Zkoumání úrovně exprese proteinu kadherinu 6 (CDH6) ve vzorcích primárních maligních kostních nádorových vzorků a jeho klinické aplikace při hodnocení prognózy

1. Vyhodnoťte proveditelnost použití imunohistochemie k detekci úrovně exprese CDH6 v histologických bílých sklíčcích pacientů s osteosarkomem a Ewingovým sarkomem jako biologický marker pro prognostické monitorování počáteční návštěvy pacienta. Nejprve byl podepsán formulář informovaného souhlasu pro monitorování vzorků. Během biopsie propíchnutí byla provedena čerstvá tkáň (složka měkké tkáně, nikoli kostní tkáň) s objemem asi 1 cm3, fixováno formalinovým roztokem a plátky tkáně (bílé plátky) s tloušťkou 5 mikronů byly vyříznuty, rozmazány a pečené. Imunohistochemické barvení bylo použito pro CDH6 Expression Analysis (XP) ® Cadherin-6 (D3T3I) králičí kočka:#48111, technologie CellSignaling）。。

2. Proces léčby a sledování rutinní neoadjuvantní chemoterapeutické režimy pro osteosarkom v našem centru zahrnuje sekvenční použití cisplatiny, vysokodávkového doxorubicinu, methotrexátu a ifosfamidu, zatímco režim VDC-IE se používá pro ewing sarkom (viz obrázek 3.1.1.1A,, viz obrázek 3.1.1A,,, viz obrázek 3.1.1. B pro podrobnosti). Vzhledem k významné heterogenitě buněk osteosarkomu nejsou subpopulace buněk postižených každým léčivem stejné a po léku jsou také rozdíly v subpopulacích nekrotických a lyžovaných buněk. Hladina exprese Cdh6 v tkáňových řezech pacienta se dynamicky změní s citlivostí chemoterapie. Při provádění klinických hodnocení, pokud budeme mít příležitost, se pokusíme porovnat změny hladin CDH6 v tkáňových řezech, abychom posoudili jejich hodnotu pro monitorování účinnosti.

   Pacienti se obvykle po chirurgickém zákroku obvykle podrobí chirurgické léčbě po neoadjuvantní chemoterapii a nádorová zátěž po operaci. Hrubý vzorek nádoru získaný během chirurgického zákroku by měl být zachován pomocí kvalifikovaných vzorků nádorové tkáně (nejméně 1 cm3 v objemu). Během procesu léčby nádoru, pokud existuje příležitost pro chirurgický zákrok, biopsie nebo resekci nádorové tkáně, by měla být znovu provedena, aby se monitorovaly změny v hladinách exprese CDH6. Klinické hodnocení léčby nádoru by mělo být prováděno každé dva měsíce až do konce studie nebo smrti pacienta.

   Celá studie zahrnuje screeningové období, sběr krve a doba retenčního vzorku a období sledování. Všichni účastníci studie musí splňovat všechna kritéria pro zařazení a vyloučení.

   Během období screeningu budou potenciální účastníci podrobit hodnocení způsobilosti pro studii po podpisu formuláře informovaného souhlasu. Subjekty musí podstoupit radiografické hodnocení onemocnění do 14 dnů před neoadjuvantní chemoterapií, včetně zvýšené CT nebo MRI primárního místa nádoru, skenování hrudníku CT, ECT celého těla zobrazení kosti nebo celého těla/ct.

   Subjekty budou mít chemoterapii a chirurgickou léčbu podle diagnózy a léčebné rutiny a v době, kdy uzly navržené v experimentu, před a po rutinní chemoterapii a chirurgii subjektů, bude patologické oddělení trvat 3 bílé sklíčka, z nichž každá měří 4 mikrony, nátěr a pečení gel a provedou imunohistochemické zastávání.

   Během období sledování subjekty dokončily chemoterapii a chirurgickou léčbu, ale stále dostávají sledování jejich stavu přežití a statusu onkologie a veškerá sledování bude v našem centru rutinní léčba.

3. Pro analýzu exprese CDH6, β - Cateninu a CDH17 v nádorové tkáni v nádorové tkáni použijeme FFPE v nádorové tkáni.

Imunohistochemické barvení:

Primární protilátka: CDH6 králičí monoklonální protilátka (D3T3I); P - Kateninová králičí monoklonální protilátka (D10A8); Mouse monoklonální protilátka CDH17 (vnitřní protilátka Xianxiang); Systém detekce sekundárních protilátek: DETICTION CONTINE CONTINE CONTINE CONTINE DETICTION KIT ； Řez protilátky: CST, 8112L,#38 ； Pozitivní fotografie: FFPE řezy nízkých, středních a vysokých expresních buněčných linií; Program barvení používá zavedenou metodu Xianxiang.

Patologická interpretace:

Použijte H-skóre pro semi kvantitativní analýzu. H-skóre je součet procenta buněčného barvení vynásobeného odpovídajícími hodnotami intenzity (0 = negativní, 1 = 1+, 2+, 3 = 3+), v rozmezí od 0 do 300.

Interpretace hodnot intenzity barvení nádorových buněk je následující:

Vysoká exprese (3+): Při zvětšení X4 bylo pozorováno silné barvení buněčné membrány a/nebo cytoplazmatické barvení; Mírná exprese (2+): barvení buněčné membrány bylo pozorováno při zvětšení X10 nebo X20; Při zvětšení X40 byla pozorována nízká exprese (1+): barvení membrány slabé buněčné membrány a/nebo cytoplazmatické barvení; Negativní (0): V nádorových buňkách nebylo pozorováno žádné barvení buněčné membrány a/nebo cytoplazmatické barvení.