Exploration du niveau d'expression de la protéine cadhérine 6 (CDH6) dans des échantillons de tumeurs osseuses malignes primaires et son application clinique dans l'évaluation du pronostic

1. Évaluer la faisabilité de l'utilisation de l'immunohistochimie pour détecter le niveau d'expression de CDH6 dans les lames blanches histologiques des patients atteints d'ostéosarcome et d'Ewing comme marqueur biologique pour la surveillance pronostique de la visite initiale du patient. Le formulaire de consentement éclairé pour la surveillance des échantillons a été signé en premier. Pendant la biopsie de la piqûre, les tissus frais (composante des tissus mous, pas le tissu osseux) avec un volume d'environ 1 cm3 ont été pris, fixés avec une solution de formol et des tranches de tissu (tranches blanches) avec une épaisseur de 5 microns ont été coupées, tracées et cuites au four. La coloration par immunohistochimie a été utilisée pour l'analyse d'expression CDH6 (XP) ® Cadherin-6 (D3T3i) Rabbit MAB Cat: # 48111, Technologie de l'inscription des cellules）。

2. Processus de traitement et suivi Le régime de chimiothérapie néoadjuvant de routine pour l'ostéosarcome dans notre centre comprend l'utilisation séquentielle du cisplatine, de la doxorubicine à haute dose, du méthotrexate et de l'ifosfamide, tandis que le régime VDC-IE est utilisé pour le sarcome d'Ewing (voir figure 3.1a, B pour plus de détails). En raison de l'hétérogénéité significative des cellules d'ostéosarcome, les sous-populations de cellules affectées par chaque médicament ne sont pas les mêmes, et il existe également des différences dans les sous-populations de cellules nécrotiques et lysées après un médicament. Le niveau d'expression de CDH6 dans les tranches de tissu des patients changera dynamiquement avec la sensibilité de la chimiothérapie. Lors de la réalisation d'évaluations cliniques, si vous en avez l'occasion, nous essaierons de comparer les changements des niveaux de CDH6 dans les coupes de tissus pour évaluer leur valeur pour la surveillance de l'efficacité.

   Les patients subissent généralement un traitement chirurgical après une chimiothérapie néoadjuvante, et la charge tumorale diminue fortement après la chirurgie. L'échantillon de tumeur brut obtenu pendant la chirurgie doit être conservé avec des échantillons de tissu tumoral qualifié (au moins 1 cm3 en volume). Pendant le processus de traitement tumoral, s'il existe une possibilité de chirurgie, de biopsie ou de résection du tissu tumoral doit être réalisé à nouveau pour surveiller les changements dans les niveaux d'expression de CDH6. L'évaluation clinique du traitement tumoral doit être effectuée tous les deux mois jusqu'à la fin de l'étude ou la mort du patient.

   L'ensemble de l'étude comprend une période de dépistage, la collecte de sang et la période de rétention des échantillons et la période de suivi. Tous les participants à l'étude doivent répondre à tous les critères d'inclusion et d'exclusion.

   Pendant la période de dépistage, les participants potentiels subiront une évaluation d'admissibilité à l'étude après avoir signé le formulaire de consentement éclairé. Les sujets doivent subir une évaluation radiographique de la maladie dans les 14 jours précédant la chimiothérapie néoadjuvante, y compris une TDM ou une IRM améliorée du site tumoral primaire, du scanner thoracique, de l'imagerie osseuse du corps entier ou du TEP du corps entier.

   Les sujets recevront une chimiothérapie et un traitement chirurgical en fonction de la routine de diagnostic et de traitement, et aux nœuds temporels conçus dans l'expérience, avant et après la chimiothérapie et la chirurgie de routine des sujets, le service de pathologie prendra 3 lames blanches, chacune mesurant 4 microns, en diffusant le gel de cuisson et effectuera un gel immunohistochimique.

   Au cours de la période de suivi, les sujets ont terminé la chimiothérapie et le traitement chirurgical, mais recevront toujours un suivi sur leur statut de survie et leur statut d'oncologie, et tout le suivi sera un traitement de routine dans notre centre.

3. Nous utiliserons des échantillons de tissu tumoral FFPE pour la coloration immunohistochimique pour analyser l'expression de CDH6, β - caténine et CDH17 dans le tissu tumoral.

Coloration immunohistochimique:

Anticorps primaire: anticorps monoclonal de lapin CDH6 (D3T3I); anticorps monoclonal de lapin β - caténine (D10A8); Anticorps monoclonal de souris CDH17 (anticorps interne Xianxiang); Système de détection d'anticorps secondaire: Bond Polymer Affine Kit de détection ； Dilluant des anticorps: CST, 8112L, # 38 ； Photos positives: sections FFPE de lignées cellulaires à expression faible, moyenne et élevée; Le programme de coloration utilise la méthode établie de Xianxiang.

Interprétation pathologique:

Utilisez H-Score pour une analyse semi-quantitative. Le score H est la somme du pourcentage de coloration cellulaire multipliée par les valeurs d'intensité correspondantes (0 = négative, 1 = 1 +, 2 = 2 +, 3 = 3 +), allant de 0 à 300.

L'interprétation des valeurs d'intensité de coloration des cellules tumorales est la suivante:

Expression élevée (3+): une forte coloration à membrane cellulaire et / ou une coloration cytoplasmique ont été observées sous un grossissement X4; Expression modérée (2+): une coloration à la membrane cellulaire a été observée à un grossissement x10 ou x20; Expression faible (1+): une coloration à la membrane cellulaire faible et / ou une coloration cytoplasmique ont été observées à un grossissement X40; Négatif (0): aucune coloration à la membrane cellulaire et / ou coloration cytoplasmique n'ont été observées dans les cellules tumorales.