om de expressie van CDH6, β - catenine en CDH17 in tumorweefsel te analyseren.

Immunohistochemische kleuring:

Primair antilichaam: CDH6 Rabbit monoklonaal antilichaam (D3T3I); β - Catenin Rabbit monoklonaal antilichaam (D10A8); CDH17 Muismonoklonaal antilichaam (Xianxiang intern antilichaam); Secundair antilichaamdetectiesysteem: bindpolymeer verfijnd detectiekit ； Antilichaamverdunningsmiddel: CST, 8112L,#38 ； Positieve foto's: FFPE -secties van lage, medium en hoge expressiecellijnen; Het kleurprogramma gebruikt de gevestigde methode van Xianxiang.

Pathologische interpretatie:

Gebruik H-score voor semi-kwantitatieve analyse. H-score is de som van het percentage celkleuring vermenigvuldigd met de overeenkomstige intensiteitswaarden (0 = negatief, 1 = 1+, 2 = 2+, 3 = 3+), variërend van 0 tot 300.

De interpretatie van de intensiteitswaarden van tumorcellen is als volgt:

Hoge expressie (3+): sterke celmembraankleuring en/of cytoplasmatische kleuring werden waargenomen onder X4 -vergroting; Matige expressie (2+): celmembraankleuring werd waargenomen bij X10- of X20 -vergroting; Lage expressie (1+): zwakke celmembraankleuring en/of cytoplasmatische kleuring werden waargenomen bij X40 -vergroting; Negatief (0): Er werd geen celmembraankleuring en/of cytoplasmatische kleuring waargenomen in tumorcellen.