Explorando o nível de expressão da proteína da caderina 6 (CDH6) em amostras de tumores ósseos malignos primários e sua aplicação clínica na avaliação de prognóstico

1. Avalie a viabilidade do uso da imuno-histoquímica para detectar o nível de expressão de CDH6 em lâminas brancas histológicas de pacientes com osteossarcoma e sarcoma de Ewing como um marcador biológico para o monitoramento prognóstico da visita inicial do paciente. O formulário de consentimento informado para o monitoramento de amostras foi assinado primeiro. Durante a biópsia da punção, foi obtido tecido fresco (componente de tecido mole, não tecido ósseo) com um volume de cerca de 1cm3, fixado com solução de formalina e fatias de tecido (fatias brancas) com uma espessura de 5 microns foram cortadas, manchadas e assadas. A coloração da imuno-histoquímica foi usada para análise de expressão de CDH6 (XP) ® Cadherin-6 (D3T3i) Rabbit MAb Cat:#48111, Cellingning Technology）。。

2. Processo de tratamento e acompanhamento do regime de quimioterapia neoadjuvante de rotina para osteossarcoma em nosso centro inclui uso seqüencial de cisplatina, doxorrubicina em altas doses, metotrexato e ifosfamida, enquanto o regime VDC-IE é usado para o sarcoma de ewing (veja a Figura 3.1.1a, B para detalhes). Devido à heterogeneidade significativa das células osteossarcoma, as subpopulações das células afetadas por cada medicamento não são as mesmas e também existem diferenças nas subpopulações de células necróticas e lisadas após a medicação. O nível de expressão de CDH6 nas fatias de tecido paciente mudará dinamicamente com a sensibilidade da quimioterapia. Ao realizar avaliações clínicas, se tiveram a oportunidade, tentaremos comparar as alterações nos níveis de CDH6 nas seções de tecido para avaliar seu valor para o monitoramento da eficácia.

   Os pacientes geralmente sofrem tratamento cirúrgico após quimioterapia neoadjuvante, e a carga do tumor diminui acentuadamente após a cirurgia. A amostra de tumor bruta obtida durante a cirurgia deve ser retida com amostras qualificadas de tecido tumoral (pelo menos 1cm3 em volume). Durante o processo de tratamento do tumor, se houver uma oportunidade de cirurgia, biópsia ou ressecção do tecido tumoral deve ser realizada novamente para monitorar alterações nos níveis de expressão de CDH6. A avaliação clínica do tratamento do tumor deve ser realizada a cada dois meses até o final do estudo ou a morte do paciente.

   Todo o estudo inclui um período de triagem, coleta de sangue e período de retenção de amostras e período de acompanhamento. Todos os participantes do estudo devem atender a todos os critérios de inclusão e exclusão.

   Durante o período de triagem, os participantes em potencial passarão por avaliação de elegibilidade para o estudo após assinar o formulário de consentimento informado. Os indivíduos devem sofrer avaliação radiográfica da doença dentro de 14 dias antes da quimioterapia neoadjuvante, incluindo tomografia computadorizada ou ressonância magnética aprimorada do local primário do tumor, tomografia computadorizada da planície de tórax, imagem óssea de corpo inteiro ECT ou PET/CT de corpo inteiro.

   Os indivíduos receberão quimioterapia e tratamento cirúrgico de acordo com a rotina de diagnóstico e tratamento e, na época, os nós projetados no experimento, antes e depois da quimioterapia e cirurgia de rotina dos sujeitos, o departamento de patologia levará 3 slides brancos, cada um medindo 4 microns, manchas e assam gel e realizará manchas imuno -histoquímicas.

   Durante o período de acompanhamento, os sujeitos concluíram a quimioterapia e o tratamento cirúrgico, mas ainda receberão acompanhamento sobre seu status de sobrevivência e status de oncologia, e todo o acompanhamento será tratamento de rotina em nosso centro.

3. Usaremos amostras de tecido tumoral FFPE para coloração imuno -histoquímica para analisar a expressão de CDH6, β - catenina e CDH17 no tecido tumoral.

Coloração imuno -histoquímica:

Anticorpo primário: anticorpo monoclonal de coelho CDH6 (D3T3i); β - anticorpo monoclonal de coelho da catenina (D10A8); Anticorpo monoclonal de camundongo CDH17 (anticorpo interno Xianxiang); Sistema de detecção de anticorpos secundários: Kit de detecção de polímero de ligação ； Diluente de anticorpo: CST, 8112L,#38 ； Fotos positivas: seções do FFPE de linhas celulares de baixa, média, média e alta expressão; O programa de coloração usa o método estabelecido de Xianxiang.

Interpretação patológica:

Use o escore H para análise semi-quantitativa. H-escore é a soma da porcentagem de coloração de células multiplicada pelos valores de intensidade correspondentes (0 = negativo, 1 = 1+, 2 = 2+, 3 = 3+), variando de 0 a 300.

A interpretação dos valores de intensidade de coloração de células tumorais é a seguinte:

Alta expressão (3+): fortes coloração da membrana celular e/ou coloração citoplasmática foram observados sob a ampliação de X4; Expressão moderada (2+): a coloração da membrana celular foi observada na ampliação X10 ou X20; Expressão baixa (1+): coloração fraca da membrana celular e/ou coloração citoplasmática foram observadas na ampliação de X40; Negativo (0): Não foi observada coloração da membrana celular e/ou coloração citoplasmática nas células tumorais.