Utforske ekspresjonsnivået til cadherin 6 -protein (CDH6) i primære ondartede bensvulstprøver og dets kliniske anvendelse i prognosevurdering

1. Evaluer muligheten for å bruke immunhistokjemi for å oppdage ekspresjonsnivået til CDH6 i histologiske hvite lysbilder av pasienter med osteosarkom og Ewings sarkom som en biologisk markør for prognostisk overvåking av pasientens første besøk var klinisk diagnostisert som høykvalitets osteosarcoma eller Ewing's Sarcoma. Det informerte samtykkeskjemaet for eksemplarovervåking ble signert først. Under punkteringsbiopsien ble friskt vev (bløtvevskomponent, ikke beinvev) med et volum på omtrent 1 cm3 tatt, fikset med formalinoppløsning og vevskiver (hvite skiver) med en tykkelse på 5 mikron ble kuttet, smurt og bakt. Immunohistokjemi-farging ble brukt for CDH6-ekspresjonsanalyse (XP) ® Cadherin-6 (D3T3I) Rabbit MAb Cat:#48111, CellSignaling Technology ）。

2. Behandlingsprosess og oppfølging Det rutinemessige neoadjuvant cellegiftregimet for osteosarkom i vårt sentrum inkluderer sekvensiell bruk av cisplatin, høydose doxorubicin, metotrexat og ifosfamid, mens VDC-ie-regimet brukes til ewing sarcoma (se figur 3.1a,, B for detaljer). På grunn av den signifikante heterogeniteten til osteosarkomceller, er underpopulasjonene av celler som er påvirket av hvert medikament ikke de samme, og det er også forskjeller i underpopulasjonene av nekrotiske og lyserte celler etter medisiner. Ekspresjonsnivået til CDH6 i pasientvevskiver vil dynamisk endres med følsomheten til cellegift. Mens vi gjennomfører kliniske evalueringer, vil vi prøve å sammenligne endringene i CDH6 -nivåer i vevsseksjoner for å vurdere deres verdi for effektivitetsovervåking.

   Pasienter gjennomgår vanligvis kirurgisk behandling etter neoadjuvant cellegift, og tumorbelastningen avtar kraftig etter operasjonen. Det grove tumorprøven oppnådd under operasjonen bør beholdes med kvalifiserte tumorvevsprøver (minst 1cm3 i volum). Under tumorbehandlingsprosessen, hvis det er en mulighet for kirurgi, bør biopsi eller reseksjon av tumorvev utføres igjen for å overvåke endringer i CDH6 -ekspresjonsnivåer. Klinisk evaluering av tumorbehandling bør utføres annenhver måned til slutten av studien eller pasientdød.

   Hele studien inkluderer en screeningsperiode, blodinnsamling og prøveoppbevaringstid og oppfølgingsperiode. Alle deltakere i studien må oppfylle alle inkluderings- og eksklusjonskriterier.

   I løpet av screeningsperioden vil potensielle deltakere gjennomgå kvalifiseringsvurdering for studien etter å ha signert det informerte samtykkeskjemaet. Personer må gjennomgå radiografisk evaluering av sykdommen innen 14 dager før neoadjuvant cellegift, inkludert forbedret CT eller MR på det primære tumorstedet, brystet vanlig skanning, ECT helkroppsbenavbildning eller PET/CT/CT.

   Forsøkspersonene vil få cellegift og kirurgisk behandling i henhold til diagnose- og behandlingsrutinen, og på de tidsnodene designet i eksperimentet, før og etter forsøkspersonenes rutinemessige cellegift og kirurgi, vil patologiavdelingen ta 3 hvite lysbilder, hver som måler 4 mikron, smør og bake -gel og utfører immunhistokjemisk farging.

   I løpet av oppfølgingsperioden har forsøkspersonene fullført cellegift og kirurgisk behandling, men vil fortsatt få oppfølging av overlevelsesstatus og onkologistatus, og all oppfølging vil være rutinemessig behandling i vårt senter.

3. Vi vil bruke FFPE tumorvevsprøver for immunhistokjemisk farging for å analysere ekspresjonen av CDH6, β - katenin og CDH17 i tumorvev.

Immunhistokjemisk farging:

Primært antistoff: CDH6 kaninmonoklonalt antistoff (D3T3I); β - Catenin kanin monoklonalt antistoff (D10A8); CDH17 Mouse monoklonalt antistoff (Xianxiang internt antistoff); Sekundært antistoffdeteksjonssystem: bindingspolymerrenningsdeteksjonssett ； Antistofffortynningsmiddel: CST, 8112L,#38 ； Positive bilder: FFPE -seksjoner av cellelinjer med lav, middels og høy ekspresjon; Fargingsprogrammet bruker den etablerte metoden til Xianxiang.

Patologisk tolkning:

Bruk H-poengsum for semi-kvantitativ analyse. H-score er summen av prosentandelen av cellefarging multiplisert med de tilsvarende intensitetsverdiene (0 = negativ, 1 = 1+, 2 = 2+, 3 = 3+), fra 0 til 300.

Tolkningen av verdier for tumorcellefargingsintensitet er som følger:

Høyt uttrykk (3+): sterk cellemembranfarging og/eller cytoplasmatisk farging ble observert under X4 -forstørrelse; Moderat ekspresjon (2+): Cellemembranfarging ble observert ved forstørrelse av X10 eller X20; Lavt uttrykk (1+): Svak cellemembranfarging og/eller cytoplasmatisk farging ble observert ved X40 -forstørrelse; Negativ (0): Ingen cellemembranfarging og/eller cytoplasmatisk farging ble observert i tumorceller.