Untersuchung des Expressionsniveaus von Cadherin 6 -Protein (CDH6) in primären malignen Knochentumorproben und seiner klinischen Anwendung bei der Prognosebewertung

1. Bewertung der Machbarkeit der Verwendung der Immunhistochemie zur Erkennung des Expressionsniveaus von CDH6 in histologischen weißen Folien von Patienten mit Osteosarkom und Ewings Sarkcoma als biologischer Marker für die prognostische Überwachung des anfänglichen Besuchs des Patienten wurde klinisch als hochwertiges Osteosarcoma oder Ewing-Sarcoma-Sarcoma diagnostiziert. Das Formular zur Einverständniserklärung für die Probenüberwachung wurde zuerst unterzeichnet. Während der Punktionsbiopsie wurde frisches Gewebe (Weichgewebekomponente, nicht Knochengewebe) mit einem Volumen von etwa 1 cm3 entnommen, mit Formalinlösung fixiert, und Gewebescheiben (weiße Scheiben) mit einer Dicke von 5 Mikrometern wurden geschnitten, verschmiert und gebacken. Die Immunhistochemie-Färbung wurde für die CDH6-Expressionsanalyse (XP) ® Cadherin-6 (D3T3I) Kaninchen-MAb-Katze verwendet:#48111, Cellsignaling-Technologie ）。

2. Behandlungsprozess und Follow-up des routinemäßigen neoadjuvanten Chemotherapie-Regimes für Osteosarkom in unserem Zentrum umfasst die sequentielle Verwendung von Cisplatin, hochdosis Doxorubicin, Methotrexat und Ifosfamid, während das VDC-IE-Regime für Ewing-Sarcoma verwendet wird (siehe Abbildung 3.1.1a, B für Details). Aufgrund der signifikanten Heterogenität von Osteosarkomzellen sind die von jedem Arzneimittel betroffenen Subpopulationen von Zellen nicht gleich, und es gibt auch Unterschiede in den Subpopulationen von nekrotischen und lysierten Zellen nach dem Medikament. Das Expressionsniveau von CDH6 in Patientengewebeschnitten verändert sich dynamisch mit der Empfindlichkeit der Chemotherapie. Bei der Durchführung klinischer Bewertungen werden wir bei der Gelegenheit versuchen, die Änderungen der CDH6 -Spiegel in Gewebeabschnitten zu vergleichen, um ihren Wert für die Wirksamkeitsüberwachung zu bewerten.

   Die Patienten werden normalerweise nach einer neoadjuvanten Chemotherapie chirurgisch behandelt, und die Tumorbelastung nimmt nach der Operation stark ab. Die während der Operation erhaltene Bruttentumorprobe sollte mit qualifizierten Tumorgewebeproben (mindestens 1 cm3 Volumen) beibehalten werden. Während des Tumorbehandlungsprozesses sollte bei der Operation eine Gelegenheit zur Operation bestehen, Biopsie oder Resektion von Tumorgewebe erneut durchgeführt werden, um Veränderungen der CDH6 -Expressionsniveaus zu überwachen. Die klinische Bewertung der Tumorbehandlung sollte alle zwei Monate bis zum Ende der Studie oder des Todes des Patienten durchgeführt werden.

   Die gesamte Studie umfasst eine Screening-Periode, eine Blutsammlung und eine Probenretentionsperiode sowie eine Nachbeobachtungszeit. Alle Teilnehmer der Studie müssen alle Einschluss- und Ausschlusskriterien erfüllen.

   Während des Screening -Zeitraums werden potenzielle Teilnehmer nach der Unterzeichnung des Formulars für die Einverständniserklärung in der Berechtigung für die Studie berechtigt. Die Probanden müssen innerhalb von 14 Tagen vor der neoadjuvanten Chemotherapie eine radiologische Bewertung der Krankheit unterziehen, einschließlich einer verstärkten CT oder MRT der Primärtumorstelle, der Brustschalt-CT, der ECT Ganzkörper-Knochenbildgebung oder der Ganzkörper-PET/CT.

   Die Probanden erhalten eine Chemotherapie und eine chirurgische Behandlung gemäß der Diagnose- und Behandlungsroutine, und zu den im Experiment entworfenen Knoten vor und nach der Routine -Chemotherapie und -operation der Probanden wird die Pathologie -Abteilung 3 weiße Objektträger, die jeweils 4 Mikrometer messen, verschmieren, und backen Gelgel und führen immunohistochemischen Flecken durch.

   Während der Nachbeobachtungszeit haben die Probanden die Chemotherapie und eine chirurgische Behandlung abgeschlossen, erhalten jedoch weiterhin Follow-up zu ihrem Überlebensstatus und ihrem Onkologiestatus, und die gesamte Follow-up wird in unserem Zentrum eine routinemäßige Behandlung sein.

3. Wir werden FFPE -Tumorgewebeproben für eine immunhistochemische Färbung verwenden, um die Expression von Cdh6, β - Catenin und Cdh17 im Tumorgewebe zu analysieren.

Immunhistochemische Färbung:

Primärer Antikörper: Monoklonaler CDH6 -Kaninchenantikörper (D3T3I); β - Catenin -Kaninchen -monoklonaler Antikörper (D10A8); CDH17 -monoklonaler Maus -Antikörper (interner Antikörper von Xianxiang); Sekundäres Antikörperdetektionssystem: Bindungspolymer -Refin -Detektionskit ； Antikörperverdünnung: CST, 8112L,#38 ； Positive Fotos: FFPE -Abschnitte mit niedrigem, mittlerem und hohem Expressionszelllinien; Das Färbungsprogramm verwendet die etablierte Methode von Xianxiang.

Pathologische Interpretation:

Verwenden Sie H-Score für die semi-quantitative Analyse. H-Score ist die Summe des Prozentsatzes der Zellfärbung multipliziert mit den entsprechenden Intensitätswerten (0 = negativ, 1 = 1+, 2 = 2+, 3 = 3+) von 0 bis 300.

Die Interpretation der Intensitätswerte der Tumorzellenfärbung ist wie folgt:

Hohe Expression (3+): Eine starke Zellmembranfärbung und/oder eine zytoplasmatische Färbung wurden unter X4 -Vergrößerung beobachtet; Mäßige Expression (2+): Die Zellmembranfärbung wurde bei x10 oder x20 -Vergrößerung beobachtet; Niedrige Expression (1+): Bei X40 -Vergrößerung wurden eine schwache Zellmembranfärbung und/oder eine zytoplasmatische Färbung beobachtet; Negative (0): In Tumorzellen wurde keine Zellmembranfärbung und/oder eine zytoplasmatische Färbung beobachtet.