Изучение уровня экспрессии белка кадгерина 6 (CDH6) в первичных образцах опухоли злокачественной кости и его клиническое применение в оценке прогноза

1. Оценить осуществимость использования иммуногистохимии для обнаружения уровня экспрессии CDH6 в гистологических белых слайдах пациентов с остеосаркомой, а саркома Юинга в качестве биологического маркера для прогнозического мониторинга начального визита пациента была клинически диагностирована как высококлассная остеосаркома или саркома Юинга. Форма информированного согласия для мониторинга образцов была подписана первым. Во время биопсии в пункции была взята свежая ткань (компонент мягких тканей, а не костная ткань) с объемом около 1 см3, фиксировали с помощью формалинового раствора, а срезы ткани (белые срезы) с толщиной 5 микрон разрезали, смазывали и выпекали. Окрашивание иммуногистохимии использовали для анализа экспрессии CDH6 (XP) ® Cadherin-6 (D3T3I) кроличья MAB Cat:#48111, Технология Cellsignaling)。。。。

2. Процесс лечения и наблюдение Обычная неоадъювантная схема химиотерапии для остеосаркомы в нашем центре включает последовательное использование цисплатина, высоких доз доксорубицина, метотрексата и ifosfamide, в то время как режим VDC-I-IE используется для саркомы ewing (см. Рисунок 3.1. B для деталей). Из -за значительной гетерогенности клеток остеосаркомы, субпопуляции клеток, пораженных каждым препаратом, не одинаковы, и существуют также различия в субпопуляциях некротических и лизированных клеток после лекарства. Уровень экспрессии CDH6 в срезах ткани пациента динамически изменится с чувствительностью химиотерапии. При проведении клинических оценок, если мы получим эту возможность, мы попытаемся сравнить изменения уровней CDH6 в срезах ткани, чтобы оценить их ценность для мониторинга эффективности.

   Пациенты обычно проходят хирургическое лечение после неоадъювантной химиотерапии, и нагрузка на опухоль резко уменьшается после операции. Образец валовой опухоли, полученный во время операции, должен быть сохранен с помощью квалифицированных образцов опухолевой ткани (по меньшей мере 1 см3 по объему). Во время процесса лечения опухоли, если есть возможность для операции, биопсия или резекция опухолевой ткани должна быть снова выполнена для мониторинга изменений в уровнях экспрессии CDH6. Клиническая оценка опухолевого лечения должна проводиться каждые два месяца до окончания исследования или смерти пациента.

   Все исследование включает в себя период скрининга, сбор крови и период удержания образцов, а также период наблюдения. Все участники исследования должны соответствовать всем критериям включения и исключения.

   В течение периода проверки потенциальные участники пройдут оценку права на исследование после подписания формы информированного согласия. Субъекты должны пройти рентгенографическую оценку заболевания в течение 14 дней до неоадъювантной химиотерапии, включая усиление КТ или МРТ первичного сайта опухоли, CT-сканирования грудной клетки, т.е. визуализации костей целого тела или PET/CT целого тела.

   Субъекты будут получать химиотерапию и хирургическое лечение в соответствии с процедурой диагностики и лечения, а в то время узлы, разработанные в эксперименте, до и после рутинной химиотерапии и хирургии субъектов, каждая из них будет принимать 3 белых слайда, каждый из которых измеряет 4 микрона, мазок и бейс -гель и выполняет иммуногистохимическое окрашивание.

   В течение последующего периода субъекты завершили химиотерапию и хирургическое лечение, но все равно получат последующее наблюдение за статусом выживания и статусом онкологии, и все последующее наблюдение будет обычным лечением в нашем центре.

3. Мы будем использовать образцы опухолевой ткани FFPE для иммуногистохимического окрашивания для анализа экспрессии CDH6, β -катенина и CDH17 в опухолевой ткани.

Иммуногистохимическое окрашивание:

Первичное антитело: моноклональное антитело CDH6 кролика (D3T3i); β - моноклональное антитело кролика катенина (D10A8); Моноклональное антитело мыши CDH17 (внутреннее антитело Xianxiang); Система обнаружения вторичных антител: комплект для определения уточнения полимеров связи ； Диспроизводство антитела: CST, 8112L,#38 ； Положительные фотографии: срезы FFPE низких, средних и высоких клеточных линий экспрессии; В программе окрашивания используется установлен метод Сяньксианга.

Патологическая интерпретация:

Используйте H-оценку для полу-количественного анализа. H-показатель-это сумма процента окрашивания ячейки, умноженного на соответствующие значения интенсивности (0 = отрицательный, 1 = 1+, 2 = 2+, 3 = 3+), в диапазоне от 0 до 300.

Интерпретация значений окрашивания опухолевыми клетками выглядит следующим образом:

Высокая экспрессия (3+): сильное окрашивание клеточной мембраны и/или цитоплазматическое окрашивание наблюдались при увеличении x4; Умеренная экспрессия (2+): окрашивание клеточной мембраны наблюдалось при увеличении x10 или X20; Низкая экспрессия (1+): слабый окрашивание клеточной мембраны и/или цитоплазматическое окрашивание наблюдались при увеличении X40; Отрицательный (0): окрашивание клеточной мембраны и/или цитоплазматическое окрашивание не наблюдалось в опухолевых клетках.