1 차 악성 뼈 종양 시편에서 Cadherin 6 단백질 (CDH6)의 발현 수준 및 예후 평가에서의 임상 적용

1. 예후 모니터링을위한 생물학적 마커로서 골육종 및 Ewing의 육종 환자의 조직 학적 흰색 슬라이드에서 CDH6의 발현 수준을 검출하기 위해 면역 조직 화학을 사용하는 타당성을 평가하여 환자의 초기 방문은 고급 골수 육종 또는 Ewing의 육종으로 임상 적으로 진단되었다. 시편 모니터링에 대한 사전 동의서 양식이 먼저 서명되었습니다. 펑크 생검 동안, 약 1cm3의 부피를 갖는 신선한 조직 (뼈 조직이 아닌 연조직 성분, 뼈 조직이 아닌 연조직 구성 요소)을 채취하고 포르말린 용액으로 고정시키고 두께가 5 미크론의 조직 슬라이스 (흰색 슬라이스)를 잘라 내고, 번지고, 구운다. 면역 조직 화학 염색은 CDH6 발현 분석 (XP) ® Cadherin-6 (D3T3I) 토끼 MAB 고양이에 사용되었다.

2. 치료 과정 및 추적 관찰 경관에 대한 일상적인 신 보조 화학 요법 요법은 시스플라틴, 고용량 독소루비신, 메토트렉세이트 및 IFOSFamide의 순차적 사용을 포함하는 반면, VDC-I 요법은 Ewing 육종에 사용됩니다 (그림 3.1.1A, 참조. 자세한 내용은 B). 골육종 세포의 상당한 이질성으로 인해, 각 약물에 의해 영향을받는 세포의 소집단은 동일하지 않으며, 약물 치료 후 괴사 및 용해 된 세포의 하위 집단에도 차이가있다. 환자 조직 슬라이스에서 CDH6의 발현 수준은 화학 요법의 민감도와 동적으로 변화합니다. 임상 평가를 수행하는 동안 기회가 주어지면 조직 섹션에서 CDH6 수준의 변화를 비교하여 효능 모니터링에 대한 가치를 평가하려고 노력할 것입니다.

   환자는 일반적으로 신 보조 화학 요법 후에 외과 적 치료를 받고 수술 후 종양 부담이 급격히 감소합니다. 수술 중에 얻은 총 종양 시편은 자격을 갖춘 종양 조직 샘플 (적어도 1cm3)으로 유지되어야합니다. 종양 처리 과정에서, 수술의 기회가있는 경우, 종양 조직의 생검 또는 절제술을 다시 수행하여 CDH6 발현 수준의 변화를 모니터링해야한다. 종양 치료의 임상 평가는 연구가 끝날 때까지 2 개월마다 수행되어야합니다.

   전체 연구에는 선별 기간, 혈액 수집 및 표본 보유 기간 및 후속 기간이 포함됩니다. 연구의 모든 참가자는 모든 포함 및 제외 기준을 충족해야합니다.

   선별 기간 동안 잠재적 인 참가자는 사전 동의서에 서명 한 후 연구에 대한 자격 평가를받습니다. 대상체는 1 차 종양 부위의 강화 된 CT 또는 MRI, 흉부 일반 스캔 CT, ECT 전신 뼈 영상 또는 전신 PET/CT를 포함하여 신 보조 화학 요법 전 14 일 이내에 질병의 방사선 학적 평가를 받아야합니다.

   피험자들은 진단 및 치료 루틴에 따라 화학 요법 및 외과 적 치료를 받고, 실험에서 설계된 시점에서 피험자의 일상적인 화학 요법 및 수술 전후에 병리학 부서는 각각 4 마이크론을 측정하고 겔을 번짐 및 굽은 채취를 수행합니다.

   추적 관찰 기간 동안, 피험자들은 화학 요법 및 외과 적 치료를 완료했지만, 생존 상태 및 종양학 상태에 대한 후속 조치를받을 것이며, 모든 후속 조치는 우리 센터에서 일상적인 치료가 될 것입니다.

3. 우리는 면역 조직 화학 염색을 위해 FFPE 종양 조직 샘플을 사용하여 종양 조직에서 CDH6, β -catenin 및 CDH17의 발현을 분석 할 것이다.

면역 조직 화학 염색 :

1 차 항체 : CDH6 토끼 모노클로 날 항체 (D3T3I); β- 카테닌 토끼 모노클로 날 항체 (D10A8); CDH17 마우스 모노클로 날 항체 (Xianxiang 내부 항체); 2 차 항체 검출 시스템 : 결합 중합체 정제 검출 키트 ； 항체 희석제 : CST, 8112L,#38 ； 양성 사진 : FFPE 섹션은 저, 중간 및 고 발현 세포주; 염색 프로그램은 Xianxiang의 확립 된 방법을 사용합니다.

병리학 적 해석 :

반 정량 분석에 H- 점수를 사용하십시오. H- 점수는 셀 염색의 백분율에 상응하는 강도 값 (0 = 음수, 1 = 1+, 2 = 2+, 3 = 3+)을 곱한 것입니다.

종양 세포 염색 강도 값의 해석은 다음과 같습니다.

높은 발현 (3+) : 강한 세포막 염색 및/또는 세포질 염색은 X4 배율 하에서 관찰되었고; 중간 정도의 발현 (2+) : 세포막 염색은 X10 또는 X20 배율에서 관찰되었다; 낮은 발현 (1+) : 약한 세포막 염색 및/또는 세포질 염색이 X40 배율에서 관찰되었고; 음성 (0) : 종양 세포에서 세포막 염색 및/또는 세포질 염색은 관찰되지 않았다.