Badanie poziomu ekspresji białka kadheryny 6 (CDH6) w pierwotnych próbkach nowotworów złośliwych i jego kliniczne zastosowanie w ocenie prognozy

1. Oceń wykonalność zastosowania immunohistochemii do wykrycia poziomu ekspresji CDH6 w histologicznych białych szkiełkach pacjentów z kostniakomięsakiem i mięsakiem Ewinga jako biologicznego markera monitorowania prognostycznego Początkowa wizyta pacjenta została klinicznie zdiagnozowana jako wysokiej jakości kostniakomię lub mięsak Ewing. Najpierw podpisano formularz świadomej zgody na monitorowanie próbek. Podczas biopsji nakłucia pobrano świeżą tkankę (składnik tkanki miękkiej, nie tkankę kostną) o objętości około 1 cm3, ustalono roztworem formaliny i plastry tkanki (białe skrawki) o grubości 5 mikronów, rozmazano i upieczono. Barwienie immunohistochemii zastosowano do analizy ekspresji CDH6 (XP) ® Cadherin-6 (D3T3I) Rabbit MAb Cat:#48111, Technologia ogniwalowania ）。

2. Proces leczenia i obserwacja Rutynowy schemat chemioterapii neoadiuwantowej dla kostniakomięsaka w naszym ośrodku obejmuje sekwencyjne stosowanie cisplatyny, wysokiej dawki doksorubicyny, metotreksatu i ifosfamidu, podczas gdy schemat VDC-IE stosuje się do arcyszu EWING (patrz rysunek 3.1.1A, B, aby uzyskać szczegółowe informacje). Ze względu na znaczącą heterogeniczność komórek kostniakomięsaka, subpopulacje komórek dotkniętych każdym lekiem nie są takie same, a także istnieją różnice w subpopulacjach komórek martwiczych i lizowanych po leku. Poziom ekspresji CDH6 w plasterkach tkanek pacjenta zmieni się dynamicznie wraz z wrażliwością chemioterapii. Podczas przeprowadzania ocen klinicznych, jeśli będziemy mieć możliwość, postaramy się porównać zmiany poziomów CDH6 w sekcjach tkanek, aby ocenić ich wartość monitorowania skuteczności.

   Pacjenci zwykle przechodzą leczenie chirurgiczne po chemioterapii neoadiuwantowej, a obciążenie guza gwałtownie zmniejsza się po zabiegu. Próbka nowotworu brutto uzyskana podczas operacji powinna zostać zachowana za pomocą wykwalifikowanych próbek tkanki nowotworowej (objętości co najmniej 1 cm3). Podczas procesu leczenia guza, jeśli istnieje możliwość operacji, biopsja lub resekcja tkanki nowotworowej należy ponownie wykonać w celu monitorowania zmian poziomów ekspresji CDH6. Ocena kliniczna leczenia guza należy przeprowadzać co dwa miesiące do końca badania lub śmierci pacjenta.

   Całe badanie obejmuje okres badań przesiewowych, zbieranie krwi i okres zatrzymywania próbek oraz okres obserwacji. Wszyscy uczestnicy badania muszą spełniać wszystkie kryteria włączenia i wykluczenia.

   W okresie badania przesiewowej potencjalni uczestnicy przejdą ocenę kwalifikowalności do badania po podpisaniu formularza świadomej zgody. Badani muszą poddać się oceny radiograficznej choroby w ciągu 14 dni przed chemioterapią neoadjuwantową, w tym wzmocnionym CT lub MRI pierwotnego miejsca guza, skanowania klatki piersiowej, obrazowania kości ECT lub PET/CT całego ciała.

   Badani otrzymają chemioterapię i leczenie chirurgiczne zgodnie z procedurą diagnozy i leczenia, a w czasie węzłów zaprojektowanych w eksperymencie, przed i po rutynowej chemioterapii i operacji, dział patologii przyjmie 3 białe szkiełka, każde z 4 mikronów, żel rozmazowy i pieca oraz wykona barwienia immunohistochemiczne.

   W okresie obserwacji badani zakończyli chemioterapię i leczenie chirurgiczne, ale nadal będą otrzymywać kontrolę nad statusem przeżycia i statusu onkologicznego, a wszystkie obserwacje będą rutynowe leczenie w naszym centrum.

3. Wykorzystamy próbki tkanki nowotworowej FFPE do barwienia immunohistochemicznego do analizy ekspresji CDH6, β - kateniny i CDH17 w tkance nowotworowej.

Barwienie immunohistochemiczne:

Pierwotne przeciwciało: królicze przeciwciało królicze CDH6 (D3T3I); β -kateninowe królicze przeciwciało monoklonalne (D10A8); Mysie przeciwciało monoklonalne CDH17 (wewnętrzne przeciwciało xianxiang); System wykrywania przeciwciał wtórnych: Zestaw wykrywania polimeru wiązania ； Rozcieńczenie przeciwciał: CST, 8112L,#38 ； Pozytywne zdjęcia: sekcje FFPE o niskich, średnich i wysokiej ekspresji linii komórkowych; Program barwienia wykorzystuje ustaloną metodę Xianxiang.

Interpretacja patologiczna:

Użyj wyniku H do analizy półpaństwowej. Score H jest sumą procentu barwienia komórek pomnożonego przez odpowiednie wartości intensywności (0 = ujemne, 1 = 1+, 2 = 2+, 3 = 3+), w zakresie od 0 do 300.

Interpretacja wartości intensywności barwienia komórek nowotworowych jest następująca:

Wysoka ekspresja (3+): Silne barwienie błony komórkowej i/lub barwienie cytoplazmatyczne zaobserwowano przy powiększeniu x4; Umiarkowana ekspresja (2+): Barwienie błony komórkowej zaobserwowano przy powiększeniu x10 lub x20; Niska ekspresja (1+): Słabe barwienie błony komórkowej i/lub barwienie cytoplazmatyczne zaobserwowano przy powiększeniu x40; Negatywne (0): W komórkach nowotworowych nie zaobserwowano barwienia błony komórkowej i/lub barwienia cytoplazmatycznego.