Undersøgelse af ekspressionsniveauet for cadherin 6 -protein (CDH6) i primære maligne knogletumorprøver og dets kliniske anvendelse i prognosevurdering

1. Evaluer gennemførligheden af ​​at bruge immunohistokemi til at detektere ekspressionsniveauet af CDH6 i histologiske hvide objektglas af patienter med osteosarkom og Ewings sarkom som en biologisk markør for prognostisk overvågning af patientens første besøg blev klinisk diagnosticeret som højgraderet Osteosarcoma eller Ewings sarcoma. Den informerede samtykkeformular til prøveovervågning blev underskrevet først. Under punkteringsbiopsien blev frisk væv (blødt vævskomponent, ikke knoglevæv) med et volumen på ca. 1 cm3 taget, fastgjort med formalinopløsning og vævsskiver (hvide skiver) med en tykkelse på 5 mikron blev skåret, smurt og bagt. Immunohistokemi-farvning blev anvendt til CDH6-ekspressionsanalyse (XP) ® Cadherin-6 (D3T3I) Rabbit MAB Cat:#48111, CellSignaling Technology）。

2. Behandlingsproces og opfølgning Den rutinemæssige neoadjuvant kemoterapi-regime for osteosarkom i vores center inkluderer sekventiel anvendelse af cisplatin, højdosis doxorubicin, methotrexat og ifosfamid, mens VDC-IE-regimet bruges til Ewing sarcoma (se figur 3.1a, B for detaljer). På grund af den signifikante heterogenitet af osteosarkomceller er subpopulationer af celler, der er påvirket af hvert lægemiddel, ikke de samme, og der er også forskelle i subpopulationer af nekrotiske og lysede celler efter medicin. Ekspressionsniveauet af CDH6 i patientvævsskiver vil dynamisk ændre sig med følsomheden af ​​kemoterapi. Mens vi udfører kliniske evalueringer, hvis vi får mulighed, vil vi forsøge at sammenligne ændringerne i CDH6 -niveauer i vævssektioner for at vurdere deres værdi for effektivitetsovervågning.

   Patienter gennemgår normalt kirurgisk behandling efter neoadjuvant kemoterapi, og tumorbelastningen falder kraftigt efter operationen. Brutto -tumorprøven opnået under operationen skal tilbageholdes med kvalificerede tumorvævsprøver (mindst 1 cm3 i volumen). Under tumorbehandlingsprocessen, hvis der er en mulighed for operation, skal biopsi eller resektion af tumorvæv igen udføres for at overvåge ændringer i CDH6 -ekspressionsniveauer. Klinisk evaluering af tumorbehandling skal udføres hver anden måned indtil slutningen af ​​undersøgelsen eller patientens død.

   Hele undersøgelsen inkluderer en screeningsperiode, blodopsamling og eksemplaropbevaringsperiode og opfølgningsperiode. Alle deltagere i undersøgelsen skal opfylde alle kriterier for inkludering og ekskludering.

   I løbet af screeningsperioden gennemgår potentielle deltagere støtteberettigelsesvurdering for undersøgelsen efter underskrivelsen af ​​formularen informeret samtykke. Personer skal gennemgå radiografisk evaluering af sygdommen inden for 14 dage før neoadjuvant kemoterapi, herunder forbedret CT eller MR af det primære tumorsted, brystet almindelig scan CT, ECT hele kroppens knogleafbildning eller hele kroppen PET/CT.

   Personer vil modtage kemoterapi og kirurgisk behandling i henhold til diagnosen og behandlingsrutinen, og på det tidspunkt, knudepunkter designet i eksperimentet, før og efter forsøgspersonernes rutinemæssige kemoterapi og kirurgi, vil patologafdelingen tage 3 hvide lysbilleder, der hver måler 4 mikron, udstregning og bager gel og udfører immunohistokemisk farvning.

   I opfølgningsperioden har forsøgspersoner afsluttet kemoterapi og kirurgisk behandling, men vil stadig modtage opfølgning af deres overlevelsesstatus og onkologistatus, og al opfølgning vil være rutinemæssig behandling i vores centrum.

3. Vi vil bruge FFPE -tumorvævsprøver til immunohistokemisk farvning til analyse af ekspressionen af ​​CDH6, ß - catenin og CDH17 i tumorvæv.

Immunohistokemisk farvning:

Primært antistof: CDH6 -kanin monoklonalt antistof (D3T3I); ß - catenin kanin monoklonalt antistof (D10A8); CDH17 musemonoklonalt antistof (Xianxiang internt antistof); Sekundært antistofdetektionssystem: Bond Polymer Refine Detection Kit ； Antistof fortyndingsmiddel: CST, 8112L,#38 ； Positive fotos: FFPE -sektioner af lave, mellemstore og høje ekspressionscellelinjer; Farvningsprogrammet bruger den etablerede metode til Xianxiang.

Patologisk fortolkning:

Brug H-score til semi-kvantitativ analyse. H-score er summen af ​​procentdelen af ​​cellefarvning ganget med de tilsvarende intensitetsværdier (0 = negativ, 1 = 1+, 2 = 2+, 3 = 3+), der spænder fra 0 til 300.

Fortolkningen af ​​tumorcellefarvningsintensitetsværdier er som følger:

Høj ekspression (3+): stærk cellemembranfarvning og/eller cytoplasmisk farvning blev observeret under X4 -forstørrelse; Moderat ekspression (2+): Cellemembranfarvning blev observeret ved X10 eller X20 forstørrelse; Lav ekspression (1+): svag cellemembranfarvning og/eller cytoplasmisk farvning blev observeret ved X40 -forstørrelse; Negativ (0): Ingen cellemembranfarvning og/eller cytoplasmatisk farvning blev observeret i tumorceller.